Bài giảng Nghiên cứu đánh giá hoạt tính ức chế sự tăng sinh, di cư và xâm lấn của Prodigiosin trên dòng tế bào ung thư gan HEP3B in vitro - TS. Đỗ Minh Trung

Bài giảng Nghiên cứu đánh giá hoạt tính ức chế sự tăng sinh, di cư và xâm lấn của Prodigiosin trên dòng tế bào ung thư gan HEP3B in vitro do TS. Đỗ Minh Trung trình bày các nội dung chính sau: Đánh giá hoạt tính Prodigiosin ức chế sự tăng sinh tế bào ung thư Hep 3B; Đánh giá khả năng ức chế sự di cư và xâm lấn tế bào ung thư Hep 3B của prodigiosin. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm nội dung chi tiết.

NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ

SỰ TĂNG SINH, DI CƢ VÀ XÂM LẤN CỦA

PRODIGIOSIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO

UNG THƢ GAN HEP3B IN VITRO

Hà Nội – Tháng 12.2020

HỘI NGHỊ KHOA HỌC NỘI KHOA TOÀN QUỐC 2020:

Báo cáo viên: TS Đỗ Minh Trung Đơn vị: Viện NC Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y

Kết quả phục hồi trên 14 bệnh nhân

o Campas.C et.al (2003): thử nghiệm PG trên

mẫu của 32 BN ung thư máu dòng lympho

mãn tính, kết quả Prodigiosins đã gây chết

dòng tế bào lympho này

o Maheswarappa.G et.al (2013): khả năng ức

chế miễn dịch trên tế bào lympho thu nhận từ

máu ngoại vi người

Serratia marcescens

Nguồn://fineartamerica.com/fe atured/1-serratia-marcescens

 PG từ vi khuẩn tái tổ hợp: NC tách dòng và biểu hiện PG

trên E coli (Steven A Dauenhauer et.al.,1984); NC Biểu

hiện PG trên P putida (Andreas Domröse et.al., 2015)

 Trong những năm gần đây, prodigiosin nguồn được tổng

hợp bởi Serratia sp, PG được quan tâm nhiều

 Hiện nay người ta đã phát hiện nhiều tác dụng mới của PG:

 Kháng nhiều dòng tế bào ung thư

 Ức chế miễn dịch

 Gây ra apoptosis ở các dòng tế bào ung thư tạo máu và không ảnh hưởng tới các tế bào lành

 Ức chế sự tăng sinh, di cư và xâm lấn của tế bào ung thư

(Zhang et.al.,2011; Yongze Liua et.al., 2018)

Kháng ung thư

 Con đường axit hóa nội

bào

PG có khả năng kích thích kênh H+/

Cl- giúp tách rời chuyển vị proton,

gây ra axit hóa nội bào và cuối

cùng là apoptosis

 Con đường ức chế chu kỳ tế bào

Vai trò của prodigiosin trong cuối pha G1 được thể hiện qua sự kích tính sản sinh cyclin E, cdk2, và cdk4, tất cả

được biểu hiện ở cuối pha G1 từ giữa đến cuối chu kỳ tế bào

 Con đường phân mảnh ADN

Với sự có mặt của đồng, chúng thúc đẩy quá trình oxy hóa sự phân mảnh DNA Ngoài ra, PG được vận chuyển vào tế bào nhanh chóng và được tích lũy trong nhân, cho phép PG tương tác với ADN

 Con đường kích hoạt các caspase

PG có nguồn gốc từ Serratia

marcescens được báo cáo rằng nó có

thể làm tăng nồng độ caspase-3 trong các tế bào ung thư bạch cầu

 Kem chống nắng

(Suryawanshi et.al (2015)

 Công nghệ thực phẩm

(Shahla Namazkar et.al (2013)

PG được đóng gói thành các viên nang

sấy khô có sử dụng kappa-carrageenan

và maltodextrin làm chất phủ Các viên

nang đã được áp dụng thành công cho

sữa chua, sữa và đồ uống có ga

Quá trình sinh tổng hợp PG

PG được tạo ra

từ phản ứng giữa MAP và MBC với sự xúc tác của PigC và ATP

Mục tiêu nghiên cứu:

1 Đánh giá hoạt tính Prodigiosin ức chế sự tăng sinh tế bào ung thư Hep 3B

2 Đánh giá khả năng ức chế sự di cư và xâm lấn tế bào ung thư Hep 3B của prodigiosin

CHƯƠNG 2

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NC

2.1 Đối tƣợng nghiên cứu

 Chế phẩm Prodigiosin được thu

nhận từ dịch môi trường nuôi cấy vi khuẩn tái tổ hợp Serratia marcescens HVQY

(Đề tài mã số 07.17/CNSHCB do Học viện Quân y chủ trì)

 Dòng Tế bào ung thư gan HEP3B,

(ATCC, Mỹ) được sử dụng làm mô hình đánh giá hoạt tính PG

 Xác định chiều cao của peak, thời gian lưu từ đó

có thể định tính và định lượng prodigiosin

Nuôi cấy tế bào

Đo OD ở 595nm trên Hệ thống DTX880

Phản ứng MTT

IC50

 Căn cứ kết quả MTT

 Tính tỷ lệ % tế bào sống trong các giếng có PG so với nhóm chứng

 Lập phương trình hồi quy tuyến tính tính giữa tỷ lệ tế bào sống (Y, %) và

(a,b lấy từ phương trình hồi quy tuyến tính Y = a + bX)

 Đánh giá hoạt tính PG trên các dòng tế bào ung thƣ

Đánh giá khả năng ức chế xâm lấn và di cư của PG

Nuôi cấy tế

bào

Rạch bề mặt tế bào Tiếp xúc PG

Quan sát dưới kính hiển vi

 Xử lý số liệu:

Các số liệu: chương trình excel Prism để tính giá trị trung bình,

độ lệch chuẩn, p

 Địa điểm nghiên cứu:

Viện Nghiên cứu Y Dược học Quân sự, HVQY

CHƯƠNG 3

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Hàm lƣợng Pg (mg/ml)

Tổng hàm lƣợng Pg (mg)

Kết quả xác định cấu trúc của sản phẩm

khuẩn tái tổ hợp

(Viện Hóa học và Hợp chất thiên nhiên)

3.2 Kết quả thu nhận Prodigiosin

Bào chế hệ phân tán rắn của PG

3.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CỦA PG TRÊN

DÒNG TẾ BÀO UNG THƢ GAN HEP 3B

1 Kết quả đánh giá hoạt tính của PG đến khả năng tăng

sinh của trên tế bào ung thƣ thanh quản HEP 3B

Hình ảnh tế

bào HEP 3B

tiếp xúc với

PG

Nồng độ PG

(μg/ml)

Giá trị đo OD (595nm)(Means ±

Nồng độ PG

(μg/ml)

Tỷ lệ tế bào sống (%)

61.7 70.7

83 84.8

83.4

y = -7.8045x + 87.549 R² = 0.9729

IC 50= 4.8

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

1 Kết quả đánh giá hoạt tính của PG đến khả năng tăng

sinh của trên tế bào ung thƣ gan HEP 3B

Kết quả đánh giá hoạt tính của PG đến khả năng di cƣ và xâm lấn của tế bào ung thƣ gan HEP 3B

Hình ảnh tế bào HEP 3B tiếp xúc PG

Nồng độ

PG (μg/ml)

z 3.4 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CỦA PG TRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƢ THANH QUẢN HEP 2

1 Kết quả đánh giá hoạt tính của pG trên dòng tb ung thƣ thanh quản HEP 2

Nồng độ PG

(μg/ml)

Giá trị đo OD (595nm)(Means ±

Kết quả thí nghiệm MTT trên mẫu HEP 2

1 Kết quả đánh giá hoạt tính của PG trên dòng tb ung thƣ thanh quản HEP 2

Kết quả đánh giá hoạt tính của PG trên dòng tế bào ung thƣ thanh quản HEP 2

21.16 26.47

47.18

73.81 75.17

81.21

78.28 82.2

y = -6.6506x + 87.079 R² = 0.9386

IC 50= 5.6

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Kết quả đánh giá hoạt tính của PG đến khả năng di cƣ và xâm lấn của tế bào ung thƣ thanh quản HEP 2 in vitro

Hình ảnh tế bào HEP 2 tiếp xúc PG

Nồng độ

PG (μg/ml)

Kết quả đánh giá tác dụng ức chế tế bào Vero:

 Xâm lấn và di căn khối u ác tính là giai đoạn quan trọng

nhất của sự tiến triển khối u Chìa khóa để kiểm soát sự phát triển của khối u là ức chế sự tăng sinh tế bào ung thư và di căn

ung thư HEP 2 và HEP 3B

năng ức chế sự tăng sinh, xâm lấn và di cư của của các tế bào ung thư vòm họng

apoptosis tế bào lympho B và T trên mẫu bệnh bạch cầu lympho mãn tính

apoptosis trong các tế bào ung thư biểu mô đại trạng ở

người DLD-1 và SW-620, HGT-1

1 Đánh giá đƣợc khả năng ức chế của prodigiosin trên dòng tế bào ung thƣ HEP 3B

o PG ức chế sự sinh trưởng của các tế bào ung thư, làm biến đổi hình dạng tế bào ung thư sau 24 giờ tiếp xúc

o Giá trị 50% (IC50) của dòng tế bào HEP 3B là: 4,8 μg/ml

2 Đánh giá đƣợc khả năng ức chế sự xâm lấn, di cƣ của PG trên dòng tế bào ung thƣ HEP 3B

o PG có hoạt tính ức chế sự di cư và xâm lấn của tế bào HEP 2 và HEP 3B ở nồng độ thử nghiệm

o Sau 48 giờ thử nghiệm, dòng tế bào HEP 2 và HEP 3B diện tích che phủ trên bề mặt dụng cụ đĩa nuôi cấy bị giảm so với nhóm đối chứng

có ý nghĩa thống kê với p < 0,05

KẾT LUẬN

Xin trân trọng cảm ơn !

Nhóm nghiên cứu:

Đỗ Minh Trung, Đỗ Quyết

Hồ Anh Sơn, Phạm Thế Tài

Nguyễn Lĩnh Toàn, Đỗ Thị Tuyên

Mai Thị Minh Ngọc, Nguyễn Thị Ngọc Hà

NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ

SỰ TĂNG SINH, DI CƢ VÀ XÂM LẤN CỦA

PRODIGIOSIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO

UNG THƢ GAN HEP3B IN VITRO

Hà Nội – Tháng 12.2020

HỘI NGHỊ KHOA HỌC NỘI KHOA TOÀN QUỐC 2020

Báo cáo viên: TS Đỗ Minh Trung Đơn vị: Viện NC Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y