NGHIÊN cứu tác ĐỘNG GIẢM ĐAU, KHÁNG VIÊM của các CAO PHÂN đoạn dược LIỆU lá ĐẮNG (VERNONIA AMYGDALINA DEL ) TRÊN CHUỘT NHẮT

ĐẶT VẤN ĐỀMỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1 • Chiết cao toàn phần Lá đắng • Chiết cao phân đoạn Lá đắng với các dung môi: hexan, cloroform, EA và n-butanol n-2 • Khảo sát tác động giảm đau của các cao p

BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC

ĐỀ TÀI

NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG GIẢM ĐAU, KHÁNG VIÊM CỦA CÁC CAO PHÂN ĐOẠN DƯỢC LIỆU LÁ ĐẮNG

(VERNONIA AMYGDALINA DEL.) TRÊN CHUỘT NHẮT

ĐẠI HỌC LẠC HỒNG – KHOA DƯỢC – BỘ MÔN DƯỢC LÝ/ DƯỢC LÂM SÀNG

Sinh viên thực hiện: Đinh Diệu Quyên Hoàng Thúy Hiền Giảng viên hướng dẫn: ThS Đoàn Văn Viên ThS Ngô Văn Cường

ĐẶT VẤN ĐỀ

“In Australia, the annual cost of chronic pain

was estimated in 2007 to be $10,847 per person”

- Nicholas Henschke et al (2015), “The Epidemiology and

Economic Consequences of Pain”, Mayo Clinic

“Diclofenac and etoricoxib together account for

approximately one-third of all sales of NSAIDs

in the 15 countries included in our analysis”

- Patricia McGettigan, David Henry, “Use of Non-Steroidal

Anti-Inflammatory Drugs That Elevate Cardiovascular Risk: An

Examination of Sales and Essential Medicines Lists in Low-,

Middle-, and High-Income Countries”, Plos Medicine

ĐẶT VẤN ĐỀ

Khai thác hoạt tính kháng viêm,

giảm đau từ dược liệu

Hiệu quả

ĐẶT VẤN ĐỀMỤC TIÊU ĐỀ TÀI

1

• Chiết cao toàn phần Lá đắng

• Chiết cao phân đoạn Lá đắng với các dung môi: hexan, cloroform, EA và n-butanol

n-2

• Khảo sát tác động giảm đau của các cao phân đoạn thu được trên chuột nhắt trắng theo mô hình gây đau quặn bằng acid acetic 0,7%

3

• Khảo sát tác động kháng viêm của các cao phân đoạn thu được trên chuột nhắt trắng theo mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenan 1%

Bộ Cúc (Asterales)

Họ Cúc (Asteraceae)

Chi Vernonia

Loài Vernonia amygdalina Del.

 Tác dụng dược lý: hạ đường huyết; điều trị rối loạn

lipid huyết; hạ huyết áp; chống oxy hóa; bảo vệ gan;

giảm đau, kháng viêm; kháng ký sinh trùng…

• Sesquiterpen lacton: Vernolid; Vernodalol; Vernodalin; Vernomygdin…

• Acid béo: acid linoleic …

• Steroid alcol

Tại Việt Nam

• Luteolin – 7 – O – glycoside; Cynarin; Vitexin (Hồ Thị Thúy Linh - 2016)

• Vernoniacum B; Vernoniosid B1, B2; Vernomyosit C, C1; Vernomyosit E (Phạm Việt Cường và cộng sự - 2019)

TỔNG QUAN

3 TỔNG QUAN VỀ ĐAU

Non - opioid (Paracetamol, NSAIDs…)

+/- thuốc hỗ trợ

Nguồn: WHO's cancer pain ladder for adults

(tiểu cầu)

PG-I2 (niêm mạc

dạ dày…)

PG-E2 (thận…)

Kích thích viêm

COX 2 (enzym cảm ứng)

Proteases Các yếu tố gây viêm

khác

PGs

Viêm

NSAIDs

TỔNG QUAN

3 MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, KHÁNG VIÊM

 Mô hình giảm đau

1 Gây đau bằng acid acetic

2 Gây đau bằng formalin

3 Gây đau bằng nhiệt

4 Nhúng đuôi chuột

5 Gây đau tại tổ chức viêm

 Mô hình kháng viêm

1 Gây phù bàn chân chuột

2 Gây phù tai chuột

3 Gây viêm màng phối

4 Gây ban đo với tia tử ngoại

5 Sàng lọc chất kháng viêm qua thụ thể toll like 4 (TLR4) trên màng tế bào macrophage chuột

6 Tạo u hạt

7 Gây viêm đa khớp

DƯỢC LIỆU

12

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Dược liệu nghiên cứu Động vật thử nghiệm

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Khảo sát

sơ bộ thành phần hóa học

Chiết ngấm kiệt với cồn 70%

Cô trên bếp cách thủy

Dich chiết n-hexan Dịch chiết cloroform

Dịch chiết EA

Dịch chiết n-butanol

Cao n-hexan

Cao cloroform Cao EA

Cao n-butanol Cao nước

n-hexan cloroform EA

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Chiết ngấm kiệt dược

liệu Lá đắng

Lắc phân bố dung môi ethyl acetat Cô quay thu hồi dung môi

Cao phân đoạn n-hexan

KẾT QUẢ - BÀN LUẬNHIỆU SUẤT CHIẾT CAO TOÀN PHẦN VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN

Khối lượng (g) Độ ẩm (%) Hiệu suất (%)

Cao nước 1008,05 3,56 79,81

Cao n-butanol Cao nước

(++): có nhiều (+/-): phản ứng không rõ ràng : Không có hợp chất trong dịch chiết : Không thực hiện phản ứng

DƯỢC LÝ

TÁC ĐỘNG GIẢM ĐAU

19

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUKHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CAO TOÀN PHẦN LÁ ĐẮNG

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CAO TOÀN PHẦN LÁ ĐẮNG

 Quy đổi liều cho chuột uống

n-bu 40 Nước 400 Para 50

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUKHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CAO LÁ ĐẮNG

KẾT QUẢ - BÀN LUẬNĐÁNH GIÁ TRỌNG LƯỢNG CHUỘT TRONG QUÁ TRÌNH THỬ NGHIỆM

Lô bệnh

Para 50 Cao TP

500

n-hex 15

CF 15 EA 15 EA 30 n-bu 20 n-bu 40 Nước

400 0

KẾT QUẢ - BÀN LUẬNĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG GIẢM ĐAU CỦA CAO TOÀN PHẦN LÁ ĐẮNG

5-10 phút 20-25 phút 30-35 phút 0

2 4 6 8 10 12 14 16

Lô bệnh Para 50 Cao TP 500

KẾT QUẢ - BÀN LUẬNĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG GIẢM ĐAU CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

KẾT QUẢ - BÀN LUẬNĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG GIẢM ĐAU CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

Cao n-butanol Cao nước

-DƯỢC LÝ

TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM

29

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

KHẢO SÁT TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM LÁ ĐẮNG TRÊN MÔ HÌNH GÂY PHÙ CHÂN CHUỘT BẰNG CARRAGEENAN

Máy đo thể tích chân chuột

X: Đô ̣ sưng phù chân tính theo

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

SAU

TRƯỚC

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

KHẢO SÁT TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM LÁ ĐẮNG TRÊN MÔ HÌNH GÂY PHÙ CHÂN CHUỘT BẰNG CARRAGEENAN

Chọn chuột Đo thể tích chân

sinh lý

Gây viêm với carrageenan

Đo thể tích chân sau 3 giờ gây viêm

Chọn chuột có

độ phù chân tăng trên 50%

Lô thử nghiệm cao toàn phần

Lô khảo sát cao phân đoạn

Phân lô chuột

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

THỬ NGHIỆM ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO TOÀN PHẦN

LÁ ĐẮNG

• Lô chứng âm (n=9): nước cất (po)

• Lô Ibu 7,5 (n=8): ibuprofen liều 7,5 mg/kg (po)

• Lô cao TP (n=8): cao toàn phần liều 1000 mg/kg (po)

A

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

• Lô chứng âm (n=9): nước cất (po)

• Lô Ibu 7,5 (n=8): ibuprofen liều 7,5 mg/kg (po)

• Lô n-hex (n=8): cao n-hexan liều 30 mg/kg (po)

• Lô CF (n=8): cao chloroform liều 30 mg/kg (po)

• Lô EA (n=9): cao ethyl acetat liều 30 mg/kg (po)

• Lô n-bu (n=8): cao n-butanol liều 80 mg/kg (po)

• Lô nước (n=8): cao nước liều 800 mg/kg (po)

B

KẾT QUẢ - BÀN LUẬNĐÁNH GIÁ TRỌNG LƯỢNG CHUỘT TRONG QUÁ TRÌNH THỬ NGHIỆM

Chứng

âm Ibu 7,5 Cao TP 1000 EA 30 Cao nước 800 n-bu 80 n-hex 30 CF 30

0 5 10 15 20 25

Đồ thị biểu diễn trọng lượng chuột sinh lý vào ngày 0

và trọng lượng chuột sau thử nghiệm vào ngày 6

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao toàn phần Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao phân đoạn n-hexan Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao phân đoạn cloroform Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao phân đoạn n-butanol Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao phân đoạn nước Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao phân đoạn ethyl acetat Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

B

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0)

và 30 phút sau uống cao phân đoạn Lá đắng mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ ĐẮNG

B

Đồ thị biểu diễn phần trăm độ giảm sưng phù chân chuột sau 3 giờ tiêm carrageenan (ngày 0) và 30 phút sau

uống cao toàn phần và cao ethyl acetat mỗi ngày (trong 6 ngày)

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN

Nguồn: A L Valverde và cộng sự (2001), “Analgesic & anti-inflammatory actives of

vernonioside B2 from Vernonia condensata”, Phytotherapy Research

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN

Nguồn: Megumi Funakoshi-Tago và cộng sự (2011), “Anti-inflammatory activity of structurally related

flavonoids, Apigenin, Luteolin and Fisetin”, International Immunopharmacology

KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ

 Kết luận – Dược liệu

ngấm kiệt với 70 lít cồn 70%

44,11 g cao ethyl acetat; 109,43 g cao n-butanol và 1008,5 cao nước còn lại

polyphenol, flavonoid, saponin, anthranoid và chất khử

KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ

 Kết luận – Dược lý

• Khảo sát tác động giảm đau: cao n-butanol liều 40 mg/kg và cao nước liều 400

mg/kg cho tác động giảm đau tương đương paracetamol

viêm tương đương ibuprofen

• Phân lập và xác định cấu trúc saponin trong cao ethyl acetat và n-butanol.

• Nghiên cứu các hoạt tính dược lý khác của cao toàn phần và cao phân đoạn Lá đắng như hạ huyết áp, giảm đường huyết, hạ lipid máu, kháng khuẩn…

CHÂN THÀNH CẢM ƠN

QUÝ THẦY CÔ

ĐÃ QUAN TÂM THEO DÕI