Tài liệu Xác định hoạt tính quang hoá của lục lạp tách rời pptx

Bài thực hành 5 Xác định hoạt tính quang hoá của lục lạp tách rời 1.. Nguyên tắc của phương pháp Lục lạp tách rời khỏi lá bằng các dung dịch dinh dưỡng thích hợp, khi được chiếu sáng

Bài thực hành 5

Xác định hoạt tính quang hoá của lục lạp tách rời

1 Nguyên tắc của phương

pháp

Lục lạp tách rời khỏi lá bằng các

dung dịch dinh dưỡng thích hợp, khi được chiếu sáng có thể thực hiện

được một phần các phản ứng quang hợp, cụ thể là có thể thực hiện được các phản ứng quang phân li nước

giải phong oxi và có thể khử các

chất, nếu có các chất nhận điện tử nhân tạo, nhờ H + và e của nước

Người ta gọi phản ứng của lục lạp tách rời này là phản ứng Hill

Phản ứng diễn ra như sau:

A + H2O =(ánh sáng, lục lạp)=>

AH2 + 1/2 O2

(A - chất nhận điện tử, Ví dụ: DCPIP

- dichlorophenol Indophenolat natri) DCPIP ở trạng thái oxi hoá có màu xanh da trời, ở trạng thái khử mất

màu Lượng oxi thải ra và tốc độ thay đổi màu là chỉ số đánh giá hoạt tính quang hoá của lục lạp tách rời

2 Đối tượng, hoá chất và

dụng cụ thí nghiệm

- lá tươi

- ống đong

- cân kĩ thuật

- cối chày sứ

- cốc

- vải lọc

- ống li tâm

- máy so màu

- đệm photphat 0,06 M pH = 7,1

- DCPIP 1.10 -4 M

- NaCl

3 Các bước tiến hành

Thí nghiệm 1 :

Cân khoảng 2 gam lá, dùng kéo cắt nhỏ, nghiền trong cối sứ với 10 ml

môi trường tách (0, 87g NaCl hoà tan trong 50 ml đệm photphat 0,06 M pH 7,1) Thêm vào dịch nghiền một ít

môi trường, rồi lọc dịch nghiền vào cốc qua 2 lớp vải lọc Sau đó cho dịch

lọc vào ống li tâm và li tâm với tốc độ

500 - 1000 vòng/phút trong 3 phút

Sau khi bỏ cặn, li tâm lớp dịch phía trên 10 phút với tốc độ 2000 vòng /

phút Bỏ lớp dịch lỏng ở phía trên, ta thu được cặn màu xanh lục Đó chính

là lục lạp Khuấy đều lục lạp trong

ống li tâm bằng một ít môi trường,

sau đó cho dịch lục lạp vào ống đong, cho thêm môi trường cho đến 20 ml

Đo mật độ quang học của khối dịch chứa lục lạp trên máy so màu quang điện với kính lọc đỏ và pha loãng dịch tới giá trị của OD là 0, 260 Giá trị

này tương ứng với nồng độ của

clorophin trong khối dịch là 10 micro gam/ ml Để dịch chứa lục lạp trong tối

Thí nghiệm 2 :

Xác định hoạt tính của phản ứng Hill với 2,6 - DCPIP

Để xác định hoạt tính của phản ứng Hill, lấy 2 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 5 ml dịch lục lạp và 2 ml DCPIP nồng độ 1.10- 4 M (phân tử lượng của DCPIP là 290) Một ống nghiệm đặt trong tối làm ống kiểm tra, ống thứ 2 đặt trong phòng và chiếu sáng bằng bóng đèn điện 200 W trong 5 phút (để ống nghiệm cách đèn 20 cm) Sau 5 phút chiếu sáng, nhanh chóng xác

định mật độ quang học của dịch lục lạp trong cả hai ống nghiệm trên máy

so màu quang điện Mẫu đối chứng là nước cất Dùng cuvet có độ dày 5 mm

và đo với kính lọc màu đỏ

Tính sự biến đổi mật độ quang học

của ống thí nghiệm trong thời gian thí

nghiệm có tính đến sự khử của chất màu trong tối

Hoạt tính của phản ứng được biểu thị bằng sự biến đổi mật độ quang học

trong 1 giờ trên 1 mg clorophin

Ghi số liệu thí nghiệm và tính toán kết quả

4 Kết luận :

4.1 Quan sát và giải thích sự thay đổi màu của dung dịch thí nghiệm

4.2 Tính hoạt tính của phản ứng Hill