Tài liệu Rút sắc tố từ lá và thực hiện một số phản ứng lí hoá học của clorophin pptx

Bài thực hành 1 Rút sắc tố từ lá và thực hiện một số phản ứng lí hoá học của clorophin 1.. Các sắc tố của nhóm carotenoit cũng được tách chiết theo phương pháp này... Các bước tiến hà

Bài thực hành 1

Rút sắc tố từ lá và thực

hiện một số phản ứng lí hoá

học của clorophin

1 Nguyên tắc của phương pháp

Do có nhân Mg trong vòng pyron

mang tính tan trong nước và kết hợp với protein màng, trong khi đó đuôi dài cacbon của gốc rượu phytol lại

mang tính kị nước và hướng tới cấu trúc lipit của màng tilacoit, nên phân

tử clorophin chủ yếu hoà tan trong

dung môi hữu cơ Tuy nhiên để tách tốt clorophin ra khỏi lá, người ta

không dùng ête petrol hay benzen, mà dùng cồn hay axeton pha với một ít nước để tách được hết phân tử

clorophin từ lá Các sắc tố của nhóm carotenoit cũng được tách chiết theo phương pháp này

2 Đối tượng, hoá chất và dụng cụ thí nghiệm

- Lá tươi

- Đũa thuỷ tinh

- Cồn etilic hoặc axeton 80%

- Giá ống nghiệm và các ống

nghiệm

- Benzen - KOH 20%

- KOH 20%

- HCL 10%

- Axetat đồng

- CaCO3

- Bột thuỷ tinh

- Phễu lọc số 3

- Pipet

- Kéo

- ống nhỏ giọt

- Đèn cồn

- Giấy lọc

- Diêm

- Cối chày sứ

3 Các bước tiến hành

Lá tươi được cắt nhỏ trong cối sứ (vứt

bỏ phần gân lá), thêm một ít bột thuỷ tinh cho dễ nghiền, một ít CaCO3 để trung hoà độ axit của dịch tế bào

Nghiền các mẩu lá cùng với một ít

dung môi (cồn hoặc axeton 80% đã chuẩn bị) đến khi thành một thể đồng nhất Thêm dung môi, rửa chày sứ,

dùng đũa thuỷ tinh đổ dung dịch vào ống nghiệm qua phễu lọc

Dung dịch sắc tố thu được sẽ được

dùng để đo hàm lượng sắc tố và tiến hành một số thí nghiệm nhằm chứng minh các tính chất lí, hoá học của

clorophin

a.Xác định hàm lượng clorophin

Đem dịch chiết sắc tố đo trên máy

quang phổ ở các bước sóng 663nm, 645nm Sau đó sử dụng các công thức

để tính hàm lượng các sắc tố thành

phần như sau:

Clorophin a (mg/ l): 12,7 OD 663 - 2,69 OD 645

Clorophin b (mg/ l): 22,9 OD 645 - 4,68 OD 663

Ghi chú: Công thức này sử dụng cho dung môi là axeton 80% , OD là số đo

trên máy quang phổ ở các bước sóng xác định

Cũng trên dung môi này, nếu đo ở các bước sóng khác, có thể dùng các công thức khác như:

Clorophin a (mg/ l): 11,63 OD 665 - 2,39 OD 649

Clorophin b (mg/ l): 20,11 OD 649 - 5,18 OD 665

Clorophin a (mg/ l): 11,78 OD 664 - 2,29 OD 647

Clorophin b (mg/ l): 20,05 OD 647 - 4,77 OD 664

Sau đây là một vài công thức khác khi

sử dụng các dung môi khác nhau:

- Dung môi axeton 100 %:

Clorophin a (mg/ l): 11,70 OD 662 - 2,09 OD 644

Clorophin b (mg/ l): 21,19 OD 644 -

4,56 OD 662

- Dung môi ête êtilic 100 %:

Clorophin a (mg/ l): 10,1 OD 662 - 1,01 OD 644

Clorophin b (mg/ l): 16,4 OD 644 - 2,57 OD 662

- Dung môi 96 % êtanol:

Clorophin a (mg/ l): 13,70 OD 665 - 5,76 OD 649

Clorophin b (mg/ l): 25,80 OD 649 - 7,60 OD 665

- Dung môi metanol 100 % :

Clorophin a (mg/ l): 16,5 OD 665 - 8,3 OD 650

Clorophin b (mg/ l): 33,8 OD 650 - 12,5 OD 665

b.Quan sát hiện tượng huỳnh quang Đặt ống nghiệm chứa dịch sắc tố ra gần cửa sổ có ánh sáng trên một nền

đen hoặc gần bóng đèn điện Quan sát màu của dịch sắc tố ở ánh sáng phản

xạ, ta thấy dịch sắc tố có màu đỏ thẫm

- màu của rượu vang

Đó chính là hiện tượng huỳnh quang của clorophin

Hiện tượng huỳnh quang cũng có thể quan sát ở các cây sống Đối tượng tốt

để quan sát là tảo, rêu thuỷ sinh Các đối tượng này đặt trên lam kính rồi

quan sát dưới kính hiển vi bằng ánh sáng xanh tím Sẽ quan sát thấy

clorophin trong lục lạp có màu đỏ

thẫm

c Phản ứng với bazơ

Đổ vào 4 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch sắc tố và tiến hành các thí

nghiệm sau:

- ống 1 làm đối chứng

- ống 2: nhỏ 4 - 5 giọt KOH 20 %, lắc đều, cho thêm 4 giọt benzen, lắc

mạnh rồi để yên

Dung dịch sẽ xảy ra phản ứng xà

phòng hoá:

COOCH3 COOK

C32H30ON4Mg + 2 KOH =>

C32H30ON4Mg + CH3OH + C20H39OH

COOC20H39 COOK

Muối của clorophin cũng có màu

xanh, xong khác với clorophin là

không tan trong benzen Như vậy màu của cồn và benzen khác nhau khi so sánh với đối chứng

d Phản ứng với axit

Lấy 2 ống nghiệm còn lại, cho vào

mỗi ống 2 - 3 giọt HCL 10%, ta sẽ có chất pheophytin có màu nâu xám, vì

Mg đã bị thay thế bằng 2 nguyên tử hidro theo phản ứng sau:

COOCH3 COOCH3

C32H30ON4Mg + HCL

=>C32H30ON4 + MgCL2

COOC20H39 COOC20H39

Sau khi quan sát màu của dịch sắc tố,

ta lại tiếp tục cho vào một trong hai ống nghiệm dung dịch axetat đồng,

sau đó đun sôi dung dịch trên nồi cách thuỷ Màu nâu xám của dịch lại dần trở lại màu xanh lục đậm Như vậy

liên kết kim loại lại được tái lập, tức

là Cu thay thế chỗ của Mg

4 Kết luận: Clorophin là este của axit dicacboxilic