Báo cáo tiểu luận kỷ thuật lắp ráp gen và tạo ra DNA tái tổ hợp

Báo cáo tiểu luận kỷ thuật lắp ráp gen và tạo ra DNA tái tổ hợp Báo cáo tiểu luận kỷ thuật lắp ráp gen và tạo ra DNA tái tổ hợp Báo cáo tiểu luận kỷ thuật lắp ráp gen và tạo ra DNA tái tổ hợp Báo cáo tiểu luận kỷ thuật lắp ráp gen và tạo ra DNA tái tổ hợp Báo cáo tiểu luận kỷ thuật lắp ráp gen và tạo ra DNA tái tổ hợp

Kĩ thuật lắp ráp gen

A Một số thao tác trong kĩ thuật lắp ráp gen

I Từ tế bào động vật mang gen sản xuất

protein ta cần tách gen này ra khỏi tế bào

II Gắn gen này lên một vector(phage tải

nạp hay plasmid)

III Đưa vector này vào tế bào nhận

IV Tinh chế protein này bằng phương pháp

lý hóa

I Tách chiết gen ra khỏi tế báo

bào.

1.2 Từ mô tế bào thực vật,

động vật:

Nguyên tắc giống như tách chiết DNA của

vi khuẩn nhưng không phải nuôi cấy để thu sinh khối của tế bào

2 Tách chiết RNA:

‗ Tương tự như DNA

‗ Sau khi làm sạch protein, dịch chiết đựơc ủ với enzyme Dnase

‗ Gây tủa RNA

II Gắn DNA vào vector:

‗ Cắt đoạn DAN bằng một loại enzyme cắt giới hạn_ chỉ cắt tại một vị trí duy nhất

‗ Nối hai đầu DNA và hai đầu vector bằng enzyme DNA ligase thu được

vector tái tổ hợp

Enzyme giới hạn(RE)

‗ Là enzyme có khả năng nhận biết và cắt các trình tự đặc hiệu khoảng 4-7 cặp nucleotide

‗ Có 3 loại:

 Loại I: cắt khoảng 1000-5000 nucleotide

từ vị trí giới hạn.

 Loại II: cắt tại vị trí giới hạn.

 Loại III: cắt khoảng 20 nucleotide từ vị trí giới hạn về phía trước.

Các kiểu cắt của enzyme giới

‗ Có khả năng chứa đoạn DNA ngoại lai.

‗ Tự sao chép, tồn tại độc lập trong tế bào

‗ Có gen đánh dấu

III Đưa vector vào tế bào nhận:

 Vi sinh vật:

 Ở vi khuẩn E.coli, xử lý bằng CaCl2,

nhiệt độ thấp để màng tế bào dễ tiếp

nhận plasmid

 Ở vi khuẩn khác và nấm men, xử lý để

tạo dạng tế bào trần để thực hiện biến nạp

2 Đối với tế bào động vật:

 Phương pháp hấp thụ ngẫu nhiên DNA

 Phương pháp vi tiêm(Microinjection)

 Phương pháp thấm

điện(Electroporation)

3 Tế bào thực vật:

 Phương pháp 1:dùng vi khuẩn

Agrobactoerium tumefaciens và

Agrobacterium rhizogens làm

vector( chuyển Ti plasmid và Ri

plasmid vào tế bào thực vật

 Phương pháp 2: điện thấm, sốc điện hoặc bắn bi bọc DNA vào tế bào thực vật

IV Tinh chế protein bằng phương pháp lý hoá

Kỹ thuật gen ứng dụng

Sản xuất vaccin

Vaccin viêm gan B thế hệ thứ ba

Sản xuất interferon

Interferon anpha tái tổ hợp, thuốc kháng virus, dùng phòng chữa bệnh cho gia súc gia

cầm

Sản xuất insulin

Cấu trúc phân tử insulin

 Sản xuất insulin tái tổ hợp vói chuỗi A và chuỗi B riêng biệt

Những hướng nghiên cứu tạo động vật chuyển gen

hiệu quả sử dụng thức ăn cao.

dùng trong y dược.

thay đổi của điều kiện môi trờng.

bằng cách thay đổi các con đường chuyển

hoá trong cơ thể động vật.

 Tạo ra vật nuôi chuyển gen cung cấp nội quan cấy ghép cho con người.

 Tạo ra động vật chuyển gen làm mô hình nghiên cứu bệnh ở người

Những thành tựu trong lĩnh vực tạo động vật chuyển gen

Chuột chuyển gen horrmone sinh trưởng (bên phải) và chuột đối chứng (bên trái)

Lợn chuyển gen siêu nạc

Cá hồi chuyển gen hormone sinh trưởng (phải)

và cá hồi đối chứng (trái)

Công nghệ chuyển gen ở thực vật

Lai tạo thành công từ giống lúa chuyển gen

Phong lan chuyển gen

từ giống lan rừng

Thực phẩm chuyển gen genetically modified food)

(GMF-Mặc dù có nhiều ý kiến cho rằng GMF có tác động xấu đến sức khoẻ con người về lâu về dài nhưng từ những lợi ích to lớn

và chưa có bằng chứng nào chứng minh được tác hại của GMF

Thực phẩm chuyển gen chỉ có lợi

Tài liệu tham khảo

Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen –

TS Khuất Hữu Thanh, 2003, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật.

Giáo trình sinh học phân tử và tế bào ứng

dụng – Võ Thị Thương Lan, 2006, Nhà xuất bản Giáo Dục.

http://elearning.hueuni.edu.vn

www.sinhhocvietnam.com.vn