SEMINAR xác định hàm lượng melamine trong sữa (dược PHÂN TÍCH)

CHUYÊN ĐỀ: PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO... NỘI DUNG BÁO CÁO• ĐẶT VẤN ĐỀ • SƠ LƯỢC VỀ MELAMINE • PHÂN TÍCH MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯ

CHUYÊN ĐỀ: PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

NỘI DUNG BÁO CÁO

• ĐẶT VẤN ĐỀ

• SƠ LƯỢC VỀ MELAMINE

• PHÂN TÍCH MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

• KẾT LUẬN

• TÀI LIỆU THAM KHẢO

ĐẶT VẤN ĐỀ

• Hiện nay, chất lượng của thực phẩm là điều gây lo ngại cho nhiều người

Vì lợi ích cá nhân 1 số người đã sử dụng chất cấm cho vào thực phẩm để tăng lợi nhuận.

• Melamine được sử dụng sản xuất plastic, phân bón, thuốc trừ sâu,… tuy nhiên, các hãng sản xuất sữa đã bổ sung chất này vào để làm gia tăng hàm lượng protein, tăng lợi nhuận Sử dụng sữa có hàm lượng melamine vượt qua mức cho phép gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe con người.

Do đó, cần thực hiện việc phân tích hàm lưỡng melamine trong sữa để đảm bảo chất lượng của sữa trước khi được đưa vào thị trường tiêu

thụ.

Sơ lược về melamine

1 Tính chất lí hoá của melamine (C3H6N6)

−Là hợp chất hóa học ít tan trong nước, trắng đục như sữa

−Là non-protein nitrogen, không có tác dụng dinh dưỡng như chất đạm

−Trong cơ thể melamine có thể bị thủy phân hoặc vi khuẩn chuyển hóa thành Cyanuric acid

Nguồn: vi.wikipedia.org

Hình 2: Sỏi thận do melamine

2 Ảnh hưởng của melamine tới sức khoẻ

• Mắt , da và đường hô hấp khi tiếp xúc lâu

dài với melamine có thể gây ung thư, ảnh

hưởng đến bộ phận sinh sản

• Trong thận (pH= 4.5-8), melamine và acid

cyanuric kết hợp tạo muối Melamine

cyanurate, hình thành sỏi

Sơ lược về melamine

Sơ lược về melamine

3 Nồng độ melamin cho phép trong thực phẩm:

Nồng độ melamine an toàn cho một người

Theo các chuyên gia về an toàn thực phẩm trên thế giới, nồng độ

melamine dung nạp hàng ngày có thể chấp nhận được (tolerable daily intake hay TDI) là 0.5 mg/kg cân nặng Ở Mĩ, cục quản lí thực phẩm và dược phẩm (FDA) đề nghị TDI 0.63 mg/kg cân nặng

 Nồng độ an toàn cho sữa và thực phẩm

- Với sữa nước dành cho trẻ em: tối đa là 0,15 mg/kg

- Với sữa bột dành cho trẻ em : 1 mg/kg

- Với thức ăn cho động vật và các thực phẩm khác: 2,5 mg/kg

Đó là tiêu chuẩn mới do Ủy ban luật quốc tế về chất lượng và an toàn thực phẩm của LHQ (CAC) công bố ngày 5/7/2012

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

HPLC (high performance liquid chromatography- HPLC) là một phương

pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã được biến bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ

HPLC là phương pháp xét nghiệm melamine trong thực phẩm được sử dụng phổ biến trên thế giới từ khá lâu, các trung tâm xét nghiệm melamine tại Việt Nam cũng đang sử dụng phương pháp này

Ưu điểm và nhược điểm của phương pháp

Hệ thống sắc kí lỏng hiệu năng cao

Hình 3: Hệ thống sắc ký

lỏng hiệu năng cao

Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao gồm có các bộ phận cơ bản như sau: 1: Bình chứa pha động.

2: Bộ phận khử khí 3: Bơm cao áp

4: Bộ phận tiêm mẫu 5: Cộ sắc ký (pha tĩnh) 6: Đầu dò

7: Hệ thống máy tính có phần mềm ghi nhận tín hiệu, xử lý dữ liệu và điều khiển hệ thống.

8: In dữ liệu.

Phân tích melamine trong sữa bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Dụng cụ, thiết bị và hoá chất

1 Dụng cụ:

−Đầu dò UV, cột C18 (150mm x 3.2mm ID, kích thước hạt 5 µm)

−Máy sắc ký lỏng HPLC/UV – LC 20A (Shimadzu)

−Cột sắc kí lỏng pha đảo C18 màng lọc 0,45µm

−Máy li tâm, bể rung siêu âm

−Bình định mức, các loại pipet vạch, pipet bầu, cốc mỏ,…

−Micropipet các loại

−Syranh lọc mẫu

Dụng cụ, thiết bị và hoá chất

3 Dung dịch chuẩn:

Điều kiện quy trình

- Cột hấp phụ: Venusil ASBC8 (cột này chưa silicac) kích thước 4.6x250mm; pha động: buffer : acetonitrile = 85:15; buffer: 10mM citricacid, 10mM

sodiumoctane, pH = 3.0 ; tốc độ chảy : 1ml/min.

- Bước sóng tia UV : 240nm

- Nhiệt độ : 40

- Máy dò : DA ( diodearray)

•  

−Mẫu được lọc qua bộ lọc 0.45 µm (Acrodisc, 25mm, màng Nylon).

− Nghiên cứu về dịch lọc chỉ ra rằng các bộ lọc hấp thụ melamine tại các mức sau: 22% (cho 1ml ban đầu), 10% (2 mL), <1% (3, 5 và 7ml)

−3ml ban đầu của dịch lọc bị loại bỏ, phần lọc còn lại được bổ sung vào một lọ

HPLC để phân tích

Độ chính xác

Độ chính xác của phương pháp này được đánh giá bằng độ ổn định và tính

lặp lại của mẫu ở bốn mức nồng độ melamine (5, 10, 20 và 40 µgmL -1 ) với

việc sử dụng 1 g khô.

 Nhận xét:

− Hiệu suất thu hồi: 97,2% - 101,2%

− Phương pháp này cho thấy độ lặp lại

trong 1 ngày và nhiều ngày cho các mẫu xử lý được chỉ ra thông qua hiệu suất thu hồi từ 101,1-102,8% (0,8% RSD)

Kết quả khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới

hạn định lượng (LOQ) của phương pháp

−LOD đã được xác định là 0,1 µg/ml   và LOQ đã được xác định là 0,2 µgml Giá

trị % của R.S.D được nghiên cứu chính xác ở mức độ LOQ là trong khoảng 5%

−LOD và LOQ của phương pháp này được ước tính ở một tỉ số tín hiệu cực đại

trên đọ nhiễu (Signal-to-noise) 03:01 và 10:01, bằng cách tiêm một loạt các

dung dịch pha loãng với nồng độ nhất định.

−Một nghiên cứu chính xác cũng đã được tiến hành ở mức LOQ bằng việc tiêm

sáu lần riêng rẽ chất pha chế và giá trị % RSD của diện tích peak được tính

toán Một nghiên cứu về hiệu suất thu hồi được thực hiện trong ba lần, mức

LOD và LOQ cho mẫu bột cho thấy hiệu suất trung bình là 75 ± 2%  của LOD

và 90 ± 1% của LOQ

Hình 5: Sắc kí đồ mẫu melamine

Sắc ký đồ

Một đường hiệu chỉnh tuyến tính thu được trên dải hiệu chuẩn từ 1,0 đến 80 µgmL

-1 với hệ số tương quan (r) 0,999.

Giá trị R.S.D của các lần tiêm mẫu lặp lại < 0,02% đối với mỗi nồng độ và hệ số lệch chuẩn y < 2%

KẾT LUẬN

• Phương pháp đơn giản để xác định nồng độ melamine trong sữa bằng cách sử dụng sắc ký lỏng pha đảo HPLC Phương pháp này thuận lợi bởi vì pha động là acetonitril miễn phí và thời gian phân tích của ~

6min mỗi mẫu, độ tương quan tuyến tính chặt chẽ giữa nồng độ và

diện tích peak, độ lặp lại,…

• Phương pháp phân tích này cung cấp độ nhạy cảm tuyệt vời, khả năng tái lặp, chính xác cao

TÀI LIỆU THAM KHẢO

thuc-pham-thuc-an-chan-nuoi-va-sua-bang-sac-ky-long-cao-ap-hplc.html

hoahocngaynay.com/vi/phat-trien-ben-vung/hoa-chat-doc-hai/94-melamin.html

−Các phương pháp phân tích trong hóa học (của Makoto Takagi, do

Trần Thị Ngọc Lan dịch)

CẢM ƠN CÔ

VÀ CÁC BẠN

ĐÃ THEO

DÕI!