Bài giảng Công nghệ sinh học đại cương: Chương 2 - ThS. Ninh Thị Thảo (Bài 3) - Trường Đại Học Quốc Tế Hồng Bàng

Lai phân tử là quá trình kết hợp lại của hai mạch đơn DNA hoặc DNA- RNA... So sánh sự phân tích gene X sử dụng các kỹ thuật lai.[r]

CHƯƠNG II: CÁC KỸTHUẬT NỀN CỦA CNSH HIỆN ĐẠI (10 TIẾT)

 Chức năng và ứng dụng của các enzyme giới hạn

 Giới thiệu các vector nhân dòng và kỹ thuật nhân dòng gen

 Các phương pháp lai phân tử

 Phương pháp PCR, ứng dụng

 Kỹ thuật xác định trình tự DNA

 Kỹ thuật tạo thư viện genome và cDNA

 Sự bắt cặp lai (Hybridization) theo cơ chế

bổ sung (Complementarity)

– DNA - DNA

– DNA - RNA

– Protein – Protein (thường ở dạng phức hợp kháng nguyên – kháng thể)

CƠ SỞ KHOA HỌC

Lai giữa các nucleic acid

Lai phân tử là quá trình kết hợp lại

của hai mạch đơn DNA hoặc

DNA-RNA

Cơ sở của việc lai phân tử là các

mối liên kết hydro giữa các base

trên hai mạch Giữa một base A và

một base T (hoặc U) hình thành

hai liên kết hydro còn giữa G và C

hình thành ba liên kết

LAI GIỮA CÁC NUCLEIC ACID

(DNA – DNA hoặc DNA – RNA)

Lai giữa các nucleic acid

LAI GIỮA CÁC NUCLEIC ACID

(DNA – DNA hoặc DNA – RNA)

• LAI SOUTHERN ( DNA – DNA )

MỘT SỐ KỸ THUẬT LAI PHÂN TỬ

So sánh sự phân tích gene X sử dụng các kỹ thuật lai

Southern, Northern và Western

• Lịch sử

– Do Edwin Southern đề xuất

năm 1975 và sau đó được tiếp

tục hoàn thiện

– Với sự phát triển của kỹ thuật

này, Southern đã nhận được

giải thưởng Lancaster trong

lĩnh vực Y học vào năm 2005

LAI SOUTHERN

Edwin Southern

LAI SOUTHERN

• Nguyên lý

– Dựa trên sự bắt cặp bổ sung giữa 2 phân tử DNA mạch đơn (DNA-DNA)

– Cho phép xác định được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn DNA nào đó trong một hỗn hợp các đoạn DNA khác nhau dựa trên sự bắt cặp của mẫu dò đã được đánh dấu với đoạn DNA chứa trình tự bổ sung với mẫu dò đó

• Kỹ thuật lai Southern cho biết

– Sự có mặt của đoạn DNA (gen)

– Số lượng đoạn DNA có mặt (tương ứng với số gen)

– Độ lớn của đoạn DNA

– Trình tự tương tự giữa đoạn DNA mục tiêu và mẫu dò

Các b ước tiến hành

Bước1 : Chuẩn bị DNA mẫu

Bước 2 : Chuyển ssDNA lên màng lai

Bước 3 : Lai ssDNA với mẫu dò

Bước 4 : Kết thúc phản ứng lai, thu kết quả lai

1 2 3

Mẫu nghiên cứu

3

Marker

1

Đối chứng

2

Bước 1: Chuẩn bị DNA mẫu