Xác định trình tự DNA là phương pháp xác định trật tự sắp xếp của các nucleotide trong phân tử DNA... Các mốc giải mã hệ gen của các sinh vật khác nhau.[r]
Trang 1CHƯƠNG II: CÁC KỸTHUẬT NỀN CỦA CNSH HIỆN ĐẠI
(10 TIẾT)
1 Chức năng và ứng dụng của các enzyme giới hạn
2 Giới thiệu các vector nhân dòng và kỹ thuật nhân dòng gen
3 Các phương pháp lai phân tử
4 Phương pháp PCR, ứng dụng
5 Kỹ thuật xác định trình tự DNA
6 Kỹ thuật tạo thư viện genome và cDNA
Trang 2KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH
TRÌNH TỰ DNA
BM-CNSHTV
Trang 3Khái niệm
Xác định trình tự DNA là phương pháp xác định trật
tự sắp xếp của các nucleotide trong phân tử DNA
Trang 4Các mốc giải mã hệ gen của các sinh vật khác nhau
Cho đến nay, hệ gen của hơn 100 tổ chức sinh vật
đã được giải mã trình tự
BM-CNSHTV
Trang 5Maxam-Gilbert (1977)
Sanger (1977)
Các phương pháp xác định trình tự
Xác định trình tự tự động
Xác định trình tự thế hệ mới
Trang 6Phương pháp Maxam-Gilbert
• Là phương pháp phân giải hóa học
• Sử dụng hóa chất để biến đổi DNA
ở các vị trí base đặc hiệu tạo ra
các đoạn có chiều dài khác nhau Walter Gilbert
BM-CNSHTV
Trang 7 Dimethyl sulfat methyl hóa G
Axit formic pH=2 gây biến đổi và loại A + G
Hydrazin gây biến đổi tại C và T
Hydrazin + NaCl nồng độ cao gây biến
đổi tại C
base sau khi bị biến đổi và cắt mạch
Các loại hóa chất sử dụng
Trang 8Base
specificity
Chemical used for base alteration
Chemical used for altered base
removal
Chemical used for strand
cleavage
BM-CNSHTV
Trang 9G C T G C T A
A
T
C
T
G
CH 3
T
C
T
C
DNA labeled at one
Base modification
ment of reacted bases
Strand scission
Maxam and Gilbert chemical method
J2 nucleic acid sequencing
Trang 10BM-CNSHTV