SEMINAR ỨNG DỤNG kỹ THUẬT UPCC MSMS để PHÂN TÍCH THÔNG LƯỢNG CAO 19 nội TIẾT tố ANDROGEN STEROID sắc ký HIỆN đại

Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác

ỨNG DỤNG KỸ THUẬT UPCC-MS/MS

ĐỂ PHÂN TÍCH THÔNG LƯỢNG CAO 19 NỘI TIẾT TỐ ANDROGEN STEROID

1

GIỚI THIỆU

Nhóm 14

Hormone steroid

Điều hòa chức năng sinh sản

Điều hòa cân bằng nước

và điện giải

Điều hòa viêm

Điều hòa phản ứng stress

Điều hòa chuyển hóa

GIỚI THIỆU

Rối loạn sản xuất hormone

steroid

Tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh (CAH)

Hội chứng Cushing

Ung thư

Bệnh aldosteron nguyên phát

Hội chứng buồng trứng

đa nang (PCOS)

Cần định lượng chính xác

các hormon steroid

Nghiên cứu chứng minh được: hiệu quả của hệ thống UPCC-MS / MS, làm rõ hơn vai trò của các chất chuyển hóa steroid trong sự phát triển CRPC và các khối u phụ thuộc androgen khác

Kết hợp với đầu dò khối phổ song song có độ nhạy caoUPCC: Ultra-performance convergence chromatography

Phân tích định lượng được các

hormon phức tạp

THỰC NGHIỆM

THỰC NGHIỆM

2

Chuẩn Steroid không có trên thị trường

Sản xuất bởi tế bào

HEK293

2.1 Thuốc thử

THỰC NGHIỆM2

2.2 Phương pháp chuẩn bị mẫu thử và mẫu

chuẩnStock 15 Steroid

penicillin-huyết tương bào thai bò)

Dạng no matrix

(methanol 50%)

Các steroid nằm trong lớp MTBE

Bay hơi

Hòa tan trong methanol 50%

2.4 Thiết bị và điều kiện sắc

THỰC NGHIỆM2

2.4 Thiết bị và điều kiện sắc

ký

Detector Xevo TQ-S triple quadrupole mass spectrometer

2.5 Phương pháp đánh giá

Nồng độ ng.mL – 1 0 0.01 0.05 0.1 0.25 0.5 1.0 2.5 5.0 10 25 50 100 250

Giới hạn phát hiện (LOD) X X X X X X X X X X X X X

Giới hạn định lượng (LOQ) X X X X X X X X X X X X X

Giới hạn định lượng trên X X X X X X X X X X X X X

UPLC-THỰC NGHIỆM

2

2.6 So sánh sự tách và và định lượng bằng MS/MS

Detector quadrupole mass Xevo TQ triple

spectrometer

Xevo TQ- S triple quadrupole mass spectrometer

Nguồn

Nhiệt độ khí bay

Tốc độ dòng khí

Tốc độ

Nhóm 14 UPCC-MS/MS

KẾT QUẢ

3

Sắc ký UPC 2 -MS / MS mô tả thứ tự rửa giải của các steroid C 19

- UPCC-MS/MS có thể nhận diện 19 steroid và định lượng 15 steroid C19

- Mặc dù gồm bốn steroid mới: 11KepiAST, 11KDHT, 3α-adiol và

11OHAST không tách được, chúng vẫn có thể được định lượng nhờ vào MRM

Sắc ký đồ sự phân tách của 11KA4 (1), 11KT (2), 11OHA4 (3), 11OHT (4), A4 (5) và T (6)

UPLC MS/MS pha đảo UPCC-MS/MS pha thuận

Mặc dù sử dụng cột pha thuận nhưng thứ tự rửa giải của UPCC không phải đảo ngược với UPLC mà sắp xếp lộn xộn

KẾT QUẢ

3

3.1 Khả năng phân tách của UPCC

Đồ thị trực giao mô tả thứ tự rửa giải của các androgen bằng UPLC và UPCC.

KẾT QUẢ

3.2 Khối phổ

Dung môi rửa giải (methanol chứa 1% acid formic)Dung môi bổ sung

Hiệu quả tối ưu

3

So sánh UPCC -MS Xevo TQ-S với UPLC- MS Xevo

TQ

Độ nhạy: 50 lần ở các steroid dễ ion hóa (T và A4)

5 lần ở các steroid khó ion hóa (DHT)

Dù thể tích tiêm thấp hơn 10 lần => UPCC-Xevo TQ-S cho phép định lượng steroid ở các nồng độ mà trước đây không thực hiện được

Phạm vi hiệu chuẩn: Xevo TQ-S 100 ng/mL

Độ nhạy được cải thiện

Cả Độ đúng và Chính xác đều dưới 15% ở nồng độ 50 và 100 ng.mL -1 (trung

bình và cao)

giá

Độ đúng và chính xác

Độ chính xác ở nồng độ thấp dao động từ 1 - 14% ở 0.25 ng.mL -1 , 4–19% ở 2.5 ng.mL -1 và 2–15% ở 25 ng.mL -1

Độ đúng và chính xác

giá

Tỷ lệ thu hồi, hiệu ứng nền và hiệu năng quá trình

Hiệu ứng nền dao động từ 18,7% ức chế ion ở 11KDHT đến 20,8% tăng cường ion ở 11KepiAST.

giá

Tỷ lệ thu hồi, hiệu ứng nền và hiệu năng quá trình

Hiệu năng trung bình, là sự kết hợp giữa tỷ lệ thu hồi và hiệu ứng nền,

nằm trong khoảng 55,4 - 78,5% ở nồng độ 2,5 ng.mL -1 và 73,6 - 114,7% tại nồng

THẢO LUẬN

THẢO LUẬN

Sắc ký đồ sự phân tách của 11KA4 (1), 11KT (2), 11OHA4 (3), 11OHT (4), A4 (5) và T (6)

UPLC MS/MS UPCC-MS/MS

Hạn chế duy nhất cho tăng độ nhạy là phạm vi tuyến tính giảm do bão hòa của máy dò ở nồng độ cao Điều này, dễ dàng khắc phục bằng cách pha loãng mẫu

hơn nữa Độ nhạy tăng cho phép nhà phân tích nghiên cứu sự chuyển hóa steroid trong nuôi cấy tế bào ở nồng độ sinh lý ở lần thử nghiệm đầu tiên

Tăng độ nhạy đạt được bằng cách sử dụng thể tích tiêm chỉ 2 µL, trong khi các

phương pháp MS / MS UPLC thông thường dựa vào thể tích tiêm 5 -20 µL Giảm thể tích tiêm mẫu là một lợi thế đối với các mẫu sinh học và cho phép thực hiện nhiều lần tiêm từ cùng một mẫu

Nhóm 14 UPCC-MS/MS

KẾT LUẬN

5

Phương pháp này mở ra các khả năng cho các ứng dụng mới, nhờ vào sự phân tách

ưu việt và khả năng phát hiện đạt được bởi UPCC-MS / MS.

Tăng độ chọn lọc và giảm thời gian chạy

=> định lượng đồng thời nhiều chất chuyển hóa steroid

Giảm các chất gây nhiễm trung tính, kết hợp với hệ thống

 tăng độ nhạy

 thích hợp việc định lượng hormone steroid ở nồng độ sinh lý

 phù hợp với nhiều ứng dụng in vitro và in vivo

CO2 siêu tới hạn cũng ít tốn kém hơn dung môi hữu cơ và ít tác đ ng đến ộ

môi trường

Cảm ơn đã theo dõi

Nhóm 14