SEMINAR CHIẾT XUẤT và KIỂM NGHIỆM ANTHOCYANIN từ dâu tằm BẰNG kỹ THUẬT DÙNG SIÊU âm ppt _ DƯỢC LIỆU

Bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide dược liệu ppt dành cho sinh viên chuyên ngành dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn dược liệu bậc cao đẳng đại học chuyên ngành dược

Chiết xuất và kiểm

nghiệm Anthocyanin từ Dâu tằm

(Morus alba L Moraceae)

bằng kỹ thuật dùng siêu

âm

Bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay

nhất có tại “tài liệu ngành dược hay nhất”;

https://123doc.net/users/home/user_home.php?

use_id=7046916

Nội dung

• Đặt vấn đề

• Tổng quan

– Khái niệm về siêu âm

– Tổng quan về thành phần hóa học của Dâu tằm

• Thực nghiệm

– Chiết xuất anthocyanin từ Dâu tằm

 Bằng kỹ thuật dùng siêu âm

Đặt vấn đề

A NTHO C Y A N I N

– Hợp chất màu hữu cơ có nguồn gốc tự nhiên

– Có trong nhiều loại hoa quả: đỏ, đỏ tía, xanh, tím,

3

Đặt vấn đề

Anthocyanin

– Anthocyanin có nhiều tác dụng quý trong y sinh

học và công nghệ thực phẩm

– Hàm lượng trong một số loài thực vật

– Các phương pháp hiết xuất anthocyanin từ dâu

tằm:

 Ngâm với dung môi (ethanol-nước 1% HCl, nước sulfur )

 Bằng kỹ thuật dùng siêu âm

Tổng quan

• Khái niệm về siêu âm

– Sóng cơ học hình thành do sự lan truyền dao động của các phần tử trong không gian và có tần số lớn hơn ngưỡng nghe của con người (16 – 20 kHz)

– Trong phạm vi ứng dụng, được chia thành:

 Sóng siêu âm tần số thấp, năng lượng cao (20 – 100 kHz)

 Sóng siêu âm tần số cao, biên độ nhỏ (2 – 10 MHz)

Siêu âm

• Phạm vi ứng dụng của siêu âm

– Chẩn đoán hình ảnh và điều trị y khoa

– Phân tán, làm nhỏ kích thước tiểu phân: hỗn

dịch, nhũ tương

– Chụp ảnh bên trong các cấu trúc cơ khí để

kiểm tra chất lượng

– Được dùng trong các ứng dụng quan trắc khác:

để đo khoảng cách hay vận tốc

– Làm sạch bằng siêu âm

– Hàn siêu âm

– Ứng dụng siêu âm trong hóa học, sinh học

7

Siêu âm

• Nguyên tắc hoạt động của siêu âm

Siêu âm

9

Bộ phận chuyển điện năng

Bộ phận chuyển điện năng

Bộ phận biến đổi

điện xoay chiều

thành dao động

Thiết bị trung gian

Đầu tháo lắp được

Thiết bị phát sóng siêu âm dạng

thanh

Dung môi thu hồi

Dịch chiết

Bộ phận phát siêu

âm

Dâu tằm

11

Morus alba L Moraceae

 Coumarin: umbeliferon, scopoletin, scopolin

 Vitamin: B, C, D, caroten.

 Sterol: sitosterol, campesterol, sitosterol glycosid, β- ecdyson và inokosterol

β- Acid hữu cơ: oxalic, malic, tartric, citric, fumaric, palmitic và ester ethyl

palmitat.

tetrahydroxybenzophenol (R=H), macrulin (2,3’,4,4’,6-pentahydroxybenzophenol (R=OH), sitosterol, resinotanol, moran A (glucoprotein)

– Quả

 Anthocyanin

 Đường, protein, tanin, caroten.

Tính chất anthocyanin

• Cấu trúc hóa học

Cyanidin-3-glu -OH -H Delphinidin-3-

Tính chất anthocyanin

• Tính chất vật lý

– Anthocyanin tinh khiết: tinh thể / vô định hình

– Tan tốt trong dung môi phân cực

– Bước sóng hấp thụ trong vùng VIS (510 – 540 nm)

• Độ ổn định

– Dễ bị phân hủy, phụ thuộc pH, t o , sự hiện diện của

ánh sáng, O2, dung môi, các enzyme, ion kim loại

– Sự thay đổi màu sắc theo pH:

 pH = 1  dạng muối oxonium màu cam đến đỏ

 pH = 4 - 5  dạng base carbinol / base chalcon không màu

 pH = 7 - 8  dạng base quinoidal màu xanh

Thực nghiệm

• Thu mua và xử lý nguyên liệu dâu tằm

• Khảo sát điều kiện chiết xuất

Bảo quản – 80 o C

MeOH, 1% TFA Thiết bị chiết siêu âm (200 W, 40 kHz)

Dịch chiết

Dịch ly tâm

8000 v/ph

Dịch phân tích HPLC Định tính/ định

lượng

0,45  m Lọc

Ly tâm 10’

Tối ưu hóa quy trình

• Dung môi chiết

19

Tối ưu hóa quy trình

• Tỉ lệ dung môi/ dược liệu

Tối ưu hóa quy trình

• Thời gian chiết

21

Tối ưu hóa quy trình

• Nhiệt độ chiết

Phân tích dịch chiết

• Hóa chất và thuốc thử

– Chất chuẩn: 3-glucoside và

cyanidin-3-rutinoside (Sandnes, Na Uy)

 Chất rửa giải được theo dõi tại bước sóng 520 nm

0 – 15 phút Từ 5 đến 15% A ; 85 – 95% B

15 – 21 phút Từ 15 đến 28% A ; 72 – 85% B

21 – 22 phút Từ 28 đến 40% A ; 60 – 72% B

22 – 24 phút Từ 40 đến 60% A ; 40 – 60% B

Chiết bằng phương pháp khác

• Phương pháp ngâm

– Dung môi: EtOH - H2O 1:1 - HCl 1%

– Nguyên liệu: Dâu tằm mua tại Đà Nẵng

-15 o C

Nghiền nhỏ Nguyên liệu khô Cân 5 g/góiXay nhỏ, Lạnh đông-15oC

Ngâm trong EtOH - H2O - HCl 1%

Dịch phân tích

Lọc chân không lấy dịch

1,188%

Chiết bằng phương pháp khác

• Phương pháp ngâm

– Nguyên liệu: Dâu tằm mua tại Hội An

27

-15 o C

Nghiền nhỏ Nguyên liệu khô Cân 5 g/góiXay nhỏ, Lạnh đông-15oC

Ngâm trong nước SO2 1100 ppm

Dịch chiết

10 lần

1,20 %

Dịch phân tích

Pha loãng

Bảo quản – 80 o C

MeOH 60% – TFA 1%

(25:1) Thiết bị MAE, 425 W, 130 s Dịch chiết

Dịch ly tâm

Dịch phân tích HPLC Định tính/ định

lượng

0,22  m Lọc

Ly tâm 10’

5,47%

Kết luận

• Sự lựa chọn tốt nhất cho điều kiện UAE:

– methanol 63,8% (1% TFA, tt/tt)

– nhiệt độ 43,2°C

– tỉ lệ chất dung môi/ dược liệu là 23,8 : 1

– thời gian chiết xuất là 40 phút

• Kết quả thu được:

29

64,70 ± 0,45 mg/g bột dâu tằm

Hiệu suất # 6,47%

Nhận định

• Phương pháp chiết bằng siêu âm có thể dùng để

chiết các anthocyanin từ dâu tằm với nhiều ưu điểm

so với các phương pháp khác:

– Hiệu suất chiết xuất cao

– Thời gian chiết khá nhanh (< 1 giờ)

– Ít tốn năng lượng, không cần áp suất cao

– Có thể gia nhiệt, điều chỉnh thời lượng

– Rất thích hợp cho quy mô kiểm nghiệm

• Như vậy: UAE một kỹ thuật chiết xuất có nhiều ưu

điểm, đặc biệt sử dụng chiết xuất anthocyanin từ

dâu tằm một cách đơn giản, nhanh chóng và hiệu

Tài liệu tham khảo

Tài liệu tiếng Việt:

1.Bộ môn Dược liệu – Khoa Dược – Đại học Y Dược Tp.HCM, Phương pháp nghiên cứu

dược liệu, 2012

2.Nguyễn Viết Kình, Bài giảng Phương pháp chiết xuất dược liệu, 2011, 83-88.

3.Mai Thị Hải Anh, Nguyễn Thị Ngân, Nguyễn Ngọc Tú Anh, Nguyễn Thị Nguyên Thảo

(2010), Sử dụng sóng siêu âm trích ly isoflavone, 2-7.

4.Nguyễn Thị Lệ Hằng, Phan Ngọc Nhiên Thảo, Lê Ngọc Định, Trần Nhật Ngọc Linh

(2011), Chiết xuất và kiểm nghiệm curcumin từ nghệ bằng kỹ thuật siêu âm, 4-6.

5.Huỳnh Thị Kim Cúc, Phạm Châu Huỳnh, Nguyễn Thị Lan, Trần Khôi Uyên (2004),

Xác định hàm lượng anthocyanin trong một số nguyên liệu rau quả bằng phương

pháp pH vi sai, 2.

6.Huỳnh Thị Kim Cúc, Lê Văn Hoàng, Lê Thị Lệ Hưởng (2006), Chiết anthocyanin từ

quả dâu bằng nước sulfured và một số đặc tính của chúng, trang 1-4.

7.Phạm Thị Thanh Nhàn, Nguyễn Hữu Cường, Lê Trần Bình (2011), Tách chiết và

phân tích hàm lượng anthocyanin từ các mẫu thực vật khác nhau, Tạp chí Sinh học,

33, 79-85.

8.Bộ môn Dược liệu – Khoa Dược – Đại học Y Dược Tp.HCM, Giáo trình nhận thức

dược liệu, 2009, 68.

9.Hoàng Thị Kim Khuyên, Ứng dụng HPLC ghép đầu dò điện hóa và diode array

(HPLC-ECD-DAD) để định lượng hệ số hấp thu phân tử và định lượng anthocyanin

trong dịch trích thực vật, 2010, 2-6.

31

Tài liệu tham khảo

Tài liệu tiếng nước ngoài:

10.Tang-Bin Zou, Min Wang, Ren-You Gan and Wen-Hua Ling, Optimization of

Ultrasound-Assisted Extraction of Anthocyanins from Mulberry, Using Response Surface

Methodology, Int J Mol Sci 2011, 12, 3006-3017.

11.Zhang W., He J., Pan Q., Han F., Duan C (2011), Separation and character analysis of

anthocyanins from mulberry (Morus alba L.) pomace Czech J Food Sci., 29, 268-276.

12.Dilip Ghosh and Tetsuya Konishi, Anthocyanins and anthocyanin-rich extracts: role in

diabetes and eye function, Asia Pac J Clin Nutr 2007, 16 (2), 200-208

13.Tangbin Zou, Dongliang Wang, Honghui Guo, Yanna Zhu, Xiaoqin Luo, Fengqiong Liu,

and Wenhua Ling, Optimization of Microwave-Assisted Extraction of Anthocyanins from

Mulberry and Identification of Anthocyanins in Extract Using HPLC-ESI-MS, Journal of

Tài liệu từ internet:

16.Nguyễn Thuấn Anh, Công dụng của anthocyanin trong thực phẩm, truy cập ngày

19/12/2012.

17.Tra cứu cây thuốc, Dâu tằm (Morus alba), truy cập ngày 20/12/2012.

Xin cảm ơn Thầy và các

bạn đã lắng nghe !

33