bài giảng kỹ thuật làm tiêu bản nhiễm sắc thể của bộ môn di truyền trường đại học y dược huế

Làm bung rời các nhiễm sắc thể theo cụm kỳ giữa hiệu quả. MỤC TIÊU.[r]

KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN NHIỄM SẮC THỂ Ở KỲ GIỮA

Lấy mẫu Làm giàu bạch cầu Nuôi cấy

Xử lý Colcemid Sốc nhược trương

Cố định nhẹ

Cố định

NUÔI CẤY VÀ THU HOẠCH

NUÔI CẤY

THU HOẠCH

MỞ ĐẦU

LÀM TIÊU BẢN NHIỄM SẮC THỂ

Dịch treo

tế bào

Nhỏ tiêu bản

Cụm NST kỳ giữa

1 Thực hiện được thao tác nhỏ tiêu bản từ

dịch treo tế bào đã nuôi cấy.

2 Làm bung rời các nhiễm sắc thể theo cụm

kỳ giữa hiệu quả

MỤC TIÊU

NGUYÊN LÝ

Độ bung của các NST được quyết định bởi tốc độ khô

khi nhỏ tiêu bản và chất lượng của lam kính.

NGUYÊN LÝ

Chất lượng của lam kính

 Độ dày 0,9 – 1,2 mm

 Trong, không gợn sóng

 Sạch, không bị dính dầu mỡ, dấu vân tay

NGUYÊN LÝ

Tốc độ khô của tiêu bản phụ thuộc vào một số yếu tố

 Nhiệt độ và độ ẩm của môi trường

 Mật độ tế bào trong dịch treo

 Chất lượng của dung dịch cố định

 Độ cao khi nhỏ tiêu bản

PHƯƠNG TIỆN & DỤNG CỤ

TIẾN HÀNH

 Máy ly tâm

 Pipette Pasteur

 Lam kính hãng SAIL BRAND Cat.No: 7102

 Giá nhỏ tiêu bản

 Chổi rửa ống nghiệm

HÓA CHẤT

 Nước rửa chén sunlight

 Dung dịch carnoy (3 methanol : 1 acid acetic)

 Dịch treo tế bào sau khi thu hoạch

XỬ LÝ LAM KÍNH

TIẾN HÀNH

LÀM TIÊU BẢN NST Ở KỲ GIỮA

TIẾN HÀNH

1 Nhỏ tiêu bản

2 Kiểm tra mật độ tế bào (vật kính x10)

3 Kiểm tra độ bung của cụm NST ở kỳ giữa

(vật kính x10 và vật kính x40)

NHỎ TIÊU BẢN

TIẾN HÀNH

 Ly tâm ống nuôi cấy.

 Thay dung dịch cố định mới rồi trộn đều.

 Nhỏ tiêu bản.

 Kiểm soát thời gian khô của tiêu bản

> 3 cm

KIỂM TRA MẬT ĐỘ TẾ BÀO

TIẾN HÀNH

Quan sát dưới kính hiển vi vật kính x 10

Mật độ quá dày Mật độ quá loãng Mật độ vừa

KIỂM TRA ĐỘ BUNG CỦA NST Ơ KỲ GIỮA

TIẾN HÀNH

Quan sát dưới kính hiển vi vật kính x10 và x40

Không bung Bung đẹp Bung quá rời rạc

THE END