ĐỊNH LƯỢNG CAFEIN BẰNG HPLC

Kiểu rửa giải của pha động trong bài thực tập thuộc loại đẳng dòng hay gradient?. Chất lượng của dung môi sử dụng để triển khai HPLC thuộc loại nào?. Sử dụng dung môi này để chiết xuất

BÁO CÁO THỰC TẬP BÀI 7 Nhóm:

Tên SV:

PHIẾU PHÂN TÍCH

ĐỊNH LƯỢNG CAFEIN BẰNG SẮC KÍ LỚP MỎNG

- Thiết bị: SHIMADZU

- Detector: PDA, tốc độ dòng: 1mL/phút

- Thể tích tiêm: 10 μL

- Pha động: nước – methanol – acid acetic băng (69:28:3)

- Bước sóng: 273 nm

- Tính tương thích hệ thống: Kết quả cho thấy thời gian lưu, diện tích đỉnh đều có RSD < 2%; từ đó cho thấy quy trình đạt tính tương thích hệ thống

- Dung dịch phân giải/nguồn gốc/số lô: PTN

- Cách pha:

- Hệ số phân giải R

- Số đĩa lý thuyết N

- Hệ số đối xứng t:

- Độ lệch chuẩn tương đối của 4 lần tiêm RSD = 0,198%

THAM KHẢO

Định tính

- Thời gian lưu của mẫu chuẩn:

tR(1) = 6,102 min tR(2) =6,120 min tR(3) = 6,123 min tR(4) = 6,130 min

 𝑡 ̅= 6,119 min

SD = 0,012 RSD = 0,198% (< 2%)

- Thời gian lưu của mẫu thử: tt = 6,117 min

Định lượng

Chất chuẩn: Cafein

- Nguồn gốc: PTN, Số lô: QT028 140320, Hàm lượng: 99,4%

- Lượng cân: 0,0157g

- Dung môi pha loãng: Methanol dùng phân tích HPLC

1

Chất thử:

- Lượng cân: 0,0157g

1

- Diện tích đỉnh của mẫu chuẩn:

Sc(1) = 795955 Sc(2) = 788440 Sc(3) = 789869 Sc(4) = 795925

 Sc (TB) = 792547

- Diện tích đỉnh của mẫu thử:

St = 876755

- Hàm lượng (%) hoạt chất:

X = ST

SC x

P

876755

15,3 mg

= 107,16 %

TRẢ LỜI CÂU HỎI CHUẨN BỊ BÀI

Câu 1 Kiểu rửa giải của pha động trong bài thực tập thuộc loại đẳng dòng hay

gradient?

TL: Rửa giải đẳng dòng

Câu 2 Chất lượng của dung môi sử dụng để triển khai HPLC thuộc loại nào? Sử

dụng dung môi này để chiết xuất được không? Ngược lại, có thể sử dụng dung môi chiết xuất thông thường để chuẩn bị pha động trong HPLC hay không? Tại sao? TL: - Dung môi triển khai HPLC phải tinh khiết, loại chuyên dùng để triển khai HPLC

- Có thể sử dụng dung môi triển khai HPLC dùng để chiết xuất được

- Không dùng dung môi chiết xuất thông thường để chuẩn bị pha động vì không tinh khiết, lẫn tạp nhiễu

Câu 3 Đầu dò trong bài thực tập thuộc lại đầu dò nào? Ưu và nhược điểm của đầu

dò này?

TL: Đầu dò dãy diod quang PDA (Photo Diod Aray Detector)

- Ưu điểm: dễ dàng sử dụng với độ tin cậy cao, không phá huỷ mẫu thử, tương đối nhạy và đặc hiệu, phát hiện ở nhiều bước sóng khác nhau, và thích hợp cho nghiên cứu

- Nhược điểm: giá thành đắt hơn nhiều so với đầu dò UV thông thường

Câu 4 Cần chú ý thông số sắc kí nào khi định lượng đồng thời từ 2 chất trở lên

bằng HPLC?