Nghiên cứu thành phần hóa học của cây bạch hoa xà

- Đặt vấn đề. - tổng quan - nguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu. - Kết quả và bàn luận - Kết luận và kiến nghị.

Trần văn quang

nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả năng kháng khuẩn trên in vitro của chế phẩm kem Silver sulfa 1%

Ngườiưhướngưdẫnư:

TS Nguyễn Thị Lộc

Đặt vấn đề

Bỏng là một bệnh ngoại khoa khá quan trọng

Để điều trị bỏng các chế phẩm của sulfadiazin bạc có

nhiều u điểm đã đ ợc chứng minh trong lâm sàng.

Viêc cung ứng thuốc có khó khăn

Các mục tiêu cụ thể của khóa luận :

PhÇn I Tæng quan tµi liÖu

1 Tû lÖ m¾c bÖnh báng

Thêi b×nh : 1,8% - 10% so víi chÊn th ¬ng ngo¹i khoa.

Trong chiÕn tranh : 3% - 10% tæng sè th ¬ng binh vµ cã thÓ lªn tíi 70% - 85%.

2 Thuèc mì s¸t khuÈn ®iÒu trÞ vÕt báng t¹i chç

* Kem maduxin;* Mì cao vµng;* Damcream

* ChÕ phÈm chøa ho¹t chÊt sulfadiazin b¹c nh :

Sivadene (Mü), Flammazin (Ph¸p), Silvirin (Ên §é),

Slivin (Pakistan)…

* sulfadiazin có tác dụng kìm khuẩn : do cạnh tranh ức chế với PABA.

* Ion bạc:

Ion bạc chuyển cầu nối giữa 2 nitơ thuộc 2 nhân

purin đối diện Do vậy đã làm mất khả năng

sinh sản phân đôi của vi khuẩn

Phối hợp: nhân pyrimidin sẽ dễ dàng làm vận

chuyển ion bạc qua màng vi khuẩn.

* Cơ chế tác dụng khác với các hợp chất bạc

khác, khác với sulfadiazin đơn độc.

3.2 Cơ chế tác dụng.

3.3 T¸c dông kh¸ng khuÈn.

B¶ng 1: Kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn trªn invitro cña sulfadiazin b¹c

S aureus 100/101 101/101

S epidermidis 51/51 51/51 Enterococus (nhãm D) 52/53 52/53

3.4 Hấp thu thuốc.

* Các nghiên cứu về hấp thu với Ag 111 cho thấy hầu hết

thuốc tích tụ ở lớp biểu bì (có tác dụng tại chỗ)

Khoảng 10% l ợng sulfadiazin bôi tại chỗ đ ợc hấp thu

Để đo sulfadiazin và các chất chuyển hoá đặc hiệu cần

- Không gây đau khi bôi

- Không gây rối loạn điện giải hay kiềm toan

- Không làm bẩn y phục hay vải trải gi ờng

1 Vật liệu trang thiết bị

1.1 Vật liệu hoá chất.

- Bạc sulfadiazin đạt tiêu chuẩn USP 24

- Các tá d ợc cần thiết đạt tiêu chuẩn DĐVN III

- Các chất bảo quản, các chất chống ôxy hoá đạt tiêu chuẩn DĐVN III

- Các dung môi dùng cho SKLM, HPLC-pp

- Màng nhân tạo cellophan

- Các hoá chất khác cần thiết

Phần II Vật liệu và ph ơng pháp nghiên cứu

1.2 Dụng cụ, trang thiết bị.

- Cân phân tích độ chính xác 0,1mg của Trung Quốc

- Máy ly tâm của Nhật Bản

- Tủ điều nhiệt giữ đ ợc nhiệt độ ở 400C, Trung Quốc

- Bản mỏng Silicagel 60 F254 ,VKN cung cấp

- Đèn huỳnh quang soi ở b ớc sóng 254 nm

- Thạch Muller - Hinton

- Các chủng vi khuẩn: S aureus, P aeruginosa, E coli

- Dụng cụ nghiên cứu khả năng giải phóng d ợc chất ra khỏi tá d ợc thuốc mỡ

- Máy sắc ký lỏng cao áp hiệu năng cao Shimadzu

- Các dụng cụ cần thiết khác trong phòng thí nghiệm

2.3 Các b ớc nghiên cứu mô hình kem Silver sulfa 1%.

Loạibớt CT có độ giải phóng kém

Hình 4: Các b ớc nghiên cứu mô hình kem Sliver sulfa 1%

* Nghiên cứu tìm chất chống ôxy hoá

Ion bạc trong công thức hoạt chất rất dễ bị ôxy hoá

-Nghiên cứu với 4 chất chống ôxy hoá sau:

Natri sulfit ,natri bisulfit,natri metasulfit,hydro quinon

- Hàm l ợng : 0,05%; 0,10% và 0,15%

- Thời điểm:

t0: ngay sau khi bào chế t1 sau khi bào chế 1 ngày, t2

sau khi bào chế 3 ngày, t3 sau khi bào chế 7 ngày

- Ph ơng pháp đánh giá : xem xét sự thay đổi màu sắc

Hình 5: Sơ đồ quy trình bào chế kem Silver sulfa 1%

Chuẩn bị d ợc chất Chuẩn bị tá d ợc

-ưưưĐiều kiện 1:

Ly tâm thuốc mỡ mới bào chế trong vòng 5 phút với tốc độ 600v/phút ở nhiệt độ 20  10C Quan sát sự phân lớp của thuốc mỡ

- Điều kiện2:

Đặt thuốc mỡ ở 40  10C trong vòng 1 ngày đêm Quan sát sự thay đổi của thuốc mỡ

-Lựa chọn ba công thức bền vững nhất nghiên cứu

độ giải phóng hoạt chất

2.3.3.ư(Bướcư3):ưNghiênưcứuưđộưgiảiưphóngưhoạtưchấtư quaưmàngưcellophan

*Khuếch tán thuốc qua màng:

- Ngăn trên : 3g thuốc mỡ

- Môi tr ờng khuếch tán : 25ml dung dịch NH 4 OH 2,5%

- Thời gian t 1 , t 2 , t 3 , t 4 đã định sẵn.

* Định tính hoạt chất giải phóng: SKLM(DĐVN I)để

xác định đã có hoạt chất giải phóng và xác định t 1.

*Định l ợng nồng độ : ph ơng pháp HPLC.

- Với mỗi CT, ở 1 thời điểm t, khuếch tán 5 mẫu để tính l ợng hoạt chất giải phóng qua màng bằng ph ơng

-ưưXâyưdựngưđườngưchuẩn: bằng ph ơng pháp bình

ph ơng tối thiểu.ư

-ưưCácưthôngưsốưcủaưphươngưphápưHPLC :

+ Pha động là một hệ dung môi A: B = 28 : 72 với

Dung môi A là hỗn hợp : Acetolnitrile

Sử dụng ph ơng pháp khuếch tán trên gel thạch:

Thạch Muller - Hinton đổ đĩa đ ờng kính 9cm, đục 2 lỗ

đối xứng có đ ờng kính 1cm, 1 lỗ cho Silver sulfa 1%

(công thức có độ giải phóng hoạt chất tốt nhất tìm đ ợc ở

b ớc 3), lỗ còn lại cho thuốc đối chứng Silvirin 1% Sử

dụng 3 đĩa thạch cho 3 chủng vi khuẩn S aureus; P

aeruginosa; E coli (theo quy định của DĐVN)

1 KÕt qu¶ x©y dùng c«ng thøc bµo chÕ.

Sorbitol 8,0g ChÊt b¶o qu¶n 0,2g

N íc tinh khiÕtv® 100ml

CT 5:

Sulfadiazin b¹c 1,0g Alcol cetylic 3,0g DÇu paraffin 20,0g Glycerol stearat 2,9g Polysorbat 80 3,1g Glycol propylen 7,0g

Lùa chän chÊt chèng oxy ho¸.

B¶ng­2:­HiÖu­lùc­b¶o­vÖ­chèng­«xy­ho¸­cña­natri­bisulfit.

Thêi ®iÓm Hµm l îng

2 Kết quả nghiên cứu sơ bộ độ bền vững.

3 Kết quả đo giải phóng hoạt chất

3.1 Kết quả định tính hoạt chất giải phóng qua màng:

+ Chuẩn 1: nồng độ hoạt chất 2,12g/ml.

+ Chuẩn 2: nồng độ hoạt chất 5,30g/ml

+ Chuẩn 3: nồng độ hoạt chất 10,60g/ml

Bảng 5: Nồng độ d ợc chất giải phóng qua màng theo

thời gian của CT3(nư=ư5;SDư=ư0,0018)

*Tính tỷ lệ% d ợc chất giải phóng qua màng:

Công thức tính tỷ lệ% d ợc chất giải phóng qua màng:

25100

250

B¶ng 6: Tû lÖ % ho¹t chÊt ® îc gi¶i phãng qua mµng

cña c¸c CT theo thêi gian

B¶ng­7:­Tû­lÖ­%­ho¹t­chÊt­®­îc­gi¶i­phãng­qua­mµng­ cña­Silvirin­1%­­theo­thêi­gian(n = 5;SD = 0,0018)

t 1 3,460 628819 3,002 2,502

t 2 3,358 657693 4,831 4,026

t 3 3,448 1048732 5,017 4,182

t 4 3,444 1328906 7,544 6,287

Bảngư8:ưSoưsánhưtỷưlệư%ưhoạtưchấtưđượcưgiảiưphóngư quaưmàngưcủaưCT3ưvớiưSilvirinư1%ưưtheoưthờiưgian

Nồng độ giải phóng qua

màng (x%) CT3 Silvirin 1%

Tỷ lệ nồng độ giải phóng qua màng CT3 / Silvirin 1%

5 KÕt qu¶ ®o kh¸ng khuÈn trªn invitro.

Kết luận

- Đã xây dựng đ ợc công thức kem Silver sulfa 1% (CT3) có hình thức cảm quan đạt yêu cầu, có độ ổn

định bền vững trong điều kiện bình th ờng vì đã ổn

định trong điều kiện khắc nghiệt

- Khả năng giải phóng hoạt chất qua màng của CT3

và Silvirin 1% là t ơng đ ơng nhau Nh vậy kem Silver sulfa 1% có độ giải phóng hoạt chất tốt, cốt tá d ợc không cản trở khả năng giải phóng hoạt chất của

kem

- Khả năng kháng khuẩn của CT3 là t ơng đ ơng với

Kiến nghị.

Tiếp tục nghiên cứu các tính chất khác của kem Silver sulfa 1%:

* Nghiên cứu độ ổn định lâu dài

* Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất và kháng khuẩn trên invivo

* Nghiên cứu độc tính cấp và tr ờng diễn

* Nghiên cứu hiệu lực điều trị của kem