đối tượng, đặc điểm, ưu nhược điểm của từng phương pháp Có 2 phương pháp nuôi cấy : đó là phương pháp nuôi cấy bề mặt và phương pháp nuôi cấy bề sâu hay là phương pháp nổi và phương pháp
Trang 1Bài 1 : NUÔI CẤY VI SINH VẬT THU CHẾ PHẨM ENZYM
1. Bài thí nghiệm nuôi cấy trong môi trường nào>?
Phương pháp nuôi cấy bề mặt trên môi trường cám trấu
Phương pháp nuôi cấy chìm trong môi trường lỏng
2. Môi trường Shapec tinh bột và môi trường hutchinson có những thành phần nào?
Môi trường Hutchinson : KNO3 2,5 K2HPO4 1,0 MgSO4 0,3 CaCl2 0,1 NaCl 0,1 FeCl3 0,01 Agar 3% Nước máy 1000ml
3. nguyên tắc xác định định tính hoạt lực của enzim?
4. enzim từ vi sinh vật so với động vật và thực vật khác nhau như nào lấy dẫn chứng?
Enzyme từ vi sinh vật có hoạt lực cao hơn nhiều so với enzyme từ động thực vật
Vd Trong 24h VSV có thể chuyển hóa lg gấp 30-40 lần trọng lượng cơ thể của nó trong khi đó enzyme của lơn trên 50kg chỉ có thể chuyển hóa đc vài
ba kg thức ăn trong 1 ngày
5. enzim là gì? Enzyme là chất xúc tác có bản chất là protein được cơ thể tổng hợp tham gia vào các phản ứng sinh học
6. protein nào thì được coi là enzim?
Protein được coi là enzyme là protein hoạt hóa Protein hoạt hóa là protein
có tâm hoạt động tạo lớp vỏ hydrat hóa Khi không được hoạt hóa thì sẽ không nhận biết được cơ chất nên sẽ không hoạt động
7. phân loại enzim?
Theo nguồn gốc enzyme chia làm 3 loại - từ động vật, thực vật và vsv
Theo cấu trúc của hệ enzyme: enzyme 1 thành phần và 2 thành phần
Theo loại phản ứng mà enzyme xúc tác: có 6 loại : oxydoreductase,
transferase, lyase , isomerase, ligase,hidroase
Theo đặc hiệu của enzyme: đặc hiệu phản ứng và đặc hiệu cơ chất
Theo môi trường thì có theo nhiệt độ và theo pH
8. asp usami, asp oryzae, End, asp niger chứa loại enzim gì vd cái usami cho amylaza nhưng trong amylaza có glucoza, dextrinaza anpha cả beta thì cái usami cho cụ thể là enzym gì?
Trang 2Asp usami: dextrinase, glucoamylase
asp oryzae : alpha amylase
9. có mấy phương pháp pháp nuôi cấy đối tượng, đặc điểm, ưu nhược điểm của từng phương pháp
Có 2 phương pháp nuôi cấy : đó là phương pháp nuôi cấy bề mặt và phương pháp nuôi cấy bề sâu hay là phương pháp nổi và phương pháp chìm
- Phương pháp bề mặt: * đối tượng ( chắc là môi trường ) : cám gạo cám mì
- Đặc điểm : vsv phát triển và bao phủ trên bề mặt các hạt chất dinh dưỡng rắn đã được làm ẩm, dung làm môi trường, VSV lấy thức ăn từ chất chứa trong môi trường và sd phân tử oxy kk để hô hấp VSV phát triển nhanh chóng nhưng nấm mốc k thu được sự nuôi dưỡng quá dồi dào nên sự tân tạo ra enzyme sẽ được hoàn thành nhanh chóng : 36-48 tiếng
- Phương pháp nuôi cấy bề sâu: : đối tượng : vsv phát triển trong môi trường lỏng
- Đặc điểm: thôi đọc trang 412 hóa sinh công nghiệp nhé: dài lắm
)))))))))))))))
Khi so sánh 2 phương pháp người ta thấy phương pháp nuôi cấy bề mặt có một số ưu điểm như sau: nồng độ các enzyme được tạo thành trong canh trường bề mặt lớn hơn bề sâu rất nhiều Dù đã bị pha loãng thì dịch trích ly
từ canh trường bề mặt của nấm mốc vấn có hoạt độ enzyme cao hơn
Một ưu điểm nữa là canh trường nấm mốc bề mặt khi sấy khô dễ dàng và nhanh chóng mà k gây tổn thất đáng kể đến hoạt độ của enzyme( dễ dàng chuyên chở trong mọi trường hợp mà chất lượng k bị giảm sút ) Ngoài ra canh trường bề mặt xảy ra trong môi trường không thật thanh trùng Đó cũng là ưu và nhược điểm của canh trường bề sâu vì chỉ một sai sót nhỏ cũng làm nhiễm trùng hoàng loạt và ngừng vc tạo ra enzyme
Tuy nhiên pp chìm xét về tính chất kỹ thuật thì hiện đại hơn vì dễ dàng cơ khí hóa và tự động hóa.chuyển sang quy mô lớn dễ dàng
10. vai trò của cám gạo, trấu, ngô, gelatin?
Trang 3Tạo cho môi trường cấu trúc cần thiết ở trạng thái ẩm cung cấp lượng tinh bột cần thiết cho sự tổng hợp enzyme Nếu hàm lượng tinh bột trong cám ít hơn 20% thì hoạt lực của enzyme cũng bị giảm
11. nhóm tôi bảo cái cám, nguồn cung cấp dinh dưỡng vs tinh bột thì tại sao? Thấy bảo vì là vsv dị dưỡng ak nên phải cung cấp tinh bột :v
Trang 4Bài 2 : Xác định hoạt lực HdG của chế phẩm nuôi
cấy bề mặt
Câu 1 : Mục đích thí nghiệm : Xác định hoạt lực Glucoamilaza của chế phẩm nuôi cấy bề mặt
Cụ thể trong bài này xác định enzyme glucoamylaza được lấy từ môi trường cám trấu( định lượng )) và môi trường Hutchinson ( định tính)
Câu 2 : Khuẩn lạc là gì?
Khuẩn lạc là tập hợp các sợi nấm dc hình thành từ TB nuôi cấy ban đầu
Câu 3: Cách tiến hành Tự đọc vậy
Câu 4 : Tại sao phải nghiền nhỏ chế phẩm enzyme?
Phải nghiền nhỏ emzyme để phá vỡ cấu trúc sợi nấm , giải phóng toàn bộ enzyme, giúp hòa tan hết lượng enzyme
Câu 5 : Tại sao chỉ nghiền 5g? hơn hoặc thiếu có được k?
Nếu ít hơn 5g thì nồng độ enzyme nhỏ => khó phân tích ( do không thể hiện rõ đặc trưng
Nếu nhiều hơn 5g thì tỉ lệ thu hồi nhỏ hơn Dù lượng enzyme nhiều => không đánh giá được chính xác hoạt lực enzyme ( do lượng enzyme hòa tan vào dd đã bão hòa ko tan nữa => mất mát 1 lượng enzyme)
Câu 6 : tác dụng của dung dịch đệm?
Trong bài này dung dịch đệm được sử dụng 2 lần :
Lân 1 : khi thu dịch chiết (5ml) Được sử dụng để ổn định pH tạo môi trường tốt nhất cho vsv phát triển ngay từ đầu Nếu không tạo cho chúng điều kiện tốt nhất
Trang 5để phát triển thì giai đoạn sau dù tạo điều kiện chúng cũng k thể phát triển hoàn toàn( không tạo được hoạt lực như mong đợi)
Lần 2 : Khi thực hiện phản ứng thủy phân (2ml)
Câu 7: Enzyme amilaza có mấy loại?
6 loại : α-amilaza, β- amilaza, γ-amilaza, dextrinaza, amylopectin, dextrin-1,6-glucosidaza
Tính chất thì có đầy đủ tính chất của 1 enzyme
Câu 7 : câu hỏi liên quan đến dextrin
Dextrin là sản phẩm trung gian của q úa trình phân giải tính bột
Dextrin phân tử lượng lớn thì tạo màu với Iot còn phân tử lượng nhỏ thì không Dextrin có khả năng hoạt hóa cao, tham gia vào sự hình thành và ổn định cấu trúc bâc 3 của protein
Câu 8 câu hỏi j mà liên quan đến phân cắt enzyme
- α- amilaza của nấm môc thủy phân tinh bột có 2 giai đoạn cắt
• Dextrin hóa
• Đường hóa Cắt 1 gốc - > glucoza
Cắt 2 gốc -> Maltoza
Cắt nhiều gốc -> dextrin
Enzyme α-amilaza cắt bất kì liên kết α-1,4-glicozit trong tinh bột không có trật tự, cắt ngẫu nhiên,
Giai đoạn dextrin hóa độ nhớt của tinh bột giảm
Từ α- amilaza có sản phẩm chủ yếu là dextrin , một phần rất ít glucoza
Trang 6- Enzyme β-amilaza cắt liên kết α1,4 glicozit từ đầu 0 khử, cắt theo trật tự
2 gốc glucoza 1 Thành phần chủ yếu là Maltoza ( 54-58%) 1 phần
dextrin có PTL lớn có màu tím đỏ với iot
- Ezyme γ amylaza ( glucoamilaza)
Cắt α1,4 và 1,6 glicozit từ đầu k khử, cắt từng gốc 1 Sản phẩm chính là glucoza
Câu 17: Phương trình phản ứng : tự tìm nhé
Câu 18 :Hoạt lực là gì ? là lượng cơ chất mất đi hoăc sản phẩm tạo thành enzyme trong 1 đơn vị tg hoặc trọng lượng enzyme sử dụng trong 1 đkiện t0, pH… xác định
Câu 19: Có cần thiết vô hoạt hoàn toàn không?
Không cần thiết ( không chắc lắm ) Các yếu tố ảnh hưởng đến sự vô hoạt: To, lượng enzyme, thời gian vô hoạt
Câu 20: Tại sao phải sử dụng mẫu kiểm chứng?
Để xem dưới tác dụng của các tác nhân vly hóa học thì hoạt lực của enzyme bị ảnh hưởng ntn?
Câu 21 Ca2+ , Mg2+ ảnh hưởng j đến hoạt lực enzyme α-amilaza?
Câu 22: cơ chế thủy phân enzyme amilaza
thí nghiệm hóa sinh hay hỏi mấy câu này
1 bài thí nghiệm nuôi cấy trong môi trường nào
2 môi trường shapec tinh bột, hutchinson có thành phần như nào
3.nguyên tắc xác định định tính hoạt lực của enzim
3 có 2 shapec tinh bột thaafy chuẩn bị vs 1 hutchinson tại sao tinh bột lại 2 cái kia lại 1
4 enzim từ vi sinh vật so với động vật và thực vật khác nhau như nào lấy dẫn chứng
Trang 75.enzim là gì
6 protein nào thì được coi là enzim
7 phân loại enzim
8.asp usami, asp oryzae, End, asp niger chứa loại enzim gì vd cái usami cho
amylaza nhưng trong amylaza có glucoza, dextrinaza anpha cả beta thì cái usami cho cụ thể là enzym gì Biểu tượng cảm xúc smile
9 có mấy phương pháp pháp nuôi cấy đối tượng, đặc điểm, ưu nhược điểm của từng phương pháp
10 cái môi trương đi tiệt trùng xong ra làm nguội có nước ngưng đem cấy xong lật lại cái nước ngưng được sử dụng để làm gì
11.vai trò của cám gạo, trấu, ngô, gelatin
12 nhóm tôi bảo cái cám, ngoo cung cấp dinh dưỡng vs tinh bột thì tại sao
13 có bốn cốc riêng biệt để cân 4 cái đấy tại sao lại cần 4 cái cốc
Một số gợi ý trả lời
• So sánh hoạt lực của enzym:
Không so sánh được tuy cùng thực hiện phản ứng thủy phân nhưng đối tượng cơ chất
và enzym khác nhau (đã nói ngay từ bài đầu) Ai trả lời hoạt lực của những enzym này mạnh (cao) không được tính (câu hỏi so sánh ko phải đánh giá)
• Xác định cơ chất protein con hay hết theo thời gian:
Dựa trên phản ứng giữa protein và fehling I trong môi trường kiềm (hóa chất trong bài 2 đã sử dụng)
• Tại sao phải đun sôi phản ứng đường khử
Phản ứng oxi hóa khử giữa đường được tạo ra và fehling I là phản ứng thu nhiệt, ko phải tỏa nhiệt
• Vai trò của nước trong phản ứng đường khử
Trang 8Ngăn phản ứng chuyển hóa Cu(OH) 2 thành Cu 2 O
• So sánh hoạt lực các enzym đã tiến hành định tính
So sánh giữa Endo và Usami
• Các a xít aamin làm cho một protein có khả năng xúc tác
Aspatic, systein, serin, glutamic….(đã nói ở bài 2)
Các cuvet tuy làm cùng vật liệu nhưng vẫn có sự khác nhau về độ chiết quang, nếu dùng 2 hay nhiều cuvet khác nhau sẽ làm cho kết quả ko chính xác vì sự khác nhau
về độ chiết quang gây ra
• Vật liệu làm môi trường nuôi cấy thu enzym
Dựa trên đặc điểm sinh lý của loại được cấy để tổng hợp enzym
Các thành phần được sử dụng phải đám bảo cung cấp các thành phần dinh dưỡng cần thiết cho sự sinh tổng hợp enzym
Không có chứa các độc tố (chất ức chế) quá trình sinh tổng hợp enzym
(đã nói rất rõ ở bài 1)
• Hiện tượng quan sát được khi thủy phân protein
- Mẫu thủy phân: màu sắc của hỗn hợp dịch chiết và cơ chất ban đầu như thế nào và khi cho TCA thì thay đổi như thế nào và giải thích
- Mẫu kiểm chứng: Màu sắc của hỗn dịch chiết và TAC như thế nào và khi cho
cơ chất vào thì thay đổi như thế nào và giải thích
• Hiện tượng quan sát được khi thủy phân tinh bột
- Mẫu thủy phân thì lượng cơ chất thay đổi như thế nào sau thời gian phản ứng
- Mẫu kiểm chứng mầu sắc khi thực hiện phản ứng tinh bột và I 2 theo thời gian như thế nào
• Mục đích của mẫu kiểm chứng
- Để đánh giá ảnh hưởng của yếu tố ảnh hưởng đến hoạt lực của enzym (nhiệt độ (bài 2), chất kìm hãm, ức chế như thế nào (bài 3))
• Vắn tắt đặc điểm của enzym
- Tối thiểu nêu được những enzym đó là một nhóm enzym (nội, ngoại) có khả năng phân cắt liên kết gì, cắt như thế nào, có thể cho ra những sản phẩm gì Nếu nói thêm được tính đặc hiệu, thì sẽ được đánh giá cao hơn)
• Khi nào dùng định tính, định lượng
- Định tính khi muốn đánh giá nhanh hoạt lực của enzym
Trang 9- Định lượng khi muốn đánh giá chính xác khả năng chuyển hóa cơ chất của enzym đó đến đâu
- Về mối quan hệ giữa định tính và định lượng: Định tính là nền tảng để thực hiện định lượng (đã nói rõ ngay bài 1)
• Các yếu tố ảnh hưởng
- Dựa trên khả năng nhận thức đánh giá của mỗi người giống như các kết quả của bài 2 có thể xảy ra