DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE Staphylococcus spp. COAGULASA POSITIVO Y SUS PATRONES DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN CASOS DE PIODERMATITIS CANINA EN LA CLÍNICA VETERINARIA FMVZ-UCE

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE Staphylococcus spp.. COAGULASA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE Staphylococcus spp COAGULASA

POSITIVO Y SUS PATRONES DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN CASOS DE PIODERMATITIS CANINA EN LA CLÍNICA VETERINARIA FMVZ-

UCE

Autor: Catherine Elizabeth Tulcán Álvarez

Tutora: MSc Juliette Cadier

Quito, Diciembre del 2018

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE Staphylococcus spp COAGULASA

POSITIVO Y SUS PATRONES DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN CASOS DE PIODERMATITIS CANINA EN LA CLÍNICA VETERINARIA FMVZ-

UCE

Informe final de investigación presentado como requisito para optar el Título de

Médico Veterinario Zootecnista

Autor: Catherine Elizabeth Tulcán Álvarez

Tutora: MSc Juliette Cadier

Quito, Diciembre del 2018

DERECHOS DEL AUTOR

Yo Catherine Elizabeth Tulcán Álvarez en calidad de autora y titular de los

derechos morales y patrimoniales del trabajo de titulación “DETERMINACIÓN

DE LA PRESENCIA DE Staphylococcus spp COAGULASA POSITIVO Y

SUS PATRONES DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN CASOS DE PIODERMATITIS CANINA EN LA CLÍNICA VETERINARIA FMVZ-UCE”,

modalidad Proyecto de Investigación , de conformidad con el Art 114 del

CONOCIMIENTOS, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN, concedo a favor de la Universidad Central del Ecuador una licencia gratuita, intransferible y no exclusiva para el uso no comercial de la obra, con fines estrictamente académicos Conservo a mi favor todos los derechos de autor sobre la obra, establecidos en la normativa citada

Así mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la digitalización y publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior

El autor declara que la obra objeto de la presente autorización es original en su forma de expresión y no infringe el derecho de autor de terceros, asumiendo la responsabilidad por cualquier reclamación que pudiera presentarse por esta causa y liberando a la Universidad de toda responsabilidad

En la ciudad de Quito, a los 11 días del mes de Diciembre del 2018

Catherine Elizabeth Tulcán Álvarez C.I 1723843403

cetulcan@uce.edu.ec

INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, Juliette Cadier en mi calidad de tutora del trabajo de titulación, modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por CATHERINE ELIZABETH TULCÁN ÁLVAREZ; cuyo título es: “DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE

Staphylococcus spp COAGULASA POSITIVO Y SUS PATRONES DE

RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN CASOS DE PIODERMATITIS CANINA

EN LA CLÍNICA VETERINARIA FMVZ-UCE”, previo a la obtención del Grado

de Médico Veterinario Zootecnista; considero que el mismo reúne los requisitos

y méritos para ser sometido a la evaluación por parte del tribunal examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo sea habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad Central del Ecuador

En la ciudad de Quito, a los 11 días del mes de Diciembre del 2018

-

MVZ Juliette Cadier MSC

Tutora

C.I

INFORME DE APROBACIÓN DEL TRIBUNAL

Luego de Calificar el Informe Final de Investigación del trabajo de titulación denominado “DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE Staphylococcus

spp COAGULASA POSITIVO Y SUS PATRONES DE RESISTENCIA A

ANTIBIÓTICOS EN CASOS DE PIODERMATITIS CANINA EN LA CLÍNICA VETERINARIA FMVZ-UCE”, previo a la obtención del título de Médico

Veterinario Zootecnista presentado por la señorita Catherine Elizabeth Tulcán Álvarez

Emite el siguiente veredicto: ………

Fecha: ………

Para constancia de lo actuado firman: Presidente: Dra María Belén Ceballos… ………

Vocal principal: Dr Cristian Vinueza………

Vocal principal: Dr Julio Soria………

Tutor: Dra Juliette Cadier.………

Dedicatoria

A Dios, por permitirme llegar a este momento tan especial en mi vida A mis

padres quienes con sus consejos han sabido guiarme, acompañándome

durante todo mi trayecto estudiantil y de la vida, a mi familia y amigos quienes

me han brindado su amistad y su apoyo incondicional

de sus sabios consejos

A mi tutora, Dra Juliette Cadier, por su valiosa guía y asesoramiento a la realización de la investigación

A la Universidad Central del Ecuador, en especial a la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, a su personal docente, por compartir sus conocimientos

y experiencias

ÍNDICE GENERAL

ÍNDICE DE FIGURAS IX ÍNDICE DE TABLAS X INDICE ABREVIATURAS Y SÍMBOLOS XI

RESUMEN 1

ABSTRACT 2

CAPÍTULO I 3

INTRODUCCIÓN 3

CAPÍTULO II 5

OBJETIVOS 5

CAPÍTULO III 6

REVISIÓN DE LITERATURA 6

3.1 PIODERMA CANINA 6

3.2 FACTORES PREDISPONENTES 7

3.3 SIGNOS CLÍNICOS DE PIODERMA 8

3.4 DIAGNÓSTICO CITOLÓGICO LABORATORIAL DE PIODERMA 9

3.5 TRATAMIENTO DE LA PIODERMA EN CANINOS 10

3.6 GÉNERO STAPHYLOCOCCUS SPP COAGULASA POSITIVOS 11

3.6.1 STAPHYLOCOCCUS AUREUS 11

3.6.2 STAPHYLOCOCCUS PSEUDINTERMEDIUS 12

3.7 IDENTIFICACIÓN FENOTÍPICA DE LAS ESPECIES DE STAPHYLOCOCCUS SPP COAGULASA POSITIVA 12

3.8 RESISTENCIA ANTIMICROBIANA 14

3.9 IMPORTANCIA EN SALUD PUBLICA 15

CAPÍTULO IV 17

ASPECTOS METODOLÓGICOS 17

4 MATERIALES Y MÉTODOS 17

4.1 MATERIALES 17

4.2METODOLOGÍA 18

4.2.1 REQUISITOS PARA SELECCIÓN DE LOS ANIMALES 18

4.2.2POBLACIÓN Y MUESTRA 18

4.2.3UBICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN 18

4.2.4PROCEDIMIENTO DE LA INVESTIGACIÓN 19

4.2.5IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICAS MEDIANTE TINCIÓN 19

4.2.8CULTIVO 20

4.2.9IDENTIFICACIÓN FENOTÍPICA 21

4.2.10PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA 25

4.2.11CONSERVACIÓN Y MANTENIMIENTO DE LAS CEPAS 27

4.2.12ANÁLISIS ESTADÍSTICO 27

CAPÍTULO V 28

RESULTADOS Y DISCUSIÓN 28

CAPÍTULO VI

CONCLUSIONES 38

BIBLIOGRAFÍA 40

ANEXOS 46

ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1 Toma de muestra de una lesión costrosa y supurativa 19

Figura 2 Citología de pioderma canina A: Neutrófilos polimorfonucleares con bacterias fagocitadas en tinción Giemsa B: Bacterias cocos Gram positivos en tinción Gram 20

Figura 3 Staphylococcus spp en agar Sal Manitol(A),Sangre(B) y Chocolate(C) 21

Figura 4 Algoritmo de la determinación fenotípica de S aureus y S pseudintermedius 22

Figura 5 S pseudintermedius en Agar Purpura de Bromocresol 25

Figura 6 Medición del halo de inhibición bacteriana 26

ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1 Clasificación de las piodermas según las lesiones clínicas (modificada

de Beco et al., 2013a) 8

Tabla 2 Pruebas fenotípicas para la discriminación entre S pseudintermedius y

S aureus aislados de caninos (modificada de Quinn Patrick et al., 2011; Bannoehr & Guardabassi, 2012 ) 13

Tabla 3 Frecuencia de la presencia de lesiones primarias y secundarias en el

diagnostico positivo y negativo de pioderma 28

Tabla 4 Frecuencia de las regiones corporales afectas en un diagnóstico de

pioderma canina 30

Tabla 5 Características demográficas de la población estudiada (n=40)

Frecuencia absoluta (n) y frecuencia relativa (%) de hembras y machos de acuerdo a su estado reproductivo, raza y edad 31

Tabla 6 Porcentaje de especies aisladas de Staphylococcus spp coagulasa

positivos en piodermas caninas 32

Tabla 7 Resultados de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana realizadas al

total de los aislamientos de Staphylococcus spp coagulasa positivos 33

Tabla 8 Perfiles de resistencia antimicrobiana de Staphylococcus spp

coagulasa positivo en muestras clínicas de piodermas caninas 35

INDICE ABREVIATURAS Y SÍMBOLOS CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute

CoPS: Staphylococcus spp Coagulasa positivos

MRS: Estafilococos resistentes a la meticilina

MRSA: Staphylococcus aureus resistente a la meticilina

MRSP: Staphylococcus pseudintermedius resistente a la meticilina

SCC: Casete cromosomal estafilocócico

SIG: Grupo Staphylococcus intermedius

pbp2a: proteína de unión a la penicilina 2a

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

Determinación de la presencia de Staphylococcus spp coagulasa positivo

y sus patrones de resistencia a antibióticos en casos de piodermatitis canina en la clínica veterinaria FMVZ-UCE

Autor: Catherine Tulcán Tutora: MVZ Juliette Cadier Fecha: Diciembre 2018

RESUMEN

En Clínica Veterinaria de la Universidad Central del Ecuador fueron atendidos

40 caninos con diagnóstico clínico de pioderma Se tomaron hisopados de las lesiones que presentaron los pacientes y se realizaron cultivos bacterianos y pruebas de sensibilidad antimicrobiana Con el objetivo de identificar las

especies de Staphylococcus spp coagulasa positivas, involucradas en esta

patología y determinar su susceptibilidad antimicrobiana a fármacos de uso

común en la práctica clínica La especie aislada con mayor frecuencia fue S pseudintermedius 95% (38/40), de las cuales 17/40 (42,5%) se determinaron

oxacilino resistentes y de estas 14 cepas expresaron multirresistencia a más de

3 familias de antimicrobianos Entre los antibióticos probados, las cepas presentaron mayor porcentaje de resistencia a: penicilinas (90%), tetraciclina (55%), clindamicina (40%) y eritromicina (40%) Las cepas presentaron altos porcentajes de sensibilidad a: ciprofloxacina (87%), gentamicina (72%), cefalosporinas(67%), enrofloxacina (67%) y sulfametoxazol/trimetoprima (65%)

De los 40 aislamientos tan solo 4 cepas fueron sensibles a todos los antimicrobianos La identificación de cepas oxacilino resistentes en la población canina estudiada justifica las pruebas bacteriológicas, las cuales son una herramienta importante para colaborar en la utilización responsable de los antimicrobianos en medicina veterinaria

Palabras clave: Staphylococcus spp coagulasa positivas, Staphylococcus

pseudintermedius, antibiograma, pioderma canina, resistencia antimicrobiana,

oxacilino resistentes

Determination of the presence of coagulase-positive Staphylococcus spp.,

and its patterns of resistance to antibiotics, in cases of canine pyodermatitis in the veterinary clinic of FMVZ-UCE

Author: Catherine Tulcán Tutor: MVZ Juliette Cadier Date: Diciembre 2018 ABSTRACT

For this study, 40 canines with clinical diagnoses of pyoderma were treated at the Veterinary Clinic of Universidad Central del Ecuador (Central University of Ecuador) Swabs were taken from the patients’ lesions, and bacterial cultures and antimicrobial susceptibility tests were carried out in order to identify

coagulase-positive Staphylococcus spp., which is involved in this pathology The

swabs also allowed determining the antimicrobial susceptibility of the strains to drugs commonly used in clinical practice The most frequently isolated species

was S pseudintermedius 95% (38/40), of which 17/40 (42.5%) were determined

as oxacillin-resistant, and of these, 14 strains expressed multiresistance to more than 3 families of antimicrobials Among the antibiotics tested, the assessed strains had a higher percentage of resistance to: penicillins (90%), tetracycline (55%), clindamycin (40%) and erythromycin (40%) The strains presented high percentages of sensitivity to: ciprofloxacin (87%), gentamicin (72%), cephalosporins (67%), enrofloxacin (67%) and sulfamethoxazole / trimethoprim (65%) Of the 40 isolates, only 4 strains were sensitive to all antimicrobials The identification of oxacillin-resistant strains in the assessed canine population justifies the application of bacteriological tests, which are an important tool in facilitating a responsible use of antimicrobials in veterinary medicine

Keywords: coagulase-positive Staphylococcus spp./ Staphylococcus pseudintermedius/ antibiogram/ canine pyoderma/ antimicrobial resistance/

oxacillin-resistant

CAPÍTULO I INTRODUCCIÓN

La piel de un canino está colonizada por bacterias que hacen parte de su microbiota normal, algunos de ellos potencialmente patógenos, por lo que, cuando los mecanismos de defensa de la piel no funcionan adecuadamente, se produce rápidamente una infección, que se conoce como pioderma canina (Fogel & Manzuc, 2009; Loeffler & Lloyd, 2018; Miller H., 2013)

La pioderma es una de las patologías dermatológicas infecciosas más comunes

en la clínica veterinaria(Bannoehr & Guardabassi, 2012; Ríos et al., 2015).Los agentes causales aislados con más frecuencia de esta patología en los caninos

son los Staphylococcus spp coagulasa positivos (CoPS), como Staphylococcus aureus (S aureus) y Staphylococcus pseudintermedius (S pseudintermedius)

(Summers, Brodbelt, Forsythe, Loeffler, & Hendricks, 2012)

Estas bacterias son importantes en dermatología veterinaria porque son comensales de la piel y mucosas de caninos sanos y pueden convertirse en patógenos oportunistas provocando infecciones secundarias piógenas(Quinn Patrick, Leonard, FitzPatrick, Fanning, & Hartigan, 2011) El tratamiento para dichas infecciones rutinariamente se ha basado en la selección empírica de

antimicrobianos con eficacia conocida contra Staphylococcus spp., sin tener en

cuenta la especie y la creación de cepas resistentes a estos agentes antimicrobianos(Loeffler & Lloyd, 2018)

La resistencia a los antimicrobianos es un problema importante en los CoPS

dado que estos organismos pueden adquirir el gen mecA que codifica la

proteína de unión a la penicilina 2a (pbp2a), creando Staphylococcus resistentes a la meticilina (SRM), principalmente S aureus y S pseudintermedius (SARM y SPRM) (Quinn Patrick et al., 2011)(Videla et al.,

2017) Con frecuencia, las cepas resistentes a meticilina son resistentes a muchas otras clases de agentes antimicrobianos como fluoroquinolonas,

lincosamidas, tetraciclinas y sulfonamidas (Llaguno & Soriano, 2015; Vigo, Giacoboni, Gagetti, Pasterán, & Corso, 2015) constituyen un reto para el tratamiento de las infecciones por este tipo de bacteria de forma considerable tanto en medicina veterinaria como humana (Quinn Patrick et al., 2011; Ríos et al., 2015)

Adicionalmente, estas cepas resistentes causan un verdadero desafío a nivel de

salud pública por su transmisión zooantroproótica de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA) y Staphylococcus pseudintermedius resistente

a la meticilina (MRSP) entre animales y humanos (Saputra et al., 2017; Videla

et al., 2017)

Van Hoovels en el 2006 y otros estudios revelaron que las cepas aisladas de perros infectados y sus propietarios, presentaron el mismo tipo y patrón de susceptibilidad antimicrobiana, comprobando la transmisión horizontal de genes

de resistencia (Bond & Loeffler, 2012; Ríos et al., 2015; Van Hoovels, Vankeerberghen, Boel, Van Vaerenbergh, & De Beenhouwer, 2006) Aunque inicialmente se identificaban como patógenos nosocomiales importantes, los MRSA y MRSP ahora se consideran endémicos en la sociedad (Arias et al., 2017)

En la Clínica Veterinaria FMVZ-UCE la casuística de pioderma en caninos es elevada Con este estudio se plantea tomar muestras de lesiones sugerentes a piodermatitis como: pápulas, pústulas, costras, úlceras, collaretes epidérmicos y lesiones con presencia de exudado y confirmar el proceso infeccioso mediante citología dérmica Posteriormente se aislaran colonias de las bacterias y

mediante pruebas fenotípicas se determinara la especie, en este caso S pseudintermedius o S aureus Estas bacterias fueron sometidas a pruebas de

susceptibilidad a antimicrobianos, para determinar sus patrones de resistencia y

de esta manera poder realizar estrategias terapéuticas óptimas con los

antibióticos existentes y limitar aún más la aparición de cepas resistentes

CAPÍTULO II OBJETIVOS

2.1 Objetivo General

• Determinar la presencia de Staphylococcus spp coagulasa

positivo y sus patrones de resistencia a antibióticos en casos de piodermatitis canina en la Clínica Veterinaria FMVZ-UCE

2.2 Objetivos Específicos

• Diagnosticar la presencia de un proceso infeccioso en la piel de

caninos con lesiones sugerentes a pioderma mediante citología dérmica

• Aislar e identificar fenotípicamente a Staphylococcus spp

coagulasa positivo en caninos con piodermatitis

• Realizar un antibiograma de las cepas de Staphylococcus spp

coagulasa positivo, para determinar su resistencia antibiótica

CAPÍTULO III REVISIÓN DE LITERATURA 3.1 Pioderma Canina

La pioderma canina es una infección bacteriana de la piel y de sus estructuras asociadas Rara vez pone en peligro la vida del paciente, pero presenta una alta tasa de morbilidad canina a través del prurito asociado con dolor y cambios inflamatorios severos potencialmente generalizados Es una de las principales presentaciones clínicas dermatológicas que conducen a prescripción antimicrobiana en la práctica de pequeños animales (Loeffler & Lloyd, 2018) Estas presentaciones clínicas de piodermatitis canina son numerosas, por lo que tienen varias clasificaciones: según su fisiopatología (primarias o secundarias), según la extensión de la infección bacteriana (localizada o generalizada) y la más utilizada es de acuerdo a su profundidad dentro del tejido cutáneo que las clasifica en piodermas de superficie, superficiales y profundas (Fogel & Manzuc, 2009; Loeffler & Lloyd, 2018; Summers, Hendricks,

& Brodbelt, 2014)

En las pioderma de superficie, las bacterias colonizan la superficie de la piel, por lo general estas lesiones son localizadas e incluyen presentaciones como parches calientes, dermatitis piotraumática, intertrigo y el síndrome de sobrecrecimiento bacteriano (Fogel & Manzuc, 2009) A diferencia de la pioderma superficial en la cual las bacterias se desarrollan en el interior de los estratos epidérmicos, este es el caso en las foliculitis bacteriana superficial e impétigos (Fogel & Manzuc, 2009)

En la pioderma profunda, las bacterias penetran la membrana basal en la dermis, aumentando la proximidad a los vasos sanguíneos, por lo cual existe el riesgo de diseminación hematógena y bacteriemia, ejemplos de este tipo de

infecciones son: la furunculosis, la celulitis y la pioderma de mentón (Beco et al., 2013b; Loeffler & Lloyd, 2018)

Los agentes causales más comunes de esta infección clínica son los

Staphylococcus spp coagulasa positivos (CoPS) (Saputra et al., 2017;

Summers et al., 2014), dichas infecciones se ven agravadas por la aparición de cepas resistentes a la meticilina (Saputra et al., 2017) Si bien estas especies pueden actuar como patógenos primarios en la pioderma canina, particularmente en pacientes inmunodeprimidos, generalmente son agentes infecciosos secundarios (Fogel & Manzuc, 2009; Summers et al., 2014)

3.2 Factores predisponentes

Los mecanismos de defensa físicos, químicos y microbianos de la piel se encargan de evitar la excesiva colonización de la microbiota normal, protegiendo la piel de infecciones (Fogel & Manzuc, 2009; Summers et al., 2014) Estos mecanismos se pueden ver alterados por factores nutricionales, hormonales, ambientales, infestaciones por endo o ectoparásitos entre otros, y provocar descamación cutánea conjuntamente con una proliferación bacteriana excesiva, llegándose a producir una pioderma (Miller H., 2013)

Las piodermas causadas por autotraumatismo, cuando el paciente se lame intensamente una región corporal debido al prurito, retira parte del ambiente salino que controla el sobrecrecimiento bacteriano y se puede presentar una pioderma de superficie (Fogel & Manzuc, 2009) Otros factores que se deben tener en cuenta al momento de dar nuestro diagnóstico y que podrían alterar los mecanismos de defensa de la piel son la edad, la raza y el sexo (Bash, 2010; Fogel & Manzuc, 2009)

Además se debe tener en cuenta que los caninos están predispuestos a presentar problemas de piel, dado que su apertura externa del folículo piloso es más amplio que el de los gatos, lo que permite un mayor ingreso de bacterias al mismo, provocando una foliculitis bacteriana (Fogel & Manzuc, 2009)

3.3 Signos clínicos de pioderma

Los signos clínicos suelen ser muy sugestivos de pioderma, pero el diagnóstico debe confirmarse mediante citología (Bash, 2010; Beco et al., 2013a) La presentación clínica de la piodermatitis en caninos es muy variada por lo que se han propuesto una clasificación basada en la apariencia clínica de las lesiones (Tabla 1), para facilitar a los médicos veterinarios llegar a un diagnóstico presuntivo (Beco et al., 2013):

Tabla 1 Clasificación de las piodermas según las lesiones clínicas (modificada

de Beco et al., 2013a)

Piodermas de superficie

Intertrigo Infección de pliegues de

Labios, cara, cola, vulva

Eritema, erosión, supuración, humedad, liquenificación, pigmentación

Sobrecrecimiento

bacteriano

Zona ventral del cuello, periné, abdomen, región inguinal

Eritema, Hiperpigmentación, liquenificación

Piodermas superficiales

Impétigo Zona ventral del abdomen Pústulas, collaretes, eritema,

costras

Foliculitis Folículos pilosos Pápulas, pústulas, collaretes

epidérmicos, costras, alopecia

Pioderma

mucocutánea

Uniones en labios, párpados, vulva, prepucio, ano

Eritema, erosión, úlceras , costras, despigmentación

Piodermas profundas

Forunculosis

localizada Podal, mentón, nasal

Eritema, fisuras, pústulas, nódulos, forúnculos, costras

3.4 Diagnóstico citológico laboratorial de pioderma

El diagnóstico de la pioderma canina está basado en la historia clínica, examen físico y exámenes complementarios La citología es una manera rápida, fácil y mínimamente invasiva para detectar la presencia de infección e identificar los

posibles microorganismos (Beco et al., 2013b)

Los métodos para obtener citologías a nivel de la piel dependen de la zona corporal y el tipo de lesión En lesiones secas o de difícil acceso, como pliegues cutáneos o a nivel mucocutaneo; se usa cinta adhesiva para la toma de muestra (Bash, 2010) En las lesiones exudativas se obtiene la muestra por impronta directa de un portaobjetos en la lesión o con ayuda de un hisopo que posteriormente se impronta en un portaobjetos (Bash, 2010) La humectación del hisopo con solución salina estéril puede mejorar recuperación de organismos (Beco et al., 2013a)

Las preparaciones citológicas se pueden realizar con las tinciones Giemsa o

Diff-Quik, estas son adecuadas para identificar células inflamatorias y microorganismos como bacterias que se identificaran por su morfología, tanto cocos como bacilos que se tiñen de azul-púrpura, esta tinción no refleja si son

Gram-positivas o Gram-negativas (Beco et al., 2013a)

En procesos infecciosos de la piel, los neutrófilos degenerados con el núcleo pálido e hinchado con bacterias fagocitadas confirmarán una infección bacteriana activa En algunos casos se observará la presencia de macrófagos activos con su citoplasma espumoso debido a la acumulación de enzimas proteolíticas a menudo se observan en la pioderma crónica o profunda (Bash, 2010) Se debe tomar en cuenta que en piodermas profundas pueden ser difíciles de detectar, debido a la excesiva fibrosis y cicatrices (Beco et al., 2013a) En infecciones fúngicas se pueden observar macrófagos, linfocitos, células plasmáticas y eosinófilos en la mayoría de casos tienen poca importancia diagnóstica (Beco et al., 2013a)

3.5 Tratamiento de la pioderma en caninos

El tratamiento para infecciones bacterianas en la piel con frecuencia implica el uso de antibióticos sistémicos o tópicos, existen varios artículos publicados con pautas para el manejo apropiado de estas terapias (Beco et al., 2013a; Hillier et al., 2014) En casos de piodermas caninas es importante considerar si la infección es superficial o profunda y que el diagnóstico se encuentre respaldado con una citología para justificar el tratamiento con antibióticos sistémicos (Hillier

et al., 2014)

Las infecciones superficiales se pueden tratar con terapias tópicas como champús medicados o cremas antimicrobianas (Beco et al., 2013b), pero si es profunda y se administra antibióticos por vía oral, se debe tomar en cuenta que

la piel es el órgano más grande del cuerpo y su suministro de sangre es comparativamente pobre por lo que la duración del tratamiento puede ser hasta por 21 días o más (Beco et al., 2013b; Loeffler & Lloyd, 2018)

Para el tratamiento sistémico de pioderma por Staphylococcus spp se ha

recomendado una amplia gama de antimicrobianos en función de su eficacia in vitro, experiencia clínica de eficacia in vivo y ensayos clínicos, al manejar estos antibióticos se debe considerar tres líneas:

 Los antibióticos de amplio espectro de primera línea con actividad antiestafilocócica apropiados para el tratamiento empírico de pioderma son: Cefalexina, Clavulanato amoxicilina, Clindamicina, Lincomicina, Tetraciclinas

y las Sulfonamidas (Beco et al., 2013b; Hillier et al., 2014)

 La segunda línea solo debe usarse cuando no hay resultados con los antibióticos de primera línea y respaldado con un antibiograma, entre estos están la cefovecina, cefpodoxima, difloxacina, enrofloxacina, marbofloxacina, orbifloxacina y pradofloxacina (Beco et al., 2013b; Hillier et al., 2014)

 Por último los antibióticos de tercera línea como: azitromicina, ceftazidima, cloranfenicol, claritromicina, florfenicol, fosfomicina, piperacilina, rifampicina

y tiamfenicol (Medina Ivan, Diaz Jonathan, 2013; Plumb, 2010) Estos antibióticos no deberían ser usados para el tratamiento de pioderma porque

la mayoría de estos no tienen licencia para animales y hay pocos datos de seguridad y eficacia (Beco et al., 2013b)

3.6 Género Staphylococcus spp coagulasa positivos

Los estafilococos (del griego staphyle = "racimo de uvas" y kokkos = "baya"), son cocos grampositivos, anaerobios facultativos, no móviles, catalasa positivos, oxidasa negativos, no formadores de esporas, de aproximadamente 1

μm de diámetro, que tienden a aparecer en racimos irregulares que se asemejan a racimos de uvas (Quinn Patrick et al., 2011; Ríos et al., 2015)

Su importancia radica en que son bacterias coagulasa positivo, que es un factor

de virulencia que convierte el fibrinógeno del plasma en fibrina y son consideradas como patógenas primarias y más virulentas que las especies coagulasa negativas (Llaguno & Soriano, 2015; Quinn Patrick et al., 2011; Ríos

et al., 2015) Las principales CoPS con mayor importancia clínica son: S aureus

es el patógeno más frecuente en el hombre, mientras que S pseudintermedius

y S schleiferi son los principales patógenos en el perro (Saputra et al., 2017)

3.6.1 Staphylococcus aureus

Las especies de S aureus son parte de la microbiota normal de la piel de

diferentes animales, pero en ciertas condiciones pueden ser responsables de infecciones leves hasta invasivas en la piel que pueden poner en riesgo la vida del paciente (Sivajothi, 2016)

Esto se debe a que este microorganismo es capaz de producir toxinas y enzimas extracelulares, estas se encuentran divididas de acuerdo con los efectos biológicos que producen en las células así como con su localización

dentro de la célula bacteriana (Zendejas, Avalos, & Soto, 2014) Entre estas toxinas tenemos: hemolisinas α, β, γ, σ, enterotoxinas, A-E y G-J, toxina del síndrome del choque tóxico 1(TSST-1) y la toxina epidermolítica o exfoliativa que es una de las más importantes en este tema ya que rompen los puentes intercelulares en el estrato granuloso de la epidermis, provocando la destrucción del tejido colonizado (Quinn, 2016; Zendejas, Avalos, & Soto, 2014)

3.6.2 Staphylococcus pseudintermedius

La especie S intermedius coagulasa positiva, fue considerada durante más de

30 años la causa común de infecciones de piel y tejidos blandos en perros (Bannoehr & Guardabassi, 2012) Varios estudios han demostrado que los

aislamientos fenotípicamente identificados como S intermedius se diferencian

en tres especies distintas, S intermedius, S pseudintermedius y S delphini, que juntas se conocen como el grupo Staphylococcus intermedius (SIG)

(Bannoehr & Guardabassi, 2012; Devriese, L.A., Vancanneyt, M., Baele, M., Vaneechoutte, M & Graef, E., Snauwaert, C., Cleenwerck, I., 2005)

Desde la reclasificación de la especie S intermedius en el 2005, en base a

métodos genéticos de tipificación, se propuso que todos los aislamientos de

caninos deben denominarse S pseudintermedius (Devriese, L.A., Vancanneyt,

M., Baele, M., Vaneechoutte, M & Graef, E., Snauwaert, C., Cleenwerck, I., 2005; Fogel & Manzuc, 2009; Miller H., 2013; Ríos et al., 2015) Esta nueva

especie produce factores de virulencia similares a S aureus como coagulasas,

proteasas, termonucleasas, y toxinas como la hemolisina, toxinas exfoliativas y enterotoxinas (Bannoehr & Guardabassi, 2012)

3.7 Identificación fenotípica de las especies de Staphylococcus spp

coagulasa positiva

En la actualidad, la diferenciación entre los miembros del grupo GSI requiere test moleculares, a pesar de esto los laboratorios de diagnóstico se basan en el

hecho de que la única especie de este grupo que se puede aislar en caninos es

S pseudintermedius (Bannoehr & Guardabassi, 2012; Devriese et al., 2005)

Sin embargo S aureus también es parte de su microbiota normal y mediante la

realización cuidadosa de pruebas fenotípicos se puede diferenciar de S

pseudintermedius(López-Jácome et al., 2014a; Ríos et al., 2015)

La identificación entre estas dos especies es esencial actualmente, ya que existen diferencias en cuanto al potencial zoonótico y sus puntos de corte en las pruebas de sensibilidad (Bannoehr & Guardabassi, 2012; Quinn Patrick et al., 2011) Las pruebas fenotípicas más discriminatorias de estas especies

estafilocócicas aisladas de perros incluyen coagulasa, catalasa, producción

de acetoína, resistencia a polimixina B y la fermentación de manitol y maltosa (Tabla 2) (Bannoehr & Guardabassi, 2012; Devriese, L.A.,

Vancanneyt, M., Baele, M., Vaneechoutte, M & Graef, E., Snauwaert, C., Cleenwerck, I., 2005; Quinn Patrick et al., 2011)

Tabla 2 Pruebas fenotípicas para la discriminación entre S pseudintermedius y

S aureus aislados de caninos (Modificada de Quinn Patrick et al., 2011;

Bannoehr & Guardabassi, 2012 )

de 300-U polimixina B

3.8 Resistencia antimicrobiana

Una bacteria se define como resistente, cuando tienen la capacidad de resistir a

un antibiótico, después de la dosificación recomendada (Schwarz, Loeffler, & Kadlec, 2017) El uso indiscriminado de antibióticos para fines clínicos ha provocado que las bacterias desarrollen diversas mecanismos para tolerar los efectos inhibidores de los agentes antimicrobianos, convirtiéndose en un problema importante en medicina humana y veterinaria (Schwarz, Loeffler, &

Kadlec, 2017)

El género Staphylococcus ha desarrollado resistencia a la penicilina y a otros

antibióticos β-lactámicos a través de la producción de la enzima β-lactamasa que destruye el anillo β-lactámico, el mismo que actúa inhibiendo las transpeptidasas necesarias para la formación de peptidoglicanos en la pared celular de la bacteria (Ríos et al., 2015) La meticilina fue desarrollada como un

antibiótico resistente a las β-lactamasas, sin embargo en 1960 se aisló S aureus resistente a la meticilina y un año después de su introducción

terapéutica fue descartada como medicamento debido a sus efectos adversos (Videla et al., 2017)

La resistencia a la meticilina tiene una importancia relevante debido al gen mecA, que codifica la proteína de unión a penicilina 2a (PBP2a),esta proteína causa resistencia a todos los betalactámicos, y la resistencia a la meticilina es a menudo asociada a la resistencia a otros antimicrobianos no relacionados (Ríos

et al., 2015; Videla et al., 2017) El gen mecA está contenido dentro de una isla genómica variable conocida como cromosoma del casete estafilocócico

(SCCmec) Este gen ha sido identificado en S aureus, S schleiferi subsp coagulans, S schleiferi subsp schleiferi y S pseudintermedius (Videla et al., 2017)

3.9 Importancia en Salud publica

En medicina humana y veterinaria, los MRS codificados por el gen mecA son un problema creciente Mientras que los MRSA se encuentran comúnmente en humanos y una amplia variedad de animales (Sivajothi, 2016), los MRSP colonizan y producen infecciones más relevantes clínicamente en perros (Hensel, Brombach, Oechtering, & Burgener, 2018; Lehner et al., 2014) Los sitios de transporte de los CoPS son las mucosas, las áreas húmedas de la piel

en animales y se ve respaldada por su capacidad para sobrevivir en superficies secas (partículas de polvo) durante muchos meses, equipándolos para la propagación nosocomial (Kmieciak & Szewczyk, 2018; Loeffler & Lloyd, 2018; Van Hoovels et al., 2006)

Las fosas nasales son un sitio importante de transporte de S aureus y S pseudintermedius en animales y humanos (Ishihara et al., 2010; Joffe et al.,

2015; Quinn Patrick et al., 2011) La transferencia de estas bacterias entre humanos y sus mascotas ya ha sido reportada (Sivajothi, 2016)(Hensel et al., 2018), diversos estudios han demostrado la transmisión antropozoonótica y zooantroproótica de MRSA y MRSP, considerándolos una zoonosis de importancia a nivel mundial (Hensel et al., 2018; Kmieciak & Szewczyk, 2018; Saputra et al., 2017; Somayaji, Priyantha, Rubin, & Church, 2016; Vigo et al., 2015)

Se considera que los veterinarios, el personal de hospitales y clínicas veterinarias son portadores nasales de SPRM y SARM, varios estudios han identificado las mismas cepas en personas y mascotas que comparten el mismo

hogar (Damborg et al., 2016; Hensel et al., 2018) A diferencia de S aureus los

S pseudintermedius no pertenecen a la microbiota normal de humanos pero se

ha demostrado que tiene el potencial para colonizar el organismo humano y se han reportado casos de infecciones humanas como heridas por mordedura, bacteriemia, absceso cerebral, endocarditis, sinusitis, otitis, úlceras de pierna infectadas y neumonía (Kmieciak & Szewczyk, 2018)

Por lo tanto los SPRM y SARM deben considerarse como una fuente potencial

de transmisión del segmento SCCmec que determina la resistencia a los

antibióticos de Staphylococcus spp en piel y mucosas de personas (Somayaji

et al., 2016) En consecuencia, muchos países han establecido programas de vigilancia para monitorear la aparición de estas cepas resistentes, lo que permite una estimación de la frecuencia de resistencia a los antimicrobianos emergente en los animales (Saputra et al., 2017) Aunque en los animales de compañía en general están pobremente representados en estas actividades, es importante seguir los cambios de estos microorganismos para prevenir peligros actuales y futuros para los humanos y mascotas (Kmieciak & Szewczyk, 2018)

En América Latina se realizó una caracterización exhaustiva de bacteriemia por SARM en humanos que proporciona una sólida evidencia de que el reemplazo clonal es frecuente y de que la estructura de la población está en continua evolución (Arias et al., 2017) Por lo que se debe tomar en cuenta la identificación de linajes genéticos recién surgidos de la especie de

Staphylococcus spp para ayudar a definir enfoques terapéuticos específicos

para las infecciones por MRS en la región

CAPÍTULO IV ASPECTOS METODOLÓGICOS

Soluciones, reactivos e indicadores

• Colorantes Tinción Gram

• Colorante para Tinción Giemsa

• Agar Salado Manitol

4.2 Metodología

Este estudio transversal observacional se realizó bajo un muestreo no probabilístico de caso consecutivo, el cual consistió en reclutar a todos los individuos de la población accesibles que cumplieron con los siguientes criterios

de inclusión durante el periodo de cuatro meses

4.2.1 Requisitos para selección de los animales

Criterio de inclusión

 Caninos con lesiones sugerentes a piodermatitis como: pápulas, pústulas, costras, úlceras, collaretes epidérmicos y lesiones con presencia de exudado

 Caninos con diagnóstico de pioderma mediante citología dérmica en la cual se observe la presencia de neutrófilos degenerados con bacterias fagocitadas y en algunos casos de pioderma profunda la presencia de macrófagos activos

la Universidad Central del Ecuador

4.2.3 Ubicación de la investigación

El presente trabajo se desarrolló en pacientes de la Clínica Veterinaria de la

“Universidad Central del Ecuador” de la ciudad de Quito, en la provincia de Pichincha; en el cantón Quito, parroquia Quito Coordenadas: -0.198375, -78.506414