tiêu luận thụ tinh trứng bò trong ống nghiệm

B- Nội dungI- Điều kiện xảy ra các quá trình thụ tinh 1- Trứng đã thành thục 2- Tinh trùng đã kiện toàn năng lực thụ tinh 3 – môi trường và các thiết bị hỗ trợ II- Các quá trình 1- T

CÁC GIAI ĐOẠN CỦA QUÁ TRÌNH THỤ TINH TRỨNG

B- Nội dung

I- Điều kiện xảy ra các quá trình thụ tinh

1- Trứng đã thành thục

2- Tinh trùng đã kiện toàn năng lực thụ tinh

3 – môi trường và các thiết bị hỗ trợ

II- Các quá trình

1- Tinh trùng xuyên qua lớp tế bào vành phóng xạ 2- tương tác của tinh trùng với màng trong suốt 3- tinh trùng gắn vào vùng trong suốt

4- phản ứng thế đỉnh

5- tinh trùng xuyên qua màng trong suốt

6-sự dung hợp của giao tử đực và cái

I- Điều kiện xảy ra các quá trình thụ tinh

Thu trứng

- Thu buồng trứng: thu ngay khi con vật đã chết

Mổ cố định buồng trứng lấy kéo cắt buồng trứng

- Bảo vệ và vận chuyển buồng trứng: buồng trứng được rửa 3-4 lần trong dung dịch nước muối

sinh lí có bổ sung kháng sinh và bảo quản trong môi trường PBS, nhiệt độ khống chế 30-

350C,thời gian chuyển về phòng thí nghiệm 2-4 giờ

- Hút trứng từ các nang: dùng bơm tiêm hoặc

máy hút chuyên dụng có kích thước lỗ kim 18G hút các nang(d=2-6mm) và các bước tiếp theo làm trong tủ vô trùng

Rửa và chọn lọc trứng

dịch nang trứng hút ra

có lẫn trứng và các tế

bào nang trứng được

bơm vào đĩa Petri

Đưa đĩa vào kinh hiển

- Sự thành thục của nguyên sinh chất

- Sự thành thục của màng trứng

- Nuôi thành thục trứng trong ống nhiệm

- Đánh giá sự thành thục của trứng bò

- Sinh lí, sinh hóa:

+ sự hoạt hóa thành thục của trứng do yếu tố

MPF( maturation promoting factor )

+ progesterone kích thích sản sinh ra MPF

+ MPF thúc đẩy sự phân bào, đặc lại của nhiễm sắc thể , phát triển của nhân, xuất hiện thoi phân bào, không đặc hiệu

Sinh lí, sinh hóa

+ các quá trình như sự lớn lên

màng sinh chất , biệt hóa của

ti thể, tổng hợp , tích lũy noãn

hoàng, ARN thông tin, biến

mất các hạt trung tâm, hoàn

tất trước khi xảy sự phục hồi

phân bào ở trứng(mức AMP

vòng trong trứng tăng ức chế

phân bào)

Sự ổn định ở trạng thái Metaphase II

(ổn định phân bào)

+ Sự hoạt hóa trứng phụ thuộc

đồng thời vào các quá trình

ức chế bởi puromicine → Hai

chất này đặc lại NST giảm sự

phân bào của trứng

Sự thành thục của nguyên sinh chất

Sự thành thục của màng trứng

• Điều kiện cần thiết để màng

trong suốt có thể nhận biết đặc

hiệu tinh trùng đã kiện toàn

năng lực thụ tinh của loài

• Vùng trong suốt gồm 95% của

3 glycoprotein được tổ chức sợi

Nuôi thành thục trứng trong ống nhiệm

- Dựa quá trình thành thục trong tự

nhiên của chúng (noãn phát triển

về kích thước…)

- Chọn trứng có chất lượng tốt nuôi

trong môi trường giàu chất dinh

triệu TB/ml) Nhiệt độ tủ nuôi đặt

- Môi trường nuôi bổ sung huyết

thanh bò đang động dục (giàu

LH,FSH,Estradiol), huyết thanh

bào thai+Estradiol 17ß

→ hoàn thiện hơn thêm LH,FSH vào

+ sự tơi bông của các

tế bào cumulus bao

quanh hoặc sự xuất

Hình ảnh trứng bò thành thục

2- Tinh trùng đã kiện toàn năng lực thụ tinh

• Loại bỏ tinh thanh và pha loãng tinh trùng trong môi

trường (PBS, 199 ) để xảy ra quá trình thụ tinh

• Các chất bảo vệ màng tế bào ( huyết thanh hay albumin huyết thanh là chất mang cholesterol )

• Sự có mặt của heparin (có trong chất tiết của tử cung) tăng hiệu quả thụ tinh, thuận lợi cho Ca2+ vào màng tinh trùng

• Loại bỏ một số protein trên bề mặt tinh trùng (từ tử cung, vòi trứng)

• Biến đổi sinh lí, hóa sinh ở tinh trùng như PH, hoạt tính

của enzym khác (không trải qua các quá trình như trong invivo )

Ảnh sự thay đổi tinh trùng

Ảnh tinh trùng

3 – Môi trường và các thiết bị hỗ trợ

Dung dịch muối sinh lí:(natri

clorid) hay nước muối

được pha chế với tỷ lệ

muối-nước có chứa natri

clorua , natri phosphat,

đệm giúp duy trì một

HÓA CHẤT KHỐI LƯỢNG (g)

NaCl Napyruvate KCl

Na2HPO4

KH2PO4Glucose MgCl26H20 CaCl22H2O Penicillin Streptomycin Bovine Serum Albumin

8 0,036 0,2 1,15 0,2 1 0,1 0,1 100.000 đơn vị 0,5

2-4

3 – Môi trường và các thiết bị hỗ trợ

Môi trường DPBS Thiết bị

1- Tinh trùng xuyên qua lớp tế bào vành phóng xạ

• Trứng thành thục được bao bọc xung quanh

bởi nhiều lớp tế bào cumulus chúng tạo lên đám ma trận giàu axit hyaluronic

• Trong invivo tinh trùng có thể tiếp xúc trực

tiếp với vùng trong suốt của trứng vì lớp tế bào cumulus sẽ tan ra khi trứng đi vào vòi trứng Nhưng trong invitro đám tế bào này vẫn nằm bao quanh trứng chỉ có tinh trùng đã kiện toàn năng lực mới đi qua được lớp tế bào trên

và vẫn còn acrosom nguyên vẹn

1- Tinh trùng xuyên qua lớp tế bào vành phóng xạ

2- tương tác của tinh trùng với màng trong suốt

3- Tinh trùng gắn vào vùng trong suốt

4- phản ứng thế đỉnh

• Phản ứng xảy ra rất nhanh, phụ thuộc vào nồng độ

Ca2+(tăng ở nội bào)

• Cảm ứng phản ứng thế đỉnh bởi màng trong suốt của trứng

• ZP3 có 2 chức năng : gắn kết tinh trùng, phát động phản ứng thế đỉnh

5- tinh trùng xuyên qua màng trong suốt

• Khi thực hiện phản ứng thế đỉnh

tinh trùng thải những bọng

màng lên bề mặt vùng trong

suốt và chui qua lớp vỏ bọc

theo một đường chéo góc có

những bờ mép nhò các enzym

• Các enzym hyaluronidaza phân

hủy axit hyaluronic của vùng

trong suốt, acrosin không làm

tan rã vùng trong suốt nhưng

thủy phân từng phần một số

glycoprotein cả hai được giải

phóng cùng với các enzym nằm

trên màng trong acrosom sẽ tếp

xúc trực tiếp với vùng trong suốt

khi xam nhập vào

7- Sự hoạt hóa tế bào trứng

• Noãn bào được tinh

trùng hoạt hóa kèm theo

những biến đổi về trao

đổi chất cũng như thay

đổi quan trọng của tế

Xin chân thành cảm ơn ! Chúc các bạn thành công