Tóm tắt Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu xây dựng phương pháp đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm

Mục tiêu của luận văn nhằm nghiên cứu xây dựng và áp dụng các phương pháp đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm; xây dựng tiêu chuẩn đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm.

Đ I H C QU C GIA HÀ N I Ạ Ọ Ố Ộ

TR ƯỜ NG Đ I H C KHOA H C T  NHIÊN Ạ Ọ Ọ Ự

­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­

NGUY N TH   Ễ Ị KIM DUNG

Chuyên ngành: VI SINH V T H C Ậ Ọ

Mã s :  ố 60420107

TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ Ắ Ậ Ạ

Hà N i – Năm 2015 ộ

Công trình đ ượ c hoàn thành t i: ạ

Công ty TNHH MTV V c xin và Sinh ph m s  1 (VABIOTECH) – B  Y  ắ ẩ ố ộ Tế

Ng ườ ướ i h ng d n khoa h c:  TS.  ẫ ọ Đ  Tu n Đ t  ỗ ấ ạ

      PGS. TS. Bùi Th  Vi t Hà ị ệ

Ph n bi n 1: PGS. TS. Nguy n Vân Trang ả ệ ễ

Ph n bi n 2: PGS. TS. Nguy n Th  Vân Anh ả ệ ễ ị

Lu n văn đ ậ ượ c b o v  tr ả ệ ướ c H i đ ng ch m lu n văn th c sĩ h p t i:  ộ ồ ấ ậ ạ ọ ạ Khoa Sinh h c – Tr ọ ườ ng Đ i h c Khoa h c T  nhiên – Đ i h c Qu c gia  ạ ọ ọ ự ạ ọ ố

Hà N i, 14h00 ngày 21 tháng 12 năm 2015 ộ

Có th  tìm hi u lu n văn t i: ể ể ậ ạ

Trung tâm Thông tin Th  vi n, Đ i h c Qu c gia Hà N i ư ệ ạ ọ ố ộ

Là m t c  s  nghiên c u và s n xu t v cxin cho ngộ ơ ở ứ ả ấ ắ ườ ởi   Vi t Nam, Công ty ệTNHH MTV V cxin và sinh ph m s  1 đã ti n hành xây d ng các quy trình công ắ ẩ ố ế ựngh  s n xu t v cxin cúm A/H5N1, cúm A/H1N1 và ti n t i là v cxin cúm ệ ả ấ ắ ế ớ ắ

A/H7N9 trên nuôi c y t  bào. M t trong nh ng thông s  r t quan tr ng đ  đánh ấ ế ộ ữ ố ấ ọ ểgiá ch t lấ ượng v cxin trong phòng thí nghi m đó là đ c tính c a kháng nguyên vi ắ ệ ặ ủrút cúm có m t trong các s n ph m c a quá trình s n xu t v cxin. Xây d ng các ặ ả ẩ ủ ả ấ ắ ự

phương pháp đ  đánh giá, t  đó đ a ra các tiêu chu n v  ch t lể ừ ư ẩ ề ấ ượng kháng 

nguyên là m t vi c làm h t s c c n thi t. Đi u này giúp cho vi c đánh giá độ ệ ế ứ ầ ế ề ệ ược 

ch t lấ ượng v cxin và ki m tra đ   n đ nh c a quy trình s n xu t.  Do v y, chúngắ ể ộ ổ ị ủ ả ấ ậ  tôi đã ti n hành th c hi n đ  tài : “Nghiên c u  xây d ng phế ự ệ ề ứ ự ương pháp đánh giá 

ch t  lấ ượng kháng nguyên trong quy trình s n xu t v cxin cúm” .ả ấ ắ

2. M C TIÊU, NHI M V  C A LU N VĂN Ụ Ệ Ụ Ủ Ậ

­   Nghiên c u xây d ng và áp d ng các phứ ự ụ ương pháp đánh giá ch t lấ ượ  ngkháng nguyên trong quy trình s n xu t v cxin cúmả ấ ắ

­   Xây d ng tiêu chu n đánh giá ch t lự ẩ ấ ượng kháng nguyên trong quy trình 

s n xu t v cxin cúm ả ấ ắ

3. Ý NGHĨA KHOA H C VÀ TH C TI NỌ Ự Ễ

Trong nhi u th p k  qua, bên c nh virus cúm mùa, th  gi i liên t c ph iề ậ ỷ ạ ế ớ ụ ả  

tr i   qua   nh ng   đ i   d ch   cúm   v i   các   ch ng   khác   nhau,   A/H5N1,   A/H7N9,ả ữ ạ ị ớ ủ  A/H1N1 đ i d ch. S n xu t virus cúm v a ph i tuân th  các quy đ nh nghiêmạ ị ả ấ ừ ả ủ ị  

ng t v  ch t lặ ề ấ ượng v c xin, v a ph i đ i di n v i vi c thay th  ch ng hàng nămắ ừ ả ố ệ ớ ệ ế ủ  cũng nh  các ch ng m i gây đ i d ch. Vi c xây d ng quy trình và tiêu chu nư ủ ớ ạ ị ệ ự ẩ  

đánh giá ch t lấ ượng v c xin chung cho các v c xin cúm và riêng cho m t s  v cắ ắ ộ ố ắ  xin phòng các ch ng cúm gây đ i d ch là r t quan tr ng, nh m đ m b o ch tủ ạ ị ấ ọ ằ ả ả ấ  

lượng, tính an toàn và tính kháng nguyên c a v c xin. Nh ng đánh giá này có thủ ắ ữ ể 

là c  s  đ  áp d ng cho các v c xin cúm m i khác, nh m nhanh chóng đ a v cơ ở ể ụ ắ ớ ằ ư ắ  xin m i vào th  nghi m và s  d ngớ ử ệ ử ụ 5. K T C U LU N VĂNẾ Ấ Ậ

Lu n văn ngoài ph n m  đ u, danh m c các hình, danh m c các  ậ ầ ở ầ ụ ụ b ngả , 

b ng ký hi u các ch  vi t t t, k t lu n, tài li u tham kh o, ph  l c còn có 3ả ệ ữ ế ắ ế ậ ệ ả ụ ụ  

chương sau:

Chương 1. T ng quanổ

Chương 2. Đ i tố ượng và phương pháp nghiên c uứ

Chương 3. K t qu  nghiên c u và th o lu nế ả ứ ả ậ

PH N N I DUNGẦ Ộ

1.1 Đ c đi m chung c a vi rút cúmặ ể ủ   

Vi rút cúm thu c h  Othomyxoviridae là h  vi rút đa hình thái, có v  ngoài,ộ ọ ọ ỏ  genom là ARN đ n, (­), phân đo n, bao g m 5 nhóm vi rút: vi rút cúm A, vi rút ơ ạ ồcúm B, vi rút cúm C, vi rút Thogoto và vi rút Isa. Trong đó, vi rút cúm A l u hành ư

ph  bi n trên gia c m, ngổ ế ầ ười và đ ng v t khác nh  l n, ng a…là căn nguyên ộ ậ ư ợ ựgây nên các đ i d ch l n trên toàn c u. Vi rút cúm B và C ch  l u hành   ngạ ị ớ ầ ỉ ư ở ười và 

thường ch  gây nên các v  d ch v a và nh  Các vi rút cúm A, B và C r t gi ng ỉ ụ ị ừ ỏ ấ ốnhau v  c u trúcề ấ

1.2. Hình thái và c u trúc h t vi rút cúmấ ạ

H t vi rút cúm có hình dáng r t đa d ng: hình c u, hình tr ng ho c đôi khiạ ấ ạ ầ ứ ặ  

có hình s i kéo dài t i 2000 nm, đợ ớ ường kính trung bình t  80­120 nm. Các h từ ạ  virion c a vi rút A và B có v  bao b c. V  vi rút có b n ch t là protein có ngu nủ ỏ ọ ỏ ả ấ ồ  

g c t  màng t  bào v t ch , bao g m m t s  protein đố ừ ế ậ ủ ồ ộ ố ược glycosyl hóa và m tộ  

s  protein d ng tr n không đố ạ ầ ược glycosyl hóa. Vi rút cúm có genom nhi u đo n,ề ạ   typ A và B có 8 đo n ARN(­) v i t ng kh i l ng 5x106, còn   typ C có 7

H  gen c a vi rút cúm A và B có 8 đo n gen trong khi vi rút cúm C có 7ệ ủ ạ  

đo n gen ( không có gen NA). C u trúc h  gen c a vi rút cúm đã đạ ấ ệ ủ ược tìm hi uể  

nh  k  thu t phân tích đi n di virion ARN vi rút trên gen polyacrylamit. C u trúcờ ỹ ậ ệ ấ  gen c a vi rút cúm nh  sau: Đ an gen 1 mã hóa cho PB2, đo n gen 2 mã hóa choủ ư ọ ạ  PB1, đo n gen 3 mã hóa cho PA, đo n 4 cho HA, đo n 5 cho NP, đo n 6 cho NA,ạ ạ ạ ạ  

đo n 7 cho M1 và M2, đo n 8 cho NS1 và NS2. Trình t  nucleotit c a ARN vi rútạ ạ ự ủ  

cúm PR8/34 và r t nhi u phân typ khác đấ ề ược công b  t  năm 1982. Vi rút R8/34ố ừ  

có 13.588 nucleotit

1.4. Quá trình nhân lên c a vi rút cúmủ

Trước h t gai H c a vi rút g n vào th  th  có ch a axit neuraminic c a tế ủ ắ ụ ể ứ ủ ế bào ch , r i ti n hành nh p bào t o endosom. Ti p đó, x y ra quá trình dung h pủ ồ ế ậ ạ ế ả ợ  

gi a v  ngoài c a vi rút v i màng endosom. Đi u này th c hi n đữ ỏ ủ ớ ề ự ệ ược nh  gai Hờ  

ch i lên khi pH trong endosom th p. Sau khi dung h p ribonucleprotein và ARN­ồ ấ ợ  polymeraza chui vào t  bào ch t. Vi c “c i áo” làm ho t hóa ARN­ polymerazaế ấ ệ ở ạ  

c a vi rút. Phân t  mARN đủ ử ược phiên mã trong nhân t  các chu i ARN khuônừ ỗ  

đ n, (­) c a vi rút khi s  d ng m i là đo n 10 – 13 nucleotit c t ra t  đ u 5’ c aơ ủ ử ụ ồ ạ ắ ử ầ ủ  mARN có g n mũ c a v t ch , sau đó đắ ủ ậ ủ ược g n đuôi PolyA cũng l y t  mARNắ ấ ừ  

c a t  bào ch  Enzym c t m i là endonucleaza do vi rút mang theo. Phân tủ ế ủ ắ ồ ử mARN m i hoàn thi n c a vi rút ra kh i nhân, vào t  bào ch t đ  ti n hành saoớ ệ ủ ỏ ế ấ ể ế  chép genom trong nhân

1.5. S  phát tri n c a vi rút cúm trên t  bàoự ể ủ ế

Vi rút cúm đ u tiên đầ ược nuôi trên tr ng gà có phôi. Sau này, các vi rút cúmứ  

có th  để ược nuôi trên tr ng gà có phôi ho c trong m t s  h  nuôi c y t  bào tiênứ ặ ộ ố ệ ấ ế  phát. Vi c nuôi c y vi rút trên tr ng gà có phôi v n đệ ấ ứ ẫ ượ ực l a ch n làm quy trìnhọ  

s n xu t v cxin cúm trên th  gi i. Hi n nay, các h  nuôi c y t  bào nh  th nả ấ ắ ế ớ ệ ệ ấ ế ư ậ  

kh  tiên phát (PMKC) hay th n chó Madin­ Darby (MDCK) thỉ ậ ường được dùng để phân l p vi rút cúm t  m u b nh ph m c a ngậ ừ ẫ ệ ẩ ủ ười. T  bào MDCK có đ  nh yế ộ ạ  100% trong phân l p vi rút cúm A trong khi đó đ  nh y c a Vero ch  71,4% vàậ ộ ạ ủ ỉ  MRC­5 là 57,1%

1.6. K  thu t di truy n ngỹ ậ ề ược

Gi ng nh  h u h t các lo i vi rút ARN s i (­), vi rút cúm nhân lên trongố ư ầ ế ạ ợ  nhân c a t  bào b  nhi m. Sau khi dung h p v i màng t  bào, ph c h p c aủ ế ị ễ ợ ớ ế ứ ợ ủ  ribonucleoprotein c a vi rút (vRNP) đủ ược phóng thích vào t  bào ch t. Ph c h pế ấ ứ ợ  vRNP, bao g m ARN c a vi rút (vARN), nucleoprotein (NP) và 3 lo i proteinồ ủ ạ  polymeraza (PA, PB1, PB2), được chuy n vào nhân và quá trình phiên mã tái b nể ả  

di n ra t i đây, vARN s i (­) không th  tr c ti p làm khuôn t ng h p protein màễ ạ ợ ể ự ế ổ ợ  vARN được bao b c trong NP ph i đọ ả ược phiên mã thành mARN nh  ph c h pờ ứ ợ  polymeraza c a vi rút. Trong quá trình tái b n vARN đủ ả ượ ử ục s  d ng làm khuôn để 

t ng h p s i ARN b  sung (cARN), s i cARN này l i đổ ợ ợ ổ ợ ạ ược làm khuôn đ  t ngể ổ  

h p s i vARN. Nh  v y, đ n v  ch c năng t i thi u đ  vi rút cúm có th  tái b nợ ợ ư ậ ơ ị ứ ố ể ể ể ả  

là vRNP

1.7. D ch t  h c b nh cúmị ễ ọ ệ

D ch cúm x y ra theo xu hị ả ướng khác nhau   các năm, thở ường x y ra vàoả  mùa đông   b c và nam bán c u, nh ng xu t hi n hàng năm   khu v c nhi t đ i.ở ắ ầ ư ấ ệ ở ự ệ ớ  

Vi rút cúm có kh  năng t n công cao, nên t  l  m c b nh do vi rút cúm trong dânả ấ ỷ ệ ắ ệ  

s  là tố ương đ i cao. Tăng t  l  m c và t  vong do cúm x y ra   c c tr  c a nhómố ỷ ệ ắ ử ả ở ự ị ủ  

tu i và   ngố ở ười đang m c s n m t b nh khác.ắ ẵ ộ ệ

Mô hình d ch t  ph n ánh s  thay đ i đ c đi m kháng nguyên c a vi rútị ễ ả ự ổ ặ ể ủ  cúm, và s  lây lan c a b nh ph  thu c vào nhi u y u t , bao g m kh  năng lâyự ủ ệ ụ ộ ế ế ố ồ ả  nhi m và s  m n c m c a nhóm dân c  Đ c bi t   vi rút cúm A có kh  năngễ ự ẫ ả ủ ư ặ ệ ở ả  thay   đ i   đ nh   k   l p   v   kháng   nguyên   glycoproteins   nh   hemagglutinin   vàổ ị ỳ ớ ỏ ư  neuraminidase. Trong s  các vi rút cúm nhóm A  nh hố ả ưởng đ n s c kh e ế ứ ỏ ở 

người có ba phân typ chính c a hemagglutinin (H1, H2, và H3) và ba phân typủ  chính c a neuraminidase (N1 và N2) đã đủ ược công b  Vi rút cúm B ít có s  thayố ự  

đ i v  đ c đi m kháng nguyên. ổ ề ặ ể

TCYTTG ước tính hàng năm có kho ng 3­5 tri u ngả ệ ười m c và 250.000 –ắ  500.000 ngườ ửi t  vong vì cúm

1.8. Sinh b nh h cệ ọ

Nhi m trùng gây ra b i vi rút cúm đ u tiên là viêm đễ ở ầ ường hô h p trên. Viấ  rút phát tri n trên t  bào bi u mô để ế ể ường hô   h p và phá h y nhung mao, n iấ ủ ơ  

được coi là hàng rào b o v  đ u tiên, quan tr ng c a c  th  trong h  th ng hôả ệ ầ ọ ủ ơ ể ệ ố  

h p. Kèm theo s  nhân lên c a vi rút, interferon đấ ự ủ ược phát hi n trong giai đo nệ ạ  

c p tình c a b nh trong m t th i gian ng n là nguyên nhân c a s  nguy hi m doấ ủ ệ ộ ờ ắ ủ ự ể  nhi m vi rút cúm.ễ

1.9. V cxin cúm  ắ

Vi rút là tác nhân gây b nh cúm. Mi n d ch ng a cúm là phệ ễ ị ừ ương pháp căn 

b n đ  ki m soát cúm   m c đ  cá nhân và c ng đ ng. V cxin cúm đả ể ể ở ứ ộ ộ ồ ắ ược phát tri n và để ược c p phép s  d ng   ngấ ử ụ ở ườ ướ ại d i d ng vi rút s ng gi m đ c l c vàố ả ộ ự  

vi rút b t ho t. Các phấ ạ ương pháp ch ng ng a cúm có chung m c tiêu là kích thíchủ ừ ụ  

mi n d ch đ i v i hemagglutinin (HA) và có th  đ i v i neuraminidase (NA), doễ ị ố ớ ể ố ớ  

đó thành ph n c a v cxin cúm thầ ủ ắ ường xuyên được thay đ i sao cho tổ ương thích 

nh t v i ch ng vi rút đang l u hành đã đấ ớ ủ ư ược tiên lượng trước. Vai trò kích thích các đáp  ng mi n d ch khác c a v cxin trong phòng ng a b nh v n ch a đứ ễ ị ủ ắ ừ ệ ẫ ư ượ  c

hi u bi t m t cách đ y đ  V cxin cúm an toàn, hi u qu , và để ế ộ ầ ủ ắ ệ ả ược TCYTTG khuy n cáo s  d ng cho ph  n  có thai, tr  t  6 đ n 59 tháng tu i, ngế ử ụ ụ ữ ẻ ừ ế ổ ười già, 

người đang m c b nh “đ c bi t”, và cán b  y t ắ ệ ặ ệ ộ ế

Vi t Nam đã có nhi u cách ti p c n khác nhau trong nghiên c u s n xu tệ ề ế ậ ứ ả ấ  

v cxin cúm nh  t  bào th n kh  tiên phát (VABIOTECH), trên tr ng gà có phôiắ ư ế ậ ỉ ứ  (IVAC), trên t  bào Vero (Vi n Pasteur TP. HCM), trong đó VABIOTECH đãế ệ  hoàn thành 3 đ t th  nghi m lâm sàng và k t qu  cho th y v cxin cúm A/H5N1ợ ử ệ ế ả ấ ắ  

do VABIOTECH s n xu t là an toàn trên ngả ấ ười tình nguy n. Các ch  s  sinh hóaệ ỉ ố  

h c   nh ng ngọ ở ữ ười tình nguy n sau tiêm v cxin là bình thệ ắ ường. V cxin A/H5N1ắ  

s n xu t trên dây truy n công ngh  đã nghiên c u cho k t qu  đáp  ng t t   t tả ấ ề ệ ứ ế ả ứ ố ở ấ  

c  các đ i tả ố ượng được tiêm t  li u 7,5µg tr  lên và đáp  ng tiêu chu n c a châuừ ề ở ứ ẩ ủ  

Âu   T   nh ng   kinh   nghi m   có   s n   trong   s n   xu t   v cxin   cúm   A/H5N1ừ ữ ệ ẵ ả ấ ắ  VABIOTECH cũng đã xây d ng đự ược m t quy trình công ngh  s n xu t v cxinộ ệ ả ấ ắ  cúm A/H1N1 có tính  n đ nh và hi u su t cao. Ngổ ị ệ ấ ười Vi t Nam s  đệ ẽ ượ ử ụ  c s  d ng

v cxin cúm do Vi t Nam s n xu t trong m t ngày không xa.ắ ệ ả ấ ộ

­ V cxin h t vi rút v  (split vaccine)ắ ạ ỡ

­ V cxin ti u đ n v  (subunit vaccine)ắ ể ơ ị

­ V cxin b t ho t s n xu t trên t  bàoắ ấ ạ ả ấ ế

­ V cxin tái t  h p và h p phắ ổ ợ ấ ụ

­ V cxin s ng gi m đ c l cắ ố ả ộ ự

1.11. Các phương pháp ki m tra ch t lể ấ ượng kháng nguyên v cxin cúmắ

Ki m tra ch t l ể ấ ượ ng kháng nguyên trong quy trình s n xu t v cxin cúm ả ấ ắ

­ T ng m  g t đ n ch a vi rút c n đừ ẻ ặ ơ ứ ầ ược chu n đ  hi u vi rút cúm ẩ ộ ệ

­ Nh n d ng: Xác đ nh các kháng nguyên đ c hi u b ng ph n  ng khuy ch tánậ ạ ị ặ ệ ằ ả ứ ế  

mi n d ch ho c  ng ch  ng ng k t h ng c u s  d ng các kháng th  đ c hi u.ễ ị ặ ứ ế ư ế ồ ầ ử ụ ể ặ ệ

­ Hàm lượng Protein t ng s  đổ ố ược xác đ nh b ng phị ằ ương pháp Lorry. 

Ki m tra ch t l ể ấ ượ ng kháng nguyên v cxin thành ph m ắ ẩ

­ Th  nghi m nh n d ng: Th  nghi m nh n d ng đử ệ ậ ạ ử ệ ậ ạ ược th c hi n v i ít nh t 1ự ệ ớ ấ  

l  cho m i lo t v cxin.ọ ỗ ạ ắ

­ Hàm lượng kháng nguyên HA

­ Th  nghi m an toàn chungử ệ

­ Th  nghi m ch t gây s tử ệ ấ ố

­ Th  nghi m công hi u.ử ệ ệ

CH ƯƠ NG  2 – V T LI U VÀ PH Ậ Ệ ƯƠ NG PHÁP NGHIÊN  

M u nẫ ước n i sau g t vi rút trong quy trình s n xu t v c xin cúm. ổ ặ ả ấ ắ

M u bán thành ph m trong quy trình s n xu t v c xin cúm.ẫ ẩ ả ấ ắ

2.1.3. Môi trường và hóa ch tấ  và các trang thi t bế ị

Các môi trường, hóa ch t và trang thi t b  c n thi t ấ ế ị ầ ế

CH ƯƠ NG 3 – K T QU  VÀ  Ế Ả BÀN LU N Ậ

3.1. Nghiên c u xây d ng và áp d ng các phứ ự ụ ương pháp đánh giá ch t lấ ượng kháng nguyên v cxin trong quy trình s n xu t v cxin cúmắ ả ấ ắ

3.1.1. Nghiên c u xây d ng phứ ự ương pháp chu n đ  hi u giá vi rút cúm ẩ ộ ệ

CCID50

Tách t  bào MDCK t  chai  ra phi n v i m t đ  4x10ế ừ ế ớ ậ ộ 4 t  bào/ml. Sau 2 ếngày nuôi c y t  bào MDCK trên các phi n 96 gi ng đ u kín 1 l p.ấ ế ế ế ề ớ

Chúng tôi đã ti n hành th  nghi m 3 l n nh m đ m b o đ  chính xác đ  ế ử ệ ầ ằ ả ả ộ ể

t i  u hóa các y u t   nh hố ư ế ố ả ưởng đ n quy trình chu n đ  hi u giá vi rút cúm: ế ẩ ộ ệnhi t đ , môi trệ ộ ường và th i gian nuôi c y vi rút. Các phi n trờ ấ ế ước khi ti n hành ế

th  nghi m có m t đ  t  bào tử ệ ậ ộ ế ương đương nhau

Hình 3.5. So sánh chu n đ  hi u giá vi rút cúm 3 lo i môi trẩ ộ ệ ạ ường MEM, DMEM, LH3E t i 32ạ oC sau 3 ngày, 4 ngày và 5 ngày ( Giá tr  trung bình c a ị ủ

3 l n th  nghi m).ầ ử ệ

Qua các k t qu  thu đế ả ược sau 3 l n ti n hành l p l i th  nghi m chúng tôiầ ế ặ ạ ử ệ  

đã tìm được các đi u ki n t i  u cho quy trình chu n đ  hi u giá vi rút cúm là:ề ệ ố ư ẩ ộ ệ

­   Nhi t đ  nuôi c y vi rút: 32ệ ộ ấ oC

  ­   Môi trường nuôi c y vi rút: môi trấ ường MEM

SRID(µg/ml)

Protein(µg/ml)

Lo t 0112ạ 107,5 1024 177,4 324,13

Lo t 0212ạ 107,8 512 173,1 416,67

HA(HAU)

SRID(µg/ml)

Protein(µg/ml)

ph m sau siêu ly tâm tinh s ch h n nhi u so v i trẩ ạ ơ ề ớ ước siêu ly tâm, không còn l n ẫcác t p ch t, s n ph m ch  còn các băng protein c a vi rút cúm.ạ ấ ả ẩ ỉ ủ

Đ ng th i, v i các phồ ờ ớ ương pháp thông d ng hi n v n đụ ệ ẫ ược áp d ng trong ụ

vi c đánh giá ch t lệ ấ ượng c a kháng nguyên, trong nghiên c u này, chúng tôi cũngủ ứ  

đã ti n hành k  thu t hu nh quang đi n t  đ  quan sát hình  nh các kháng ế ỹ ậ ỳ ệ ử ể ả

nguyên vi rút cúm. Phương pháp này được ti n hành trên các m u nuôi c y vi rút ế ẫ ấcúm trên t  bào đ  quan sát quá trình nhân lên c a vi rút cúm Các vi rút cúm ế ể ủA/H1N1 đượ ổc t ng h p đã n y ch i ra kh i màng t  bào MDCK, t  bào hoàn ợ ẩ ồ ỏ ế ếtoàn b  teo l i, quan sát th y r t nhi u h t vi rút hoàn ch nh gi i phóng ra bên ị ạ ấ ấ ề ạ ỉ ảngoài t  bào. M u bán thành ph m v cxin cúm sau khi tinh ch  đ  th y đế ẫ ẩ ắ ế ể ấ ược