HUMAN HEPATITIS VIRUS VÀ CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE VIÊM GAN B

Trang 1

BÁO CÁO HỌC PHẦN:

DI TRUYỀN VI SINH VẬT

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ CÔNG NGHỆ

Trang 2

HUMAN HEPATITIS VIRUS VÀ

CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE

VIÊM GAN B

GVHD: TS Võ Thị Phương Khanh Học viên

Lớp: Sinh học thực nghiệm K2018

Trang 4

I Human Hepatitis B Virus

Human Hepatitis B Virus (HBV) là một virus có cấu trúc ADN một phần sợi kép

và có vỏ thuộc họ Hepadnaviridae, nhân

lên ở trong gan và gây nên các rối loạn chức năng gan

Protein HBsAg có ở trên bề mặt ngoài của hạt virus hoàn chỉnh (hạt Dane) và lưu hành trong máu dưới dạng các hạt hình ống hoặc hình cầu 22nm

Nhân bên trong của virus có chứa HBcAg, HBeAg, phân tử ADN một phần sợi kép

và ADN polymeraza phụ thuộc ADN

Trang 5

www.themegallery.com 5

Cấu tạo của hạt Dane

Trang 6

Cấu trúc gen và các protein

Cấu trúc và tổ chức gen của HBV

 Sợi âm: là một vòng hoàn

chỉnh có 4 khung đọc mở (open

reading frame: ORF) chứa các

gen mã hoá đan xen vào nhau:

 ORFS - gen tiền S1, tiền S2 và

S;

 ORFC - gen tiền lõi/lõi,

 ORFX - gen X và ORFP - gen

polymeraza

 Sợi dương: ngắn hơn và có

chiều dài thay đổi

Trang 7

 Các gen S và tiền S : mã hoá vỏ HBV

Trang 8

 Protein loại nhỏ (SHBs) tạo nên các

hạt HBsAg

thành phần tiền S2

tiền S1 cũng liên kết vào các hạt

HBsAg nhưng được thấy nhiều hơn

trong các hạt virus trơ

 Các nghiên cứu cho rằng protein tiền

S đóng một vai trò quan trọng trong

quá trình kết hợp của HBV vào tế bào

gan, vị trí gắn đặc hiệu ở gan đối với

S1 và tiền S2

Trang 9

 Gen ORF-C mã hóa cho cả HBcAg và HBeAg

Trang 10

oHBcAg có vai trò quan trọng trong việc đóng gói ARN vào nhân virus và là một thành phần không thể thiếu của nucleocapsid Không thể phát hiện HBcAg trong huyết thanh bằng các kỹ thuật thông thường, tuy nhiên có thể tìm thấy trong nhu mô gan ở các bệnh nhân nhiễm HBV cấp và mạn tính

phát hiện trong huyết thanh các bệnh nhân có tải lượng virus cao, nhưng sự có mặt của HBeAg không phải là một yếu

tố bắt buộc cho quá trình nhân lên của virus

Trang 11

www.themegallery.com Cấu trúc và tổ chức gen của HBV 11

trong quá trình tổng hợp ADN và quá trình kết hợp ARN vào nhân virus

Trang 12

X của virus (17kD), protein có

ảnh hưởng đến việc truyền tín

hiệu tính trạng tế bào vật chủ,

quá trình biểu thị gen, nhân lên

và lan truyền của HBV trong cơ

thể Protein X còn giúp cho sự

nhân lên của HBV bằng tác động

vào các yếu tố tham gia phiên

mã, kích thích tăng sinh và làm

chết tế bào

Trang 13

Gen quan tâm là gen S gồm Pre

S, Pre S1 và Pre S2 của HBV

 Hai protein là Pre S1 và Pre

S2 có vai trò quan trọng trong

việc kích thích tế bào T giúp

đỡ trong việc tạo kháng thể

Trang 14

Quá trình nhân lên của Human Hepatitis B Virus

Quá trình nhân lên của HBV trong tế bào gan

Trang 15

Quá trình nhân lên của Human Hepatitis B Virus

Bước 1: Tấn công

Bước 3: Dịch mã

Bước 4: Phiên mã Bước 5: Tổng hợp genome

Bước 6: Lắp ráp

Bước 7: Giải phóng Bước 2: Xâm nhập

Trang 16

II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B

Chuyển gen vào

TB đích Biểu hiện gen mong muốn

Trang 17

Trang 18

mặt HBsAg thì người ta dùng phương pháp tách RNA của gen S từ human hepatitis B virus để thực hiện phiên mã ngược thu gen S Phương pháp này cho hiệu quả cao và đỡ tốn thời gian hơn phương pháp truyền thống

episom nấm men hay γEps, điển hình loại này là pJDB 219 pJDB 219 cũng gồm các đoạn liên tiếp như pBR322 do đó có thể nhân lên và được chọn lọc cả trong nấm men và trong E.coli có sự gài pJDB vào một NST của các vector khác của nấm men

Trang 19

Tạo vector tái tổ hợp:

-Để tạo DNA tái tổ hợp thì cần tạo dòng trộn chung theo tỉ lệ nhất định với sự hiện diện của ligase (E.coli) Từ đó vector tái tổ hợp sẽ được hình thành dưới tác dụng của ligase làm nối vector với DNA

-Vector tái tổ hợp được tinh sạch qua tách chiết và tủa

-Chuyển vector tái tổ hợp vào nấm men Saccharomyces cerevisiae theo con đường biến nạp, có thể bằng nhiều phương pháp khác nhau như phương pháp vi tiêm, phương pháp xung điện hoặc súng bắn gen hoặc sốc nhiệt… Nhưng ở nấm men thì sử dụng kĩ thuật xung điện là hiệu quả cao nhất

Trang 20

Sacharomyces cereviriae

Trang 21

Biểu hiện gen mong muốn :

-Dòng tế bào mang gen tái tổ hợp là dòng tế bào có mang gen tái tổ hợp, được nuôi trong môi trường thích hợp tạo thành các khuẩn lạc, tuy nhiên sau bước biến nạp chỉ tạo ra lượng ít tế bào tái tổ hợp, vì vậy cần phải tiến hành sàng lọc

-Việc sàng lọc có thể được thực hiện bằng nhiều phương pháp như phương pháp sử dụng các oligonucleotid tổng hợp hoặc phương pháp

sử dụng kháng thể Từ đó tìm ra dòng tế bào mang gen tái tổ hợp

Trang 22

Trang 23

1 Đái Duy Ban (2006), Công nghệ gen.NXB Khoa học

kĩ thuật.

2 Hoàn thiện quy trình công nghệ sản xuất vaccine viêm

gan B tái tổ hợp Bộ Y tế – Bộ khoa học và công nghệ,

Trang 24

XIN CHÂN THÀNH

CẢM ƠN !!!

Định dạng
Số trang	24
Dung lượng	2,19 MB