BÀI GIẢNG BAO CAO POWERPOINT

Các yếu tố ảnh hưởng đến sự hoạt động của enzym Ficin 1.. Một số yếu tố ảnh hưởng đến khả năng thuỷ phân protein của Ficin  Nhiệt độ  Hoạt động thuỷ giải protein của enzym ficin c

Ngọn lửa xua tan màn đêm, ngọn lửa xua tan u buồn, ngọn lửa của khát khao của hy vọng cho sức trẻ và sự nhiệt tình Ngọn lửa của sự hủy diệt.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG

LỚP 07SH111

BÁO CÁO

ENZYM FICIN

CÁC THÀNH VIÊN TRONG NHÓM

1 VŨ QUANG TRUNG

2 ĐẶNG THANH TÌNH

3 PHẠM TRUNG HIẾU

4 BÙI XUÂN HUẾ

5 NGUYỄN VĂN CHIẾN

6 NGUYỄN TRUNG LÊNH

* Giới thiệu tổng quan về Enzym Ficin

* Đặc điểm nguồn nguyên liệu

* Thu nhận Enzym Ficin

* Kết luận

Ngày nay trong thực phẩm người ta thường dùng enzym ficin để làm :

 Đông tụ sữa

 Thủy phân protein

 Kìm hãm sự hóa nâu

của củ quả trong quá

trình sơ chế

Hình : chế phẩm enzym ficin

Nguồn: google.com

I GIỚI THIỆU TỔNG QUAN VỀ ENZYM FICIN

 Năm 1930, B.H Robbins nhận thấy nhựa cây

thuộc họ sung có khả năng tiêu diệt được giun

tròn Ascaris

 Năm 1943 Caldwel thấy loại nhựa của cây họ

sung cũng có thể tiêu diệt đựơc các loài sán dây

Trichuris Trichura.

 Đến năm 1939, Walti là người đầu tiên thu nhận được Enzym Ficin từ cây họ sung.

Enzym Ficin là gì?

 Ficin ( ficain)là một Protease đựơc tìm

thấy trong nhựa cây thuộc họ Ficus

(sung,vải).

Hình: Cây sung và quả sung

Nguồn : Đốt Là Cháy , Http://google.com

Cấu tạo hoá học

Ficin là một loại Protease thực vật nên trong cấu trúc bậc I có chứa nhóm sulfhydryl (-sh)

Tính chất hoá học

 pH hoạt động của ficin từ pH = 4-9,5

 pH tối thích » (pHopt) của ficin phụ thuộc vào loại cơ chất của enzym:

 Gelatin : pHopt = 5 , casein : pHopt= 9.5 , hemoglobin: pHopt =7

Hình: quả cây sung

Nguồn: google.com

Các yếu tố ảnh hưởng

đến sự hoạt động của enzym Ficin

1 Yếu tố hoạt hoá »

Một số yếu tố ảnh hưởng đến khả năng thuỷ phân protein

của Ficin

 Nhiệt độ

 Hoạt động thuỷ giải protein của enzym

ficin chịu ảnh hưởng rất nhiều bởi nhiệt độ

 mỗi enzym có một nhiệt độ tối thích

 Độ pH

 độ pH của môi trường có ảnh hưởng rất

lớn đến tốc độ phản ứng của enzym,

 Mỗi enzym sẽ có một pH tối thích

ĐẶC ĐIỂM NGUỒN NGUYÊN LIỆU

Cây sung là loại cây gỗ lớn, mọc

nhanh, thuộc họ dâu tằm

(Moraceae) Cây mọc hoang dại

ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt

đới tại những nơi đất ẩm bìa

rừng, nhiều nhất là ven các bờ

nước ao, hồ, sông, suối.

Cây sung có nguồn gốc xuất xứ

từ vùng tây á và phân bố khắp

địa trung hải,

có ít nhất khoảng 600 loài sung. Hình: cây sung

Nguồn: google.com ;

Thành

Phần Quả Tươi Quả Khô Thành Phần Quả Tươi Quả Khô

Năng lượng 80 calo 274calo Sodium 2.0 mg 34mg

Tro 0.48 – 0.85g 2.3g Ascorbic acid 12.2 – 17.6mg 0

Calcium 78.2mg35 – 126mg Citric acid 0.1 – 0.44mg 0

Phosphorus 32.9mg22 – 77mg chất tương

tự như vitamin A 20 – 270ul 80ulsắt 4.09mg0.6 – 3mg

Nguồn: Trong tài liệu của phân khoa nông nghiệp mỹ ở Washington.

Thành phần các chất trong 100g trái sung

III THU NHẬN ENZYM FICIN

 Phương pháp thu nhận ficin thô

Phương pháp chiết tách enzym Ficin

Các phương pháp tinh sạch Enzym Ficin

Phương pháp lọc gel » Phương pháp điện di »

Phương pháp lọc gel

Gel là gì?

 Gel là một mạng lưới phân tử có cấu trúc không gian ba chiều ghép hở ở dạng hạt trên hạt có những lổ có kích thước phù hợp

Hiện nay thì có các loại sephadex »

Hình 3: Phương pháp lọc gel

Nguồn: http:// giasutamviet.com ,

http://google.com

Phương pháp điện di

như điện di trên giấy lọc,màng cellullose acetat ,dịch lỏng hoặc điện di 2 chiều vưông góc nhau,điện di hội tụ

sẽ kết hợp với các chất bề mặt mang điện

tích âm là SDS (Sodium dodecyl Sulfate)

để trở trở thành các phức hợp mang điện tích âm bởi vì điện tích âm trên SDS lấn

áp điên tích trên phân tử protein.

Hình : Máy điện di, phương pháp điện di

Nguồn: http:// agriviet.com/product_detail

sử dụng rộng rải trong thực phẩm Và trong tương lai có thể sẽ được ứng dụng và sử dụng rộng rải trong các ngành nghề khác./.

Cảm ơn Cô và các Bạn đã theo dõi

The End

Phương pháp chiết tách enzym Ficin

•pH tối thích là

pH tối thích là : độ pH mà ở

đó hoạt động của enzym đạt đến mức tối đa

«

• Yếu tố hoạt hoá

Khi có mặt của kim loại kiềm và các nhân tố khử thì hoạt tính

của ficin sẽ tăng lên.

«

• Các yếu tố kìm hãm

Khi nhóm –SH tham gia trực tiếp vào các hoạt động xúc tác của ficin và các chất ức chế như HgCl2, N-ethylmalenide, iodo acetic acid,

Hloroacetamide hay iodoacetamide kết hợp với trung tâm hoạt động của ficin thì enzym sẽ

bị bất hoạt.

Các chất kìm hãm hoạt động của các protease động vật khi liên kết với gốc cystein của enzym ficin cũng có thể làm bất hoạt ficin.

»  

• Tính chuyên biệt

Các liên kết peptide của nhiều loại protein tự nhiên như: protein sữa, hemoglobin, protein đậu nành, gelatin, collagen, elastin, fibrin,

fibrinogen và cả ascaris sống đều có thể bị

thuỷ giải bởi enzym ficin.

Ficin còn có thể thuỷ giải các liên kết

peptide, este, các liên kết amide của cơ chất

nhân tạo.

«

• Tính bền vững

• Bền vững với nhiệt độ:

Enzym ficin có thể giữ nguyên hoạt tính trong 2 giờ ở 50oC,

nhưng dịch Enzym ficin sẽ bị mất hoạt tính quá thời gian bảo quản

đông lạnh kéo dài.

• Bền vững với pH:

Do một nhóm –SH tối cần thiết bị oxy hoá nên trong một vùng pH khá rộng (4,5 – 9,5) độ bền vững của enzym ficin đạt đến mức cực đại nhưng trong một vùng pH hẹp dao động quanh pH 8 thì nó lại có tính bền vững ở mức tối thiểu Tuy nhiên sự suy giảm tính bền vững ở pH

sẽ mất đi khi gia tăng nồng độ cysteine từ 0,01 – 0,025M

• Cơ chế xúc tác:

Vì enzym ficin là một loại enzym protease thu từ sung , vả nên có khả năng bề với nhiệt trong khoảng 60-80oC ở pH tự nhiên Tâm hoạt động của enzym gồm có 2 amino acid là cysteine và histidine.

«

• Đại Lượng Dalton

• John Dalton (6 tháng 9, năm 1766 – 27 tháng 7, năm 1844) là một nhà hóa học, nhà vật lý người Anh Ông sinh ra trong một gia đình dệt vải nghèo tại Eaglesfield, một vùng phía Tây Bắc nước Anh Thời niên thiếu, để có đủ điều kiện tiếp tục theo học và đeo đuổi lòng đam mê khoa học của

mình, John Dalton phải trốn nhà để đi trợ giảng ở một trường trung học tại Kendan (khi ấy, ông chỉ mới 15 tuổi) Vài năm sau, khi Dalton 19 tuổi,

ông đã được cử giữ chức hiệu trưởng trường trung học này Về sau, ông trở nên nổi tiếng vì những đóng góp, lý giải của ông trong thuyết nguyên tử và các nghiên cứu của ông về bệnh mù màu Lý thuyết về nguyên tử của Dalton là cơ sở để xây dựng các lý thuyết khác về nguyên tử sau này

• Trong năm 1790 Dalton đã định chọn ngành luật hay y khoa, nhưng dự

định của ông không được khuyến khích của những người thân, nên ông vẫn ở lại Kendal đến tận mùa xuân năm1793 ông mới di chuyển đến

Manchester Dalton được bổ nhiệm làm một giáo viên dạy toán và khoa học tự nhiên ở Học viện Manchester Ông ở vị trí này đến tận trường này đựoc di chuyển đến York vào năm 1803, khi đó ông trở thành một giáo

viên dạy toán và dạy hóa, vừa dạy công và dạy tư «

• Sephadex là gì ?

• Gel sephadex là chất thoả mãn các yếu tố trên Sephadex là chế phẩm dextran do các loài vi sinh vật khác nhau là Leuconostoc tạo ra khi chúng được nuôi cấy trên môi trường chứa saccharose Trọng lượng phân tử của dextran có thể đạt tới hàng triệu và lớn hơn Phân tử dextran bao gồm các chuỗi do các gốc glucose tạo thành các liên kết glucsid 1,6 Sephadex nhận từ dextran bằng cách xử lý hóa học (do tác dụng của epichlohidrin) để tạo ra các lưới phân nhánh có liên kết ngang gọi là "sàng phân tử" và chất này trở thành không tan trong nước Số liên kết ngang tạo ra càng nhiều, kích thước của lỗ sàng phân tử càng nhỏ

»

• Phương pháp lọc trên sephadex được tiến hành như sau: cho sephadex vào cột thủy tinh dài và cân

bằng bằng dung dịch đệm có pH nhất định Sau đó cho dung dịch enzyme lên cột Khi lọc và chiết bằng dung

môi thích hợp, các phân tử có trọng lượng phân tử nhỏ (ở đây là các muối) sẽ khuyếch tán chậm chạp qua các lỗ

nhỏ của các hạt Sephadex bị trương phồng, còn chất có trọng lượng phân tử lớn hơn (ở trường hợp này là protein enzyme ) không có khả năng đi vào mà lách nhanh qua các hạt sephadex và sẽ rơi xuống trước, sẽ được chiết

nhanh ra khỏi cột Vì vậy ta có thể tách được chất có

trọng lượng phân tử cao hơn ra khỏi chất có phân tử

lượng nhỏ Hãng Sephadex (Pharmacia) của Thuỵ Điển

đã tung ra thị trường các loại sephadex có kích thước khác «

• SDS là gì

• Sodium lauryl sulfate (hay còn gọi là sodium dodecyl sulfate

or SLS) có công thức (C12H25SO4Na)

Là chất hoạt động bề mặt dạng anionic được sử dụng thường xuyên hơn trong các ngành công nghiệp như nước rửa xe , lau sàn nhà Nhưng đặt biệt nó vẫn có thể dùng cho

người , như một ứng dụng khá quan trọng là dùng tạo bọt

thơm cho bồn tắm ,các bọt này đặt biệt rất bền và hoạt tính

bề mặt rất thấp , độ đặt của bọt cao , bọt rất dày Đặt biệt còn được sử dụng trong dượt phẩm ( aspirin ) dùng tạo viên sủi , dùng để tổng hợp protein như là một chất điện di ( phần này Valky không thật sự hiểu nên không dám dịch càng ) Vì có nhiều ứng dụng đặt biệt nên SLS khá mắc

«

Tủa phân đọan bằng ethanol

• Ethanol thường được sử dụng để kết tủa enzym do chúng ở dạng tinh khiết, ít bị lẫn tạp chất và giá thành tương đối rẻ Mặt khác dung môi này dễ bay hơi nên có thể tách chúng ra khỏi enzym dễ dàng bằng cách khuất nhẹ hay quạt gió.