Báo cáo thực hành Định lượng Vitamin B12 bằng quang phổ UVVIS

I.Định tính vitamin B121.So sánh phổ của 2 dung dịch•Tiến hànhQuét phổ dung dịch chuẩn 30ppm và dung dịch thử mẫu G trong cuvet thạch anh với bước sóng từ 240640nm.Nếu thu được hai phổ trùng nhau hay tương tự nhau thì chứng tỏ trong dung dịch thử có chứa vitamin B12.•Kết quả:Phổ của dung dich thử mẫu G:

BÁO CÁO THỰC HÀNH

ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN B12 BẰNG

QUANG PHỔ UV-VIS

I Định tính vitamin B 12

1 So sánh phổ của 2 dung dịch

- Quét phổ dung dịch chuẩn 30ppm và dung dịch thử mẫu G trong cuvet thạch anh với bước sóng từ 240-640nm

- Nếu thu được hai phổ trùng nhau hay tương tự nhau thì chứng tỏ trong dung dịch thử có chứa vitamin B12

- Phổ của dung dich thử mẫu G:

- Phổ của dung dịch thử mẫu G và dung dich chuẩn:

- Nhận xét: Hai phổ tương tự nhau và có cực đại hấp thụ giống nhau chứng tỏ

có vitamin B12 trong dung dịch thử

- Kết luận: Trong dung dịch mẫu thử có chứa vitamin B12

2 Dựa vào đặc trưng của phổ

Vitamin B12 ,dung dịch 0,0030% trong nước có 3 cực đại hấp thụ ở 3 bước

sóng 361±1 nm, 550±2 nm, 278±1 nm

- Quét phổ trong cuvet thạch anh với bước sóng từ 240-640nm

- Tính các tỷ số hấp phụ

- So sánh với tỷ số của B12

→== 3,22

Tỷ số này nằm trong khoảng tỷ số hấp phụ (3,15-3,45) của vitamin B12, chứng tỏ trong dung dịch mẫu thử có chứa vitamin B12

II Định lượng vitamin B 12

1 Phương pháp đo trực tiếp.

- Đo mật độ quang của dung dịch phân tích mẫu thử ở bước sóng 361nm

- Từ công thức A=E 1% 1cm l.C

Với A=0,7598; l=1cm; E1%

1cm=207 → Cthử= 36,7.(g/ml) = 36,7 ppm

Vậy nồng độ của dung dịch phân tích mẫu thử là 36,7 ppm

2 Phương pháp đường chuẩn

30ppm, 60ppm, 100ppm từ dung dịch chuẩn 1000ppm

- Quét phổ của 5 dung dịch chuẩn và dung dịch thuốc thử mẫu G ở bước sóng 361nm

Gọi y là biến của độ hấp thu

x là biến của nồng độ

Phương trình đường chuẩn có dạng y = ax + b

Với a = = 0,0218

b = = 0,0741

Với A361

Thử=0,7598

- Phương trình hồi quy tuyến tính là A=0,0218C + 0,0741

→ Cthử= 31,45 ppm

3 Phương pháp so sánh một điểm.

- Theo nguyên tắc so sánh thì chọn một điểm so sánh càng gần với nồng độ cần xác định thì phép so sánh càng chính xác

Với A361

T =0,7598 Ta chọn ra dung dịch có độ hấp thụ quang gần với 0,7598 nhất, đó chính là C3 có A3=0.75195

Ta có công thức:

=  =  Ct= 30,31ppm

Vậy nồng độ vitamin B12 có trong dung dịch phân tích mẫu thử là 30,31ppm

● Khi dùng ba phương pháp khác nhau để tính nồng độ dung dịch thử, ta thu được các kết quả có độ chênh lệch khá nhỏ