MÔI TRƯỜNG NHÂN NHANH CHỒI cây HOA cúc “FARM tím” (chrysanthemumsp ) BẰNG PHUƠNG PHÁP NUÔI cấy mô

DANH SÁCH CÁC CH VI T T TMS: Murashige & Skoog 1962 NAA: alpha-naphthalenacetic acid BA: Benzyl adenin... “Môi tr ng nhân nhanh ch i cây hoa cúc”Farm tím” Chrysanthemum sp.. Nguy n Th Ma

TR NG I H C C N TH

KHOA NÔNG NGHI P & SINH H C NG D NG

Lu n v n t t nghi p Ngành: HOA VIÊN VÀ CÂY C NH

Tên tài:

CÚC “FARM TÍM” (Chrysanthemum sp.) B NG

MSSV: 3053385

p: HVCC K31

Lu n v n t t nghi p ngành Hoa Viên và Cây C nh v i tài:

MÔI TR NG NHÂN NHANH CH I CÂY HOA CÚC “FARM TÍM”

(Chrysanthemum sp.) B NG PH NG PHÁP NUÔI C Y MÔ

Do sinh viên Nguy n M ng Thúy th c hi n

TR NG I H C C N TH

B MÔN SINH LÝ SINH HÓA

H i ng ch m lu n v n t t nghi p ã ch p nh n lu n v n t t nghi p ngành Hoa Viên và Cây C nh v i tài:

MÔI TR NG NHÂN NHANH CH I CÂY HOA CÚC “FARM TÍM”

(Chrysanthemum sp.) B NG PH NG PHÁP NUÔI C Y MÔ

Do sinh viên Nguy n M ng Thúy th c hi n và b o v tr c H i ng

Ý ki n c a H i ng ch m lu n v n t t nghi p ………

………

………

………

Lu n v n t t nghi p c H i ng ánh giá m c: ………

DUY T KHOA

Tr ng khoa Nông Nghi p & SH D C n th , ngày tháng n m 2009

L I CAM OAN

Tôi xin cam oan ây là công trình nghiên c u c a b n thân Các s li u, k t qutrình bày trong lu n v n là trung th c và ch a c ai công b trong b t k lu n v nnào tr c ây

Tác gi lu n v n

Nguy n M ng Thúy

L I C M N

Xin t lòng bi t n sâu s c n:

Th y Nguy n B o Toàn B môn Sinh lý Sinh hoá, khoa Nông Nghi p và Sinh H c

ng D ng, tr ng i H c C n Th ã t n tình h ng d n, g i ý và cho nh ng l ikhuyên h t s c b ích trong su t th i gian th c hi n lu n v n này

Cô Nguy n Th Mai Anh B môn Sinh lý Sinh hoá, khoa Nông Nghi p và Sinh H c

Quí Th y Cô c a khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng nói riêng, tr ng i

h c C n Th nói chung ã truy n t nh ng ki n th c, kinh nghi m cho em trong

2005-2009: h c t i tr ng i h c C n Th , khoa Nông Nghi p & Sinh H c ng

D ng, ngành Hoa Viên và Cây C nh K31

1.2.8 pH 81.3 ng d ng c a k thu t nuôi c y mô trong vi nhân gi ng 8

CH NG 2 PH NG TI N VÀ PH NG PHÁP THÍ NGHI M 122.1 Ph ng ti n thí nghi m 122.1.1 V t li u thí nghi m 122.1.2 Ph ng ti n thí nghi m 122.1.3 a i m và th i gian thí nghi m 122.2 Ph ng pháp thí nghi m 132.2.1 Thí nghi m 1: nh h ng c a môi tr ng nuôi c y mô n s nhân ch i c a

2.2.2 Thí nghi m 2: Hi u qu c a ch t i u hoà sinh tr ng th c v t BA và NAA

ên s nhân ch i c a cây hoa cúc 14

CH NG 3 K T QU VÀ TH O LU N 163.1 Thí nghi m 1: nh h ng c a môi tr ng nuôi c y mô n s nhân ch i c a

3.2 Thí nghi m 2: Hi u qu c a ch t i u hoà sinh tr ng th c v t BA và NAA n

s nhân ch i c a cây hoa cúc 213.2.1 S ch i trung bình thu c sau 8 tu n nuôi c y trên cây hoa cúc 213.2.2 T l ph n tr m ch i m i c t o thành sau 1 tu n nuôi c y 22

3.2.5 S ch i m i hình thành sau 4 tu n nuôi c y trên cây hoa cúc 243.2.6 T l ph n tr m s ch i m i hình thành sau 4 tu n nuôi c y 263.2.7 Chi u cao ch i trung bình gia t ng t ng i trên ch i 28

TÀI LI U THAM KH O 32

THÀNH PH N CÁC MÔI TR NG NUÔI C Y 40

DANH SÁCH HÌNH

3.1 Trình bày s khác bi t v chi u cao ch i 193.2 S lá trên ch i c a hoa cúc 28 ngày sau khi nuôi c y 203.3 Hi u qu c a BA n s t o thành c m ch i c a cây hoa cúc 263.4 S sinh tr ng ch i c a hoa cúc c a nghi m th c BA 1.0 mg/l +

NAA 0.2 mg/l.trong môi tr ng i ch ng

DANH SÁCH CÁC CH VI T T T

MS: Murashige & Skoog (1962)

NAA: alpha-naphthalenacetic acid

BA: Benzyl adenin

NGUY N M NG THÚY, 2009 “Môi tr ng nhân nhanh ch i cây hoa cúc

”Farm tím” (Chrysanthemum sp.) b ng ph ng pháp nuôi c y mô” Lu n v n

t t nghi p i h c, Khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng, Tr ng i H c

C n Th

Cán b h ng d n : ThS Nguy n Th Mai Anh

tài “Môi tr ng nhân nhanh ch i cây hoa cúc (Chrysanthemum sp.) b ng

ph ng pháp nuôi c y mô” c th c hi n nh m tìm ra môi tr ng nuôi c y k t

h p v i n ng ch t i u hoà sinh tr ng th c v t (BA và NAA) thích h p cho snhân ch i, nâng cao h s nhân ch i, làm c s cho vi c rút ng n th i gian a

gi ng vào s n xu t

tài bao g m 2 thí nghi m c b trí theo th th c hoàn toàn ng u nhiên t 1

n 2 nhân t , v i 5 l n l p l i, m i l n l p l i là 1 keo, m i keo c y 5 m u ch i.Thí nghi m c a tài ã thu c các k t qu nh sau:

Môi tr ng nuôi c y 1/2MS có b sung 10% n ng n c d a là môi tr ng thích

h p cho s nhân ch i trên hoa cúc K t qu thí nghi m 1 thu c h s nhân

ch i cao nh t trên cây hoa cúc v i 8,2 ch i/m u c y sau 4 tu n nuôi c y

K t qu thí nghi m 2 trong môi tr ng nuôi c y 1/2MS có b sung 10% n ng

n c d a có s k t h p v i ch t i u hoà sinh tr ng th c v t nhóm cytokinin BA(1mg/l) và nhóm auxin NAA (0.2mg/l) cho h s nhân ch i cao nh t trên cây hoacúc v i 133,3 ch i/m u c y sau 8 tu n nuôi c y

Hoa cúc (Chrysanthemum sp.) là m t trong ba loài hoa c t cành c a chu ng

nh t trên th gi i (Lê H u Cân và Nguy n Th H i Hà, 2004) Trong các danh hoa,hoa cúc c ng là loài hoa c x p h ng Trong b t quí c a ng i ch i hoa i

a, hoa cúc c x p vào b t quí (mai, lan, trúc, cúc) Hoa cúc ã tôn vinh v

p cho mùa thu, làm s ng d y s luy n l u c a mùa hè, g i c m v m t th i xa

a trong lòng ng i Hoa cúc là m t loài hoa a d ng v ch ng lo i, a h ng, a

s c ( ng V n ông và inh Th L c, 2003)

Vi t Nam hoa cúc c tr ng nhi u Hà N i, Thành Ph H Chí Minh, à L t,

H i Phòng n nay Vi t Nam có kho ng 70 gi ng hoa cúc c tr ng v i m cích c t cành ( ng V n ông và inh Th L c, 2003) Hi n nay, có r t nhi u

ph ng pháp nhân gi ng hoa cúc: ph ng pháp nhân gi ng vô tính, nhân gi ng h utính Ph ng pháp nhân gi ng h u tính g p nhi u khó kh n do a s cúc th ngkhông có h t Ph n l n các lo i hoa cúc m c t h t ch s ng m t n m nên th ng

ch c s d ng t o gi ng m i (Nguy n Xuân Linh, 2004)

Nhân gi ng b ng ph ng pháp nuôi c y mô là m t ph ng pháp nhân gi ng vôtính cho h s nhân cao, cây gi ng c t o ra ng nh t v m t di truy n, cây s ch

b nh, có s c s ng t t, phát tri n m nh, ít b bi n d (Nguy n c Thành, 2000);(Bùi Bá B ng, 1995)

Do ó, tài kh o sát “Môi tr ng nhân nhanh ch i cây hoa cúc “Farm tím”

(Chrysanthemum sp.) b ng ph ng pháp nuôi c y mô” c th c hi n nh m tìm ramôi tr ng nuôi c y mô thích h p v i s k t h p c a các ch t u hòa sinh tr ng

th c v t, nâng cao h s nhân ch i, rút ng n th i gian a gi ng vào s n xu t

CH NG 1 L C KH O TÀI LI U

1.1 NGU N G C VÀ C I M TH C V T CÂY HOA CÚC

1.1.1 Ngu n g c

Cây hoa cúc có tên khoa h c là Chrysanthemum sp., thu c h Asteraceae, phân h

Asteroideae, chi Chrysanthemum Hoa Cúc có ngu n g c t Trung Qu c, Nh t B n,

m t s n c Châu Âu và c nh p vào Vi t Nam t lâu i (Nguy n Xuân Linh,1998)

1.1.2 c m th c v t

Trên th gi i cây hoa cúc có h n 200 loài, Vi t Nam có 5 loài ch y u thu c hoa

c nh hi n c a chu ng ph bi n vì v p c a hoa Hoa cúc không ch p màcòn th m và r t lâu tàn, c bi t khi héo cánh không r i cành nên quan ni m Áông cho r ng cúc có tính trung thành c a ng i quân t Hoa cúc có th c t bônghay tr ng ch u, vì dáng v cây c ng r t p Hoa cúc còn là v thu c quý Hoa cúc

a khí h u mát m , nhi t trung bình không cao quá 350C c ng không th p quá

100C, m không quá 80% ( ng Ph ng Trâm, 2005) a s hoa cúc là cây

ng n ngày

1.1.2.1 Thân

Hoa cúc thu c nhóm cây thân th o, kh n ng phân nhánh m nh, có nhi u t giòn,

d g y, cây càng l n thân s càng c ng Chi u cao c a cây, chi u dài c a t, sphân cành m nh, y u ph thu c vào c tính c a t ng gi ng Nhìn chung u

ki n Vi t Nam hoa cúc có th cao t 30-80cm Trong i u ki n ngày dài hoa cúc có

th cao n 1.5-2m (Nguy n Xuân Linh, 1998).

1.1.2.2 R

Cây hoa cúc thu c lo i r chùm, r cây ít n sâu mà phát tri n theo chi u ngang

Kh i l ng b r l n do sinh nhi u r ph và lông hút, nên kh n ng hút n c vàdinh d ng m nh (Nguy n Xuân Linh, 1998)

1.1.2.3 Lá

Lá cúc x thùy có m t r ng c a, th ng là lá n m c so le nhau, m t d i lá bao

ph m t l p lông t , trên m t nh n, phân hình m ng l i Phi n lá to hay nh , dàyhay m ng, màu s c xanh m, xanh vàng hay xanh nh t còn ph thu c vào c i m

c a t ng gi ng (Nguy n Xuân Linh, 1998)

1.1.2.4 Hoa

Hoa l ng tính ho c n tính có nhi u màu s c khác nhau (tr ng, vàng, , tím,xanh) ng kính hoa t 1,5-12cm Hoa kép nhi u hoa n và th ng m c nhi uhoa trên m t cành phát sinh t các nách lá Tràng hoa dính vào b u nh hình cái

ng, trên ng ó phát sinh cánh hoa Cánh có nhi u hình d ng khác nhau cong ho c

th ng, có lo i cánh ng n u, có lo i dài, cu n ra ngoài hay cu n vào trong (Nguy nXuân Linh, 1998)

nhau Tr i qua nhi u th nghi m ng i ta nh n th y ph i s d ng môi tr ngchuyên d ng cho t ng loài hay t ng lo i mô c y chuyên bi t (Lê V n Hòa & ctv.,2001).

Thành ph n môi tr ng nuôi c y bao g m:

Khoáng vi l ng óng vai trò quan tr ng trong ho t ng c a enzyme, tuy chi m t

l nh nh ng nó mang l i là thành ph n không th thi u (Nguy n V n Uy n và ctv., 1984) Thi u s t t bào m t kh n ng phân chia Theo Nguy n V n Uy n và ctv.

(1984) trong nuôi c y mô th ng s d ng s t vi l ng d ng chelate (Fe-EDTA)

d ng này, s t không b k t t a nên s cung c p li u l ng theo nhu c u c a môi

1.2.3 Ngu n cacbon

Theo Nguy n V n Uy n và ctv (1984) mô th c v t trong môi tr ng nuôi c ykhông có kh n ng t d ng, ph i s ng theo ph ng th c d d ng nên b sungngu n cacbon là c n thi t vì nó óng vai trò là ngu n cung c p n ng l ng ch y ucho mô nh m t ng h p nên các ch t h u c giúp t bào phân chia, t ng sinh kh i.Ngoài ra nó còn có tác d ng i u hòa áp su t th m th u c a môi tr ng (V V n

V , 1999) Ngu n cacbon th ng dùng trong nuôi c y mô là ng saccharose (2 –3%) (Bùi Bá B ng, 1995)

1.2.4 Vitamin

Vitamin c ng r t c n thi t trong thành ph n môi tr ng nuôi c y vì trong i u ki n

in vitro a s mô c y ch a có c u trúc t t ng h p l ng c n thi t nên c n có

s h tr t môi tr ng bên ngoài (Lê V n Hòa & ctv., 2001) Các vitamin th ng

s d ng trong nuôi c y mô là Thiamin (B1), Acid Nicotinic (B3), Pyridoxine (B6)

và myo-inositol Trong ó Thiamin c coi là vitamin thi t y u i v i s sinh

tr ng c a t bào th c v t (Bùi Bá B ng, 1995) Theo Nguy n Xuân Linh (1998)myo-inositol có tác d ng c i thi n s sinh tr ng c a mô c y và c s d nghàm l ng 10-100 mg/l Các vitamin có tác d ng kích thích s sinh tr ng c a mô

c y

Theo Lê Tr n Bình và ctv (1997), n c d a ã c s d ng trong môi tr ng nuôi

c y t n m 1941 nuôi phôi Datura và n m 1949 nuôi mô Daucus K t qu phântích n c d a c a trái có tu i t non n già cho th y s xu t hi n trong n c

Ngoài ra trong n c d a còn ch a các h p ch t quan tr ng i v i t bào nuôi phân

l p nh myo-inositol, các h p ch t có tính auxin, các cytokinin d ng glucoside i

v i nhi u m u nuôi c y, l ng n c d a phù h p t 15-20% th tích môi tr ng(V V n V , 1999)

Các h p ch t auxin kích thích s dãn n t bào, s hình thành mô s o và s xu t

hi n r b t nh (Nguy n Xuân Linh, 1998)

Auxin t nhiên th ng tìm th y th c v t là indole-3-acetic acid (IAA) Nó hi n

di n n ng cao vùng phân sinh mô c a th c v t và liên quan n nhi u áp

ng sinh lý Trong l nh v c nuôi c y mô, hi u qu chính c a nó là s phân chia tbào và quá trình gián phân M t trong nh ng áp d ng chính c a auxin là kích thíchquá trình t o r

Auxin t ng h p là nh mg h p ch t có ho t tính t ng t nh IAA Auxins có th

c chia thành 6 nhóm: nh ng d n xu t c a indole: Indole-3-acetic (IAA) vàindole-3-butyric acid (IBA); nh ng d n xu t benzoic acid: 2,3,6-trichlorobenzoicacid và 2-methoxy-3-6-dichorobenzoic acid (Dicamba); nh ng chlorophenoxyaceticacid: 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid (2,4,5-T) và 2,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D); Picolinic acid: 4-amino-3,5,6-trichloropiconic acid (Tordon hayPichloram); nh ng naphthalene acid: alpha và beta naphthalenacetic acid; nh ng

c ng c s d ng r ng rãi trong nuôi c y mô.

Theo ng Ph ng Trâm (1997) m t dù trong th c v t có nhi u nhóm ch t i u hòasinh tr ng th c v t nh ng ch y u ki m soát sinh tr ng phát tri n là các ch tthu c nhóm auxin và cytokinin Vi c s d ng hàm l ng và t l auxin/cytokinintrong môi tr ng nuôi c y mô quy t nh s phân chia c a t bào theo h ng t o

mô s o, t o ch i, t o r hay t o phôi sôma (Nguy n Xuân Linh,1998) Nhìn chung

Agar là m t lo i polysaccharic c a t o bi n c s d ng làm ch t m cho môi

tr ng dinh d ng ông c ng l i (Lê Tr n Bình và ctv., 1997), làm giá th cho nuôi

c y mô t bào th c vât (Nguy n Xuân Linh, 1998) Hàm l ng agar th ng dùng

cho nuôi c y in vitro t 0.5 n 1% N ng agar cao môi tr ng s tr nên ông

c ng, s khuy ch tán các ch t dinh d ng c ng nh s h p th c a mô s o g p khó

kh n (Bùi Bá B ng, 1995)

1.2.8 pH

pH th ng c i u ch nh t 5.5 - 6 tr c khi h p kh trùng pH quy t nh s hoàtan c a khoáng, nh h ng s h p thu khoáng trong môi tr ng, nh h ng n s

t o gel c a agar khi h p kh trùng (Nguy n B o Toàn, 2005)

GI NG

Nuôi c y mô t bào th c v t (nuôi c y in vitro) là m t ngành k thu t còn non tr

c phát tri n m nh và c hoàn thi n t nh ng n m 60 c a th k XX và em

l i nhi u ng d ng (Nguy n Nh Hi n và Nguy n Nh t, 2001) Theo Nguy n

V n Uy n (1999) thì kh n ng ng d ng nuôi c y mô th c v t thành công nh t làtrong l nh v c nhân gi ng và ph c tráng gi ng

Nhân gi ng vô tính in vitro (vi nhân gi ng)

i v i hoa cúc, ph ng pháp nhân gi ng vô tính th ng là ph ng pháp chính, do

ph ng pháp nhân gi ng h u tính g p nhi u khó kh n do i a s hoa cúc th ngkhông có h t Ph n l n các lo i hoa cúc m c t h t ch sinh tr ng trong vòng m t

m nên ph ng pháp này ch c áp d ng trong t o gi ng m i (Nguy n XuânLinh, 1998)

Khái ni m

Nhân gi ng vô tính in vitro hay vi nhân gi ng là vi c nhân úng ki u cây

(true-to-type) c a m t ki u gen c tuy n ch n b ng cách s d ng k thu t in vitro là

ph ng pháp nhân nhanh gi m giá thành (George, 1993)

Vi nhân gi ng b t d u t vi c tách nh ch i hay mô phân sinh ti n hành kh trùngsau ó a vào môi tr ng thích h p, ch i c nhân lên sau 3-4 tu n các ch i

c tách ra và chuy n sang môi tr ng m i và qui trình c l p l i Trong m t s

th i cây con mau già cõi và d ngã (Tr n Th ng Tu n và ctv., 1994) M t khác, nhân gi ng vô tính in vivo cho h s nhân th p h n nhân gi ng vô tính in vitro (Lê

Tr n Bình và ctv., 1997).

Theo Bùi Bá B ng (1995) nhân gi ng vô tính in vitro có nhi u u i m

-T o ra cây con ng nh t và gi c c tính di truy n c a cây m

-H s nhân cao có th nhân m t s l ng cây con r t l n t m t cá th ban utrong th i gian ng n

-M t gi ng quý có th nhân nhanh a vào s n xu t

-Có th t o ra cây con s ch b nh do có s ch n l c các i t ng s ch b nh tr ckhi a vào môi tr ng nuôi c y

Nhìn chung, nhân gi ng vô tính in vitro c ng d ng thành công và d dàng trêncây hai lá m m, c ng nh trên các cây thân th o h n trên cây thân g (Nguy n c

L ng, 2002)

Qui trình nhân gi ng in vitro

Nhân gi ng in vitro c Debergh và Zimmerman (1991) chia thành n m giai o n:

-Giai o n 0: L a ch n và chu n b cây m

Kh i u c a qui trình vi nhân gi ng c n ph i có s l a ch n cây m c n th n,chúng c tr ng cho gi ng loài và không có bi u hi n m m b nh do ó làm gi m và

lo i tr m m b nh là c n thi t

-Giai o n 1: B t u ti t trùng và t o m u c y vô trùng

ây là giai o n mà m u v t t bên ngoài c a vào i u ki n nuôi c y vô

nhi m th p, t l s ng cao, t c sinh tr ng nhanh (Lê Tr n Bình và ctv., 1997).

Nh v y, c n ph i tho hai y u t sau:

+Cách l y m u: H u h t các mô c a th c v t u có th s d ng làm m u v tnuôi c y, quan tr ng nh t là nh sinh tr ng, ch i nách, sau ó là hoa, o n thân,

m nh lá và r (Lê Tr n Bình và ctv., 1997).

+Ch n ph ng pháp kh trùng: m u v t s t t l s ng cao, môi tr ng nuôi c ythích h p s cho t c sinh tr ng nhanh

-Giai o n 2: Nhân nhanh s l ng

M c ích c a giai o n này là t o c s l ng cây theo ý mu n thông qua quátrình kích thích các mô phân sinh nh : nh sinh tr ng, ch i chính, ch i bên(Nguy n B o Toàn, 2005) Có hai ki u t ng t c nhân trong giai o n này là:+Ph ng pháp c y m t: thân c c t ra thành t ng o n ch a m t m t hay nhi u

m t lo i b lá Ch i m i s phát tri n t m m ngang nách lá Tuy nhiên ph ngpháp này t ra có hi u qu nhóm cây hai lá m m và nh ng cây s ch b nh(George, 1993)

+Ph ng pháp khác t ng s ch i giai o n này là c y nh sinh tr ng hay c y

nh ch i theo cách này có hai ki u ch i c t o thành là: ch i dài và c m ch i

ch i dài, các ch i phát tri n lóng dài và các ch i ngang c ng phát tri n dài, trongkhi c m ch i t o ra nhi u ch i nh ng lóng ng n (George, 1993)

Trong giai o n này thì cytokinin óng vai trò r t quan tr ng trong vi c t ng s ch ituy nhiên v i hàm l ng cao c ng gây m t s v n nh : s thi u n c, t o thành

b i r m, bi n d vô tính, các v n r (Nguy n B o Toàn, 2005)

-Giai o n 3: Chu n b và a cây ra ngoài môi tr ng t nhiên

Ch i và cây con c t o ra giai o n 2 th ng r t nh ch a kh n ng pháttri n ngoài môi tr ng t nhiên Vì v y m c ích c a giai o n này là t o cây pháttri n y : r , thân, lá có kh n ng th c hi n quang h p và s ng sót mà không c ncung c p ngu n carbohydrate nhân t o, c chia hai giai o n:

+Giai o n 3a: Kéo dài các ch i c hình thành giai o n 2 t kích th c

kéo dài trên ch i n hay c m ch i (Nguy n c L ng và Lê Th Th y Tiên,2002)

+Giai o n 3b: Kích thích t o r và ti n thu n d ng

Auxin là h p ch t th ng c s d ng nh t t o r , than ho t tính c ng c s

d ng ph bi n trên môi tr ng t o r do có tác d ng làm t i môi tr ng và h p th

h p ch t cytokinin d th a trong môi tr ng ra r Ngoài ra, ây c ng là giai o nthích h p cho vi c ti n thu n d ng nh m t ng kh n ng t d ng c a cây nuôi c y

mô tr c khi a ra ngoài môi tr ng t nhiên v i các ph ng pháp th c hi n nh :cung c p cây con l ng carbohydrate, làm th p m t ng i trong bình, keongoài i u ki n t nhiên tr c khi a ra ngoài (Nguy n c L ng và Lê Th

Th y Tiên, 2000)

-Giai o n 4: Chuy n cây ra ngoài môi tr ng t nhiên

Ch t l ng cu i cùng c a công vi c nhân gi ng in vitro ph thu c m t ph n vào

vi c thu n d ng Th ng các cây con sau giai o n c y mô c mang tr ng tr c

ti p ra nhà l i hay môi tr ng t nhiên t l ch t r t cao Nguyên nhân ch y ugây ra hi n t ng này là do c u trúc gi i ph u c a cây nuôi c y mô không thích h p

v i i u ki n t nhiên, th hai là do s thay i t ng t v i i u ki n môi tr ng

Vì v y t ng kh n ng s ng sót c a cây con ngoài nhà l i ph i trãi qua giai o n

hu n luy n thích nghi v i s thay i c a nhi t , m , s m t n c, sâu b nh

(Lê Tr n Bình và ctv., 1997).

Cây con chuy n t giai o n 3 c r a s ch agar, sau ó tr ng trên giá th thích

h p, c gi m cao, tránh ánh sáng cao Th i gian t i thi u cho s thích nghikho ng 2-3 tu n, trong th i gian này ph i h n ch t i a nh ng y u t b t l i: m t

n c nhanh chóng làm cho cây khô héo, nhi m vi khu n và n m làm cây th i

nh ng, cháy lá do n ng (George, 1993)

Các d ng c và trang thi t b : bu ng c y vô trùng, máy kh trùng nhi t t, t s y

gi y, máy o pH, cân i n t , các d ng c th y tinh dùng cho thí nghi m: ng ong,

ca nh a, keo, a th y tinh…

Hóa ch t dùng trong thí nghi m g m: Các nguyên t khoáng a l ng: N, P, K, Mg,

S, Ca, Na Các nguyên t khoáng vi l ng: Fe, B, Mn, I, Cu, Mo, Cl, Zn, Co, Ni.Các vitamin: Thiamin (B1), Acid Nicotinic (B3), Pyridoxine (B6), Glycine và myo-inositol Ch t n n là ng sucrose Ch t i u hoà sinh tr ng th c v t bao g m

BA, NAA Ch t h u c c s d ng là n c d a Ch t kh trùng là c n 900, c n

700

i u ki n thí nghi m: Thí nghi m c b trí trong u ki n phòng nuôi c y mô,

i u ki n nhi t 26 ± 20C, c ng ánh sáng 1500-2000 lux, th i gian chi u sáng16gi /ngày

2.1.3 a m và th i gian thí nghi m

a m thí nghi m: Thí nghi m c b trí t i phòng nuôi c y mô c a t Sinh lý

th c v t, B môn Sinh lý-Sinh hóa, khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng,

tr ng i H c C n Th

2.2 PH NG PHÁP THÍ NGHI M

Ph ng pháp nghiên c u d a trên các thí nghi m

2.2.1 Thí nghi m 1: nh h ng c a môi tr ng nuôi c y mô lên s nhân ch i

c a cây hoa cúc.

M c ích: Nh m tìm ra môi tr ng nuôi c y mô thích h p cho s nhân ch i

Ph ng pháp thí nghi m: Thí nghi m c b trí theo th th c th a s hai nhân tbao g m môi tr ng (nhân t 1) và n ng n c d a (nhân t 2) G m 9 nghi m

th c, m i nghi m th c có 5 l n l p l i, m i l n l p l i là m t keo, m i keo ch a 5

Các môi tr ng nuôi c y c b sung thêm ng (20g/l); agar (8,5g/l) Môi

tr ng nuôi c y c i u ch nh pH=5,8 M i keo thí nghi m ch a 30ml môi

tr ng c h p kh trùng nhi t 1210C, 1kg/cm2 (15psi) trong 20 phút

Các ch tiêu theo dõi trong thí nghi m 1: t l t o ch i, chi u cao ch i, s lá trên

ch i

Th i gian l y ch tiêu trong thí nghi m 1: 1, 2, 3, 4 tu n sau khi c y