HIỆU QUẢ PHÒNG TRỊ BỆNH THÁN THƯ TRÊN ớt (COLLETOTRICHUM SP ) BẰNG BIỆN PHÁP SINH học và hóa học TRONG điều KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM và NHÀ lưới

phòng tr sinh b nh cây.... trong phòng tr b nh cây..... Các loài Colletotrichum spp... Có kho ng 11 trong s 20 loài Colletotrichum spp... Vi khu n Pseudomonas fluorescens có kh n ng ki m

n Th – 2012

KHOA NÔNG NGHI P VÀ SINH H C NG D NG

Lu n v n t t nghi p Chuyên ngành B O V TH C V T

MSSV: 3083886

TR NG I H C C N TH KHOA NÔNG NGHI P & SINH H C NG D NG

(Ký tên)

Ts Nguy n Th Thu Nga

TR NG I H C C N TH KHOA NÔNG NGHI P & SINH H C NG D NG

B MÔN B O V TH C V T

H i ng ch m lu n v n t t nghi p ã ch p nh n lu n v n v i tài:

HI U QU PHÒNG TR B NH THÁN TH TRÊN T

(COLLETOTRICHUM SP.) B NG BI N PHÁP SINH H C VÀ HÓA H C

TRONG I U KI N PHÒNG THÍ NGHI M VÀ NHÀ L I

Do sinh viên H NH THI N th c hi n và b o v tr c h i ng

Ngày…… tháng…….n m 2012

Lu n v n ã c h i ng ánh giá m c……… m

Ý ki n c a h i ng:

………

………

………

………

………

………

………

DUY T KHOA C n T , ngày……tháng… n m 2012

CH NHI M KHOA NN & SH D CH T CH H I NG

C S CÁ NHÂN

H và tên: H Nh Thi n

Ngày sinh: 1989

i sinh: Long M , H u Giang

H và tên Cha: H V n Thanh

H và tên M : Nguy n Th Biên

Quê quán: Long M , H u Giang

Quá trình h c t p:

1995-2000: Tr ng ti u h c Long Tr II, Long M , H u Giang

2000-2004: Tr ng trung h c c s Long Tr I, Long M , H u Giang

2004-2007: Tr ng trung h c ph thông Long M , Long M , H u Giang

2008-2012: Là sinh viên tr ng i H c C n Th , ngành B o V Th c V t, khóa

34, Khoa Nông Nghi p & Sinh H c ng D ng

L I C M T

Kính dâng Cha M lòng bi t n chân thành và thiêng liêng nh t Con luôn ghi nhcông n Cha M ã sinh thành, d ng d c và nuôi d y con nên ng i ó là ng l cgiúp con v t qua nh ng khó kh n có k t qu nh ngày hôm nay

Em xin g i n cô Nguy n Th Thu Nga, gi ng viên h ng d n lòng thành kính

và bi t n sâu s c Cô ã t n tình ch b o, ng viên em trong su t quá trình th c hi n

lu n v n t t nghi p

Xin chân thành c m n các th y, các cô trong khoa Nông Nghi p & Sinh H c

ng D ng và các th y, các cô trong Tr ng i h c C n Th ã t n tâm d y d , truy n

t nh ng kinh nghi m và ki n th c quý báo cho em trong su t th i gian h c t i

Tr ng

Thành th t c m n!

Ch oàn Th Ki u Tiên trong b môn B o V Th c V t ã t o u ki n cho emhoàn thành t t thí nghi m

Các b n sinh viên l p b o v th c v t khóa 34 ã giúp tôi trong th i gian th c

hi n tài c bi t là các b n An, H nh, D ng, Ngh a, Li u, Linh, Giàu, Th a, Tài,

D ng, Trí, Tâm …

Xin chân thành c m n!!!

H Nh Thi n

M C L C

DANH SÁCH CH VI T T T viii

DANH SÁCH B NG ix

DANH SÁCH HÌNH x

TÓM L C xi

T V N 1

CH NG 1: L C KH O TÀI LI U 3

1.1 B nh thán th trên t 3

1.1.1 Tác nhân 3

1.1.2 Tri u ch ng 4

1.1.3 S phân b và thi t h i kinh t 4

1.1.4 c m hình thái, sinh h c và sinh thái c a n m Colletotrichum sp gây b nh thán th trên t 5

1.1.5 ch xâm nhi m c a n m Colleotrichum spp và c i m phát tri n c a b nh thán th trên t 6

1.2 Bi n pháp phòng tr 8

1.2.1 Bi n pháp canh tác 8

1.2.2 Bi n pháp hóa h c 8

1.2.3 Bi n pháp sinh h c 8

1.3 Phòng tr sinh h c b nh cây tr ng b ng vi khu n vùng r 9

1.3.1 Khái ni m phòng tr sinh h c 9

1.3.2 Khái ni m vi khu n vùng r kích thích t ng tr ng cây tr ng 9

1.3.3 Vai trò c a vi khu n vùng r trong phòng tr sinh h c b nh cây tr ng 9

1.4 Vai trò c a vi khu n Pseudomonas spp trong phòng tr sinh h c b nh cây 10

1.4.1 c m c a vi khu n Pseudomonas spp 10

1.4.2 C ch c a vi khu n Pseudomonas spp trong c ch m m b nh 11

1.4.3 M t s ng d ng vi khu n Pseudomonas spp phòng tr sinh b nh cây 12

1.5 Vi khu n Bacillus spp trong phòng tr sinh h c b nh cây tr ng 12

1.5.1 M t s c m c a vi khu n Bacillus spp 12

1.5.2 ch c a vi khu n Bacillus spp trong phòng tr sinh h c b nh cây 13

1.5.3 M t s ng d ng vi khu n Bacillus spp trong phòng tr b nh cây 14

1.6 c m c a thu c Binhnomyl 50WP 15

CH NG 2: PH NG TI N – PH NG PHÁP 17

2.1 Ph ng ti n 17

2.1.1 Th i gian và a m 17

2.1.2 V t li u 18

2.2 Ph ng pháp 19

2.2.1 Kh o sát s nh h ng c a các n ng thu c Binhnomyl 50WP lên s phát tri n c a hai ch ng vi khu n Pseudomonas 159 và Bacillus 80 19

2.2.2 ánh giá hi u qu c ch c a các n ng Binhnomyl 50WP i v i n m Colletotrichum sp gây b nh thán th t trong i u ki n phòng thí nghi m 19

2.2.3 ánh giá hi u qu i kháng c a hai ch ng vi khu n vùng r Pseudomonas 159, Basillus 80 và thu c Binhnomyl 50WP i kháng v i n m Colletotrichum ST2. trong i u ki n phòng thí nghi m 20

2.2.4 ánh giá hi u qu phòng tr b nh thán th trên t (Colletotrichum sp.) c a hai ch ng vi khu n vùng r Pseudomonas 159, Basillus 80 và thu c Binhnomyl 50WP trong i u ki n nhà l i 22

CH NG 3: K T QU TH O LU N 24

3.1 S nh h ng c a các n ng thu c Binhnomyl 50WP Lên s phát tri n c a hai ch ng vi khu n Pseudomonas 159 và Bacillus 80 24

3.2 Hi u qu c ch c a các n ng Binhnomyl 50WP i v i n m Colletotrichum sp gây b nh thán th trên t trong u ki n phòng thí nghi m 24

3.3 Hi u qu i kháng c a hai ch ng vi khu n vùng r Pseudomonas 159, Bacillus 80 và thu c Binhnomyl 50WP i kháng v i n m Colletotrichum sp ST2 trong i u ki n phòng thí nghi m 26

3.4 Hi u qu phòng tr c a hai ch ng vi khu n vùng r Pseudomonas 159, Bacillus 80 và thu c Binhnomyl 50WP i kháng v i n m Colletotrichum sp ST2 gây b nh thán th trên t trong u ki n nhà l i 31

CH NG 4: K T LU N VÀ NGH 38

4.1 K T LU N 38

4.2 NGH 38

TÀI LI U THAM KH O 39

NSKCB: ngày sau khi ch ng b nh

NSK T: ngày sau khi t thu c

VK159: vi khu n Pseudomonas 159

VK80: vi khu n Bacillus 80

Be: thu c Binhnomyl 50WP

HHVK: h n h p vi khu n Pseudomonas 159 và Bacillus 80

DANH SÁCH B NG

1.1 M t s loài Colletotrichum spp c ghi nh n là tác nhân

gây b nh thán th t i nhi u n c trên th gi i

3

3.1 Bán kính vòng vô khu n c a các nghi m th c i v i n m

Colletotrichum sp ST2 các th i m 2, 3 và 4 ngày sau

3.6 Chi u dài v t b nh thán th (Colletotrichum sp ST2) trên t

trong i u ki n nhà l i c a các nghi m th c x lý qua các

th i m u ki m nhà l i

35

Colletotrichum sp ST2 trên môi tr ng PDA th i m 3

ngày sau khi c y

31

3.1 M c nhi m b nh thán t các nghi m th c th i

i m 12NSKCB

37

H Nh Thi n, 2012 “Hi u qu phòng tr b nh thán th trên t (Colletotrichum

sp.) b ng bi n pháp sinh h c và hóa h c trong u ki n phòng thí nghi m và nhà i” Lu n v n t t nghi p i h c, ngành B o V Th c V t, Khoa Nông Nghi p vàSinh H c ng D ng, tr ng i h c C n Th Cán b h ng d n: Ts Nguy n ThThu Nga

TÓM L C

tài “Hi u qu phòng tr b nh thán th trên t (Colletotrichum sp.) b ng

bi n pháp sinh h c và hóa h c trong u ki n phòng thí nghi m và nhà l i

c th c hi n trong u ki n phòng thí nghi m và nhà l i B môn B o V Th c

V t, khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng Tr ng i h c C n Th t tháng08/2011 n tháng 04/2012 nh m tìm ra bi n pháp x lý cho hi u qu phòng tr b nhthán th cao nh t trong u ki n nhà l i và phòng thí nghi m tài g m có các thínghi m:

* Thí nghi m 1: Kh o sát s nh h ng c a các n ng thu c Binhnomyl 50WP

lên s phát tri n c a hai ch ng vi khu n Bacillus 80 và Pseudomonas 159: Thí nghi m

c ti n hành trên a petri v i 5 l n l p l i K t qu c 4 nghi m th c Binhnomyl

n ng khuy n cáo (Be), n ng 1/2 khuy n cáo (1/2 Be), 1/4 khuy n cáo (1/4 Be),1/8 khuy n cáo (1/8 Be) u không nh h ng s phát tri n c a vi khu n 159 và 80

* Thí nghi m 2: ánh giá hi u qu c ch c a các n ng Binhnomyl 50WP i

v i n m Colletotrichum sp gây b nh thán th t trong u ki n phòng thí nghi m: Thínghi m c ti n hành trên a petri v i 5 l n l p l i k t qu 3 nghi m th c Be, 1/2

Be, 1/4 Be có hi u qua c ch s phát tri n c a n m Colletotrichum cao nh t v i bán

kính vòng vô khu n là 12,5 mm, 11,9mm và 9,6 mm và hi u su t i kháng là 39,8%,24,2% và 24,6% th i m 4 ngày sau khi t thu c

1/4Binhnomyl (HHVK + 1/4 Be) có hi u qu cao nh t v i bán kinh vòng vô khu n l n

t là 5,2mm, 5,7mm, 5,5mm và 5,0mm và hi u su t i kháng là 45,2%, 48,6%,47,9% và 46,9% th i m 7 ngày sau khi c y

Thí nghi m 4: ánh giá kh n ng i kháng c a 6 bi n pháp phòng tr i v i n m

Colletotrichum sp ST2 gây b nh thán th trên t trong u ki n nhà l i: Thí nghi m

c th c hi n v i 7 nghi m th c và 5 l n l p l i k t qu là: c 6 nghi m th c Be,VK159,Vk80, 159 + 80, HHVK + 1/4 Be, 1/4 Be u có kh n ng c ch s phát tri n

c a b nh thán th trên t trong ó nghi m th c HHVK + 1/4 Be có hi u qu cao nh t,các nghi m th c còn l i có hi u qu t ng ng nhau

T V N

t là m t lo i qu thu c chi Capsicum thu c h Cà (Solanaceae) có ngu n g c t

Châu M Cây t là m t lo i rau gia v c s d ng r ng rãi trong các b a n c a

ng i dân Vi t Nam và các n c trên th gi i nh Thái Lan, n , Hàn Qu c… Lànguyên li u cho m t s ngành công nghi p ch bi n th c ph m Ngoài ra t còn là m t

v thu c quý trong y h c c truy n, có th ch a m t s b nh m t cách h u hi u Ngàynay vi c tr ng t mang l i giá tr kinh t cao cho ng i tr ng, vì v y ngày nay cây t

c tr ng r ng rãi trong c n c ( ng H ng D t, 2003) Vi t Nam di n tíchcanh tác t ngày càng t ng tuy nhiên vi c canh tác t òi h i không ít v khâu ch msóc, ch y u là phòng tr các b nh trên t nh b nh héo vi khu n (Ralstonia

solanacearum), th i r Phytophthora spp., th i g c (Sclerotium rolfsii), b nh kh m

virus Nh ng c bi t h n c là b nh thán th do n m Colletotrichum spp gây ra, gây

h i trên trái t làm gi m giá tr th ng ph m, nh h ng nghiêm tr ng n n ng su tgây thi t h i v m t kinh t cho ng i nông dân B nh phát tri n và lây lan m nh nh tvào mùa m a nh t là các tháng 7, 8 và 9 d ng l ch (V Tri u Mân, 2007)

Theo V Tri u Mân (2007) thì b nh xu t hi n r t ph bi n trên th gi i, c bi t

là các vùng có khí h u nhi t i n c ta b nh gây h i n ng r ng kh p các vùng

tr ng t, c bi t vào mùa m a b nh phát tri n và lây lan r t nhanh Nh ng ru ng bnhi m n ng t l b nh có th lên n 70% Hi n nay vi c phòng tr b nh thán th trên

t ch y u là bi n pháp canh tác và s d ng thu c hóa h c

Theo quan i m phòng tr b nh trong th c t s n xu t ngày nay là bi n pháp qu n

lý d ch h i t ng h p, trong ó có s ph i h p nhi u bi n pháp g m bi n pháp canh tác,

bi n pháp sinh h c và bi n pháp hóa h c i v i bi n pháp hóa h c có u i m giúp

ng n ch n b nh hi u qu trong th i gian ng n, tuy nhiên bi n pháp này c ng t n t inhi u khuy t m nh gây ô nhi m môi tr ng, phá v cân b ng sinh h c và d t o

i u ki n cho m m b nh hình thành nòi kháng thu c Hi n nay các bi n pháp sinh h c(s d ng các vi sinh v t i kháng nh vi khu n vùng r , n m) ang c nghiên c u

và phát tri n m nh, nh ng bi n pháp sinh h c th ng phát huy hi u qu ch m h n so

v i bi n pháp hóa h c, c bi t không có hi u qu cao khi d ch b nh x y ra (Tr ng

Hu nh Bá, 2012; Nguy n Th M , 2012)

Do ó góp ph n qu n lý b nh thán th hi u qu h n theo h ng phòng tr t ng

h p, t n ít chi phí và thân thi n v i môi tr ng tài “Hi u qu phòng tr b nh thán

th trên t (Colletotrichum sp.) b ng bi n pháp sinh h c và hóa h c trong i u

ki n phòng thí nghi m và nhà l i”. c th c hi n nh m tìm ra bi n pháp phòng

tr b nh hi u qu nh t

Theo Than (2008a) b nh do nhi u loài n m Colletotrichum spp gây ra t i nhi u khu

v c tr ng t t i nhi u qu c gia trên th gi i (B ng 1.1)

ng 1.1 M t s loài Colletotrichum spp c ghi nh n là tác nhân gây b nh thán th trên t t i nhi u n c trên th gi i (Than và ctv., 2008a)

Gloeosporium piperatum, C nigrum Dastur, 1920

Thailand C acutatum, C capsici, C gloeosporioides Than và ctv., 2008

USA C acutatum Roberts và ctv., 2001

Vietnam C acutatum, C capsici, C gloeosporioides,

C Nigrum

Don và ctv., 2007

Theo Kim (2004) C acutatum và C gloeosporioides gây h i trên trái t t c các giai

o n C capsici gây h i ch y u trên trái chín còn C acutatum và C gloeosporioides

gây h i ch y u trên trái xanh Riêng C coccodes là loài ít c th ng ph bi n vùng ôn i Các loài Colletotrichum spp khác nhau nh ng gây ra các tri u ch ng c

b nh có th liên k t l i v i nhau thành v t l n, trên v t b nh có kh i bào t màu h ng

và có các gai c ng màu en, trên v t b nh các a ài c a n m x p thành các vòng

ng tâm (Manandhar và ctv., 1995; Than và ctv., 2008a) N ng h n b nh nhi m cvào h t các s i n m tr ng bao quanh h t, h t b nhi m có màu r s t (Sharma, 2006)

1.1.3 S phân b và thi t h i kinh t

t là th c v t quan tr ng th t trên th gi i và u tiên châu Á, v i s n l ng n m

2006 kho ng 25,9 tri u t n t t i và kho ng 2,8 tri u t n t khô Thái Lan s n xu tkho ng 420.000 t n v i di n tích kho ng 72.000 ha, b nh thán th gây thi t h ikho ng 80% n ng su t (Montri và ctv., 2009) T i Hàn Qu c b nh gây thi t h ikho ng 100 tri u ôla và n 1,33 tri u (Mahasu và ctv., 2009) Vi t Nam, ghi

nh n trên gi ng t Capsicum annum t l b nh ngoài ng kho ng t 20 - 80% và t 5

- 20% i v i gi ng C frutescens (Le Dinh Don và ctv., 2007) T i Thái Lan tùy thu c

vào l ng m a và gi ng t mà t l nhi m b nh khác nhau t 10 - 80% (Poonpolgul và

Kumphai, 2007) T ng di n tích tr ng t trên th gi i kho ng 3.729.900 ha v i t ng

ng su t kho ng 20.000.000 t n (FAO, 2003), thán th có th gây t n th t 50% s n

µm (Sharma, 2006) Các gai c ng n m r i rác trên n m màu nâu en có vách ng n,

có t 1 - 5 gai, dài kho ng 250 µm và r ng kho ng 6µm (CABI, 2007) T c pháttri n khu n ty kho ng 7 mm/ngày (Than và ctv., 2008b)

Loài Colletotrichum gloeosporioides: là loài có ph ký ch r ng, trên môi tr ng PDAkhu n l c có màu xám xanh ho c en, kh i bào t màu cam, t c phát tri n c a khu n

ty kho ng 11mm/ngày (Than và ctv, 2008b) Bào t hình thoi h i cong, n bào không

có vách ng n, trong su t ôi khi có màu nâu nh t, kích th c 9-24 x 3-6 µm Trên

n m có nhi u lông c ng, kích th c th ng thay i, chi u dài th ng nh h n 200 µm,

r ng 4 – 8 µm a áp có d ng hình tr ng, hi m có d ng hình chùy, có màu nâu nh t,kích th c 6-20 x 4-12 µm (Brown và ctv., 1996; CABI, 2007)

Loài Colletotrichum acutatum: khu n l c có màu cam, s i n m m ng manh, bào t

hình elip (Peres và ctv., 2005) Kích th c 14 x 3,5µm, t c phát tri n c a khu n tykho ng 5mm/ngày (Than và ctv., 2008b) Ít ho c không có lông c ng, ít hình thành a

áp, có màu nâu nh t, kích th c 6,5 - 11 x 4,5 - 7,5µm (CABI, 2007; Peres và ctv.,2005)

Vòng i c a n m Colletotrichum spp th ng bao g m hai giai n h u tính và vôtính Sinh s n h u tính giúp a dang di truy n trong qu n th n m, sinh s n vô tính có

vai trò trong s phát tán c a n m Có kho ng 11 trong s 20 loài Colletotrichum spp.

có giai o n sinh s n h u tính là Glomerella (Peres và ctv., 2005; Wheeler, 1954 trích

d n t Wharton và Diéguez-Uribeondo, 2004)

N m Colletotrichum sp th ng có gene chuy n t d ng s ng ký sinh b t bu c(biotrophy) sang d ng ho i sinh (necrotrophy) i v i loài Colletotrichum capsici,

n m xâm nhi m vào t bào qua các ngã gian bào c a t bào ký ch , sau ó gia t ng

m t s b nh trong mô và gi t ch t t bào ký ch (Mendgen và Hahn, 2002) Giai o n

u là ký sinh b t bu c, giai o n sau là ho i sinh, th ng giai n ký sinh r t ng n

(Peres và ctv., 2005) Nguyên nhân là do n m Colletotrichum phát tri n gi a vách c a

hai t bào ký ch , trong quá trình phát tri n chúng ti t c t phân h y vách t bào và

nguyên sinh ch t c a ký ch (Ph m V n Kim, 2005) N m Colletotrichum

gloeosporioides có th theo c hai hình th c ký sinh b t bu c và ho i sinh (Maciel và

ctv., 2010) M t s loài Colletotrichum khi xâm nh p vào ký ch th ng trãi qua giai

o n b nh dài vì chúng ký sinh ký ch giai n u d i d ng ký sinh b t bu c

Theo Ph m V n Biên và ctv., (2003), n m Colletotrichum spp phát tri n thích h p

i u ki n 23 – 250C, ch t 450C trong 10 phút

M t s n m Colletotrichum spp t n t i trong t nhiên, m t s t n t i ngoài ng, trên

ký ch ph ho c trên các xác b th c v t… m m b nh có th t n t i trong mô b nhkho ng 10 tháng (Ph m V n Biên và ctv., 2003) Trong m t s tr ng h p (ví d :

C.cocodes) khi g p i u ki n b t l i thì hình thành c u trúc d ng h ch n m l u t n

và s b c phát tr l i khi g p u ki n thích h p

1.1.5 ch xâm nhi m c a n m Colletotrichum spp và c m phát tri n c a

b nh thán th trên t

- ch xâm nhi m c a n m Colletotrichum spp.

M t chu i các ho t ng k ti p nhau trong s xâm nhi m c a n m Colletotrichum

spp u tiên là s m c m m c a bào t , s hình thành a áp, sau khi hình thành a

áp ti p t c m c m m, quá trình này có th x y ra v i m t s loài Colletotrichum spp (Peres và ctv., 2005) Bên c nh ó m t s loài Colletotrichum spp có th ti t ra pectin

lyase, ây là m t nhân t quan tr ng s phát tri n c a m m b nh pH thích h p cho sxâm nhi m và phát tri n c a m m b nh là t 7,5–8 (Agrios, 2005) N m có th duy trì

pH cao t i v trí xâm nhi m b ng cách ti t ammonia (Agrios, 2005; Peres và ctv.,

2005) Theo Peres và ctv (2005) n m Colletotrichum spp xâm nhi m vào t bào qua

hai hình th c bán ký sinh xuyên tr c ti p qua l p t bào và ho i sinh bên d i l p bi u

Bào t (Cn) n y m m hình thành ng m m (Gt) t o a áp (Ap) t o ra túi xâm nhi m(Iv) hình A cách xâm nhi m bán ký sinh a áp t o áp l c hình thành vòi xâmnhi m xuyên qua bi u bì c a t bào ký ch và ph ng to lên t o khoang xâm nhi m v i

s i n m có kích th c l n g i là s i n m s c p (Ph), s i n m này có th nh v và lansang các t bào khác, trong giai o n u c a c a s t ng tác này là ký sinh b t bu c

n m v n gi cho t bào ký ch s ng Ti p theo là giai o n ho i sinh, hình thành các

s i n m th c p (Sh) Các s i n m này xâm nhi m vào các t bào, len vào các ngã gianbào, ti t enzym phân h y vách t bào và gi t ch t t bào ký ch Hình B giai o n ho isinh, sau khi hình thành a áp s i n m phát tri n d i l p bi u bì, th ng không cógiai o n ký sinh, s i n m lây lan qua các mô và i vào bên trong t bào qua các ngãgian bào (Peres và ctv., 2005)

Bán ký sinh – xuyên qua t bào

(Intracellular Hemibiotrophy)

Ho i sinh – trong vách và d i bi u bì (Subcuticular intramural necrotrophy)

Hình 1.2: C ch xâm nhi m c a n m Colletotrichum spp.

(Ngu n: Peres và ctv, 2005)

bào ng

bào

ch t

- c m phát sinh và phát tri n c a b nh thán th

B nh phát tri n trong u ki n nhi t cao, có m cao m không khí t ng cao

t o u ki n thu n l i cho s m c m m c a bào t B nh phát tán nh gió, n c, côntrùng…nh ng ch y u là n c n c ta b nh phát tri n m nh vào tháng 5 – 7 khi tang trong th i k thu ho ch Bón nhi u phân m và m t s cây càng cao t o u

ki n thuân l i cho m m b nh phát tri n (V Tri u Mân, 2007) Ngoài ra trái và h t bnhi m c ng là ngu n phát sinh m m b nh

1.2 Bi n pháp phòng tr

1.2.1 Bi n pháp canh tác

V sinh ng ru ng, luân canh v i các cây tr ng khác (V Tri u Mân, 2007; Than vàctv., 2008) D n s ch tàn d cây tr ng b nh t v tr c, ph i luân canh v i các lo icây tr ng khác h cà t ít nh t hai n m (Ph m V n Biên và ctv., 2003; Agrios, 2005)

X lý h t gi ng trong n c 520C trong 2 gi ho c trong KMnO40,1% t 1–2 gi ( VTri u Mân, 2007) Lo i b trái b b nh, di t s ch c d i trong v n, ru ng ph i thoát

c t t, ch n các gi ng có th i gian thu ho ch ng n, tránh va ch m t o v t th ng,

vi c s d ng gi ng kháng c cho là bi n pháp ít t n kém và cho hi u qu cao nh t(Than và ctv., 2008a) Hi n nay ã phát hi n m t s loài t có kh n ng kháng l i b nhthán th nh ng v n ch a cho hi u qu cao trong vi c h n ch b nh, m t s gi ng nh

Capsicum annuum và Capsicum baccatum cv PBC80 có kh n ng kháng l i b nh thán

th (Kim và Chung, 2004)

1.2.2 Bi n pháp hóa h c

S d ng các lo i thu c tr n m nh Score, Mancozeb (0,2%), Bavistin (0.1%), h n

h p Bordeaux (0,5–1 %), Blitox 50 ho t ch t là ng oxychloride, Daconil, Benomyl(CABI, 2007),… c n k t h p bi n pháp hóa h c v i các bi n pháp khác t ng c ng

hi u qu phòng tr b nh

1.2.3 Bi n pháp sinh h c

Nhi u bi n pháp sinh h c ã c áp d ng trong vi c h n ch b nh thán th trên t

Vi khu n Pseudomonas cepacia B37w có kh n ng c ch s phát tri n c a n m

Colletotrichum truncatum (Karen và ctv., 1994) Vi khu n Pseudomonas fluorescens

có kh n ng ki m soát b nh thán th tr c và sau khi thu ho ch (Agrios, 2005)

Vi khu n Bacillus subtilis c phân l p t vùng r cây t có kh n ng i kháng n m

Colletotrichum capsici gây b nh thán th trên t (Bharathi và ctv., 2004) Bacillus

amyloliquefaciens MET0908 có kh n ng i kháng n m Colletotrichum lagenarium

(Kim và Chung, 2004)

1.3 Phòng tr sinh h c b nh cây tr ng b ng vi khu n vùng r

1.3.1 Khái ni m phòng tr sinh h c

Bi n pháp phòng tr sinh h c b nh cây là i u khi n môi tr ng, cây tr ng và vi sinh

v t i kháng m t cách thích h p, t o nên m t th cân b ng sinh h c c n thi t, giúp

gi m m t s c a m m b nh xu ng d i ng ng gây h i Nh ó b nh cây tr ng ch

xu t hi n m c nh , không gây nh h ng quan tr ng v m t kinh t (Ph m V nKim, 2005)

1.3.2 Khái ni m vi khu n vùng r kích thích t ng tr ng cây tr ng

PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria) là vi khu n nh c vùng r c a cây

tr ng Có kh n ng thúc y s phát tri n c a cây tr ng thông qua làm t ng s h p thudinh d ng và h n ch s phát tri n c a m m b nh c a cây tr ng (Yang và ctv., 2008;Lugtenberg và Kamilova, 2009)

PGPR giúp t ng kh n ng h p thu dinh d ng nh N, P, K, Ca và Na (Han và Lee,2005) PGPR còn có kh n ng ti t ra các phytohormones nh : cytokinin, auxin,gibberellin, idol – acetic acid (IAA)… giúp thúc y s phát tri n tr c ti p c a cây

tr ng Ngoài PGPR còn c nh tranh môi tr ng s ng, dinh d ng, làm gi m m t s

m m b nh b ng cách ti t siderophores, ti t ra các h p ch t nh ch ng n m , HCN…,

ti t ch t kháng sinh ngoài ra PGPR còn có kh n ng kích thích tính kháng b nh l u

d n (ISR) cây tr ng (Han và Lee, 2005; Yang và ctv., 2009)

PGPR ch y u thu c các nhóm vi khu n Pseudomonas, Rhizobium, Bacillus,

Arthrobacter, Azospirillum, Serratia, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia, Enterobacter, Erwinia, Flavobacterium,…(Han và Lee, 2005; Fernado và ctv., 2006;

Tilak và ctv., 2005)

1.3.3 Vai trò c a vi khu n vùng r trong phòng tr sinh h c b nh cây tr ng

Trong môi tr ng t nhiên các vi sinh v t luôn có s c nh tranh v i nhau v oxy, ch tdinh d ng, môi tr ng s ng Trong quá trình phát tri n chúng ti t ra các ch t khángsinh ho c các ch t c tiêu di t k thù, khi môi tr ng thu n l i nhóm vi sinh v t này

phát tri n l n áp nhóm vi sinh v t khác, các quá trình này di n ra liên t c trong t

t n cân b ng sinh h c

PGPR không nh ng giúp t ng kh n ng h p th dinh d ng nh N, P, K, Ca,Na…(Han và Lee, 2005) Các phytohormones nh : cytokinin, auxin, gibberellin,ethylene, idol – acetic acid (IAA)…, kích kháng b nh cây tr ng (ISR) i v i n m

b nh trong t (Soilborn diseases) (Han và Lee, 2005; Yang và ctv., 2009), mà còngiúp phòng tr b nh trên tán lá cây (ariborn diseases) Vai trò c a PGPR c bi t nqua m t s ch t (siderophores, ch t ch ng n m, HCN), ti t các enzym (dehydrogenase,photphatase, nitrogenase,…) Nhi u lòai PGPR ang c phát tri n r ng v i m cích th ng m i nh B subtilis và Bacillus spp (Choudhary và Johri, 2009).

Hi u qu c a vi khu n vùng r trong phòng tr sinh h c

VKVR giúp gi m các b nh do n m Pythium, Rhizoctonia, Phytophthora, Slerotinia,

Fusarium… nh c ch s hình thành h ch n m, tiêu di t s i n m và bào t ngh trongt…(Wei và ctv., 1991; Agios, 2005)

Theo Kim và ctv., (2010) vi khu n Bacillus subtilis CMB32 có kh n ng c ch n m

Colletotrichum gloeosporioides Vi khu n Pseudomonas fluorescens và vi khu n Bacillus subtilis ng d ng trong phòng tr sinh h c n m Colletotrichum sp trên tán lá

cây (Than và ctv., 2008a) ng d ng Pseudomonas putida có tác d ng c ch s i n m

và s hình thành h ch n m Fusarium solani f sp phaseoli …(Wei và ctv., 1991).

Pseudomonas fluorescens BL915 phòng tr n m Rhizoctonia solani (Thomas và

ctv., 1994)

1.4 Vai trò c a vi khu n Pseudomonas spp trong phòng tr sinh h c b nh

cây

1.4.1 c m c a vi khu n Pseudomonas spp.

Pseudomonas spp là vi khu n hình que hi u khí (m t s loài có th s ng y m khí), có

m t ho c nhi u roi c c, ít di ng (Haas và Défago, 2005) M t s loài gây h i cây

tr ng, ng v t và con ng i, s ng trong t, n c ng t và c môi tr ng bi n, m t sloài có l i phát tri n trên môi tr ng nuôi c y có ch a ít s t có kh n ng phát hu nh

quang màu vàng xanh là nhóm vi khu n Pseudomonas fluorescens kích th c kho ng0,5_1 x 1,5_4 µm (Agrios, 2005)

1.4.2 ch c a vi khu n Pseudomonas spp trong c ch m m b nh ti t kháng

sinh và ti t enzyme

Pseudomonas spp có th sinh ra m t s ch t kháng sinh nh phenazines,

phenazine-1-carboxyclic acid, 2,4-diacetyl phloroglucinol, pyoluteorin, pyrrolnitrin (Fernado và

ctv., 2006) Ngoài ra Pseudomonas GRC2 còn ti t ra HCN và m t s ch t kháng sinh (Gupta và ctv., 2001) Theo Gupta và ctv (2006) Pseudomonas aeruginosa i kháng

v i n m Sclerotinia sclerotiorum nh có kh n ng ti t chitinase.

Kích kháng b nh cây tr ng

Theo Ph m V n Kim (2005), trong t bào c a cây thu c gi ng nhi m v i b nh v n cógien ti t các ch t giúp cây tr ng ch ng l i v i m m b nh, tuy nhiên do c tính c a

gi ng là các gien này th ng b c ch nên phát huy tác d ng ch m, cho nên khi b

m m b nh xâm nhi m r i t bào m i b t u ti t ch t kháng, các ch t này c sinh ra

ch m nên không có tác d ng kháng b nh PGPR có kh n ng kích kháng b nh cây

tr ng kháng l i các lo i b nh do n m, vi khu n và c virus…(Liu và ctv., 1995) TheoSiddiqui (2006) PGPR kích thích tính kháng b nh cây tr ng thông qua làm v ng vách

t bào bi u bì hình thành các hàng rào b o v callose, lignin, phenolic, s gia t ng ho ttính c a các enzym nh chitinase, peroxidase, polyphenoloxidase, phenylalanineammonia lyase ho c gia t ng các phytoalexin (Loon và ctv., 1998; Siddiqui, 2006)

Theo Ph m V n Kim (2005), các vi sinh v t trong t luôn có s c nh tranh nhau

v oxy, dinh d ng và không gian s ng Trong quá trình c nh tranh chúng có th

ti t ra các ch t kháng sinh hay ch t c tiêu di t k ch Pseudomonas fluorescens

3551 phân l p t vùng r cây bông v i có kh n ng ti t ra siderophore c ch s phát

tri n c a n m Pythium ultimum (Loper, 1988).

S n sinh phytohormone, c nh m

Theo Akioyoshi và ctv, (1987), P syringae pv savastanoi 1006 c dùng trong s n

xu t ch t kích thích sinh tr ng cytokinin P putida GR12-2 ti t ra IAA giúp kích

thích t ng tr ng cây tr ng (Xie và ctv., 1996)

Vi khu n Pseudomonas stutzeri A1501 có kh n ng c nh m cao (Yan và ctv.,2008)

Ti t enzyme phân gi i

Pseudomonas fluorescens cho hi u qu c ch n m Phytophthora capsici gây b nh

th i r trên tiêu (Piper nigrum L.) nh kh n ng ti t các enzyme nh -1,3-glucanases,

-1,4-glucanases, lipases phân h y vách t bào c a s i n m P capsici (Diby và ctv.,

2005)

1.4.3 M t s ng d ng vi khu n Pseudomonas spp phòng tr b nh cây

S d ng vi khu n Pseudomonas syringae pv lachrymans phòng tr b nh thán th trên

a leo do n m Colletotrichum orbiculare gây ra b ng ph ng pháp x lý h t gi ng

và k t h p gi a x lý h t và i t tr c khi tr ng vi khu n giúp h n ch b nh thôngqua c ch khích kháng ISR, u cho n ng su t cao và thúc y t ng tr ng th c v t(Wei và ctv., 1996) S tích l y các h p ch t phenylalanine ammonia lyase (PAL),peroxidase (PO), polyphenol oxidase (PPO), các enzyme -1,3 glucanase, chitinase

trên cà chua nh s kích ho t c a vi khu n Pseudomonas fluorescens t o ra tính kháng

b nh ch ng l i n m Fusarium oxysporum f sp lycopersici (Ramamoorthy và ctv.,

có kích th c 1,0-1,5µm Vi khu n Bacillus spp có kh n ng ch u nhi t cao, có th

s ng sót trong u ki n môi tr ng kh c nghi t Các dòng vi khu n này có th cphân l p t d ch trích trong t v i n c nóng 800C trong 10 phút (Cook và Baker,1989)

Trong t bào vi khu n Bacillus spp sinh n i bào t có th l u t n r t lâu trong u

ki n môi tr ng b t l i Nh ng bào t này r t b n v ng v i ch t sát trùng ho c u

ki n khô h n (Ph m V n Kim, 2005) Khu n l c có màu ho c không màu, b m tkhu n l c nh n, và c, nhi t thích h p t 25 – 370C, pH 6,8 – 7,2 (D ng V n

i u, 1989)

1.5.2 ch c a vi khu n Bacillus spp trong phòng tr sinh h c b nh cây

Theo Ph m V n Kim (2005), vi khu n Bacillus spp có nhi u trong t giúp làm gi m

s phát tri n c a các m m b nh b ng nhi u c ch

ch tiêu sinh

Vi khu n Bacillus spp ti t ra nhi u enzyme trong quá trình phát tri n, các enzyme này phân h y thành ph n vách t bào c a m m b nh Nh vi khu n Bacillus subtilis AF1

ti t ra chitinase phân h y vách t bào và c ch s phát tri n c a n m Aspergillus

niger trên a petri (Podile và Prakash., 1996) Theo Preben và Jan (1996), vi khu n Bacillus spp có kh n ng ti t các enzyme cellulase, hemicellulase, -1,3-glucanase, -

1,6-glucanase, protease, chitinase phân h y vách t bào c a các n m thu c l p n mnoãn (Oomycetes) và n m m (Basidiomycetes), hình thành các enzyme phân h ythành ph n glucan, chitin và protein nh h ng tính th m c a t bào vi sinh v t và làm

ng kh n ng i kháng c a vi khu n

ch ký sinh

Theo Ph m V n Kim (2005), vi khu n Bacillus sp trong t có th s ng bám trên s i

n m Fusarium oxysporum f.sp cubense ho c s i n m Phytophthora spp ng th i ti t

ra các ch t c ch s phát tri n c a s i n m này

C nh tranh

Các vi sinh v t trong t luôn có s c nh tranh nhau v oxy, dinh d ng và không

gian s ng Nh nuôi c y hai ch ng vi khu n Bacillus subtilis và Acrobacter

aerogenes trong môi tr ng có ch a Mg2+ thì vi khu n Bacillus phát tri n và h p thu

h t Mg2+ nên Acrobacter không phát tri n (Ph m V n Kim, 2005) Vi khu n Bacillus

subtilis YM10-20 có kh n ng ti t siderophore giúp vi khu n h p thu s t h u d ng t t

n làm cho nó phát tri n m nh h n các vi sinh v t khác (Tr n Th Kim ông, 2010)

ch ti t kháng sinh

Vi khu n Bacillus c phát hi n ti t ra nhi u lo i kháng sinh nh oomycin,pyoluteorin, kanosamine và zwittermycin-A (Fernando và ctv., 2006) Cáclipopeptides nh surfactins, iturins và fengycins, polymixins, fusaricidins do vi khu n

Bacillus sp ti t ra có kh n ng i kháng v i các vi khu n và n m gây b nh cây tr ng(Montesinos, 2007; Marc và Philippe, 2008) Iturins là ch t n n s n xu tmycosubtilins, bacillomycins surfactin có tác d ng ch ng l i nhi u lo i n m b nh

Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani và Botrytis cinerea… (Montesinos, 2007).

ch kích kháng b nh cây tr ng

Theo Kloepper và ctv, (2004), các vi khu n thu c chi Bacillus nh B amyloliquefaciens, B subtilis, B pasteurii, B cereus, B pumilus, B mycoides, và B sphaericus có kh n ng kích kháng b nh cây tr ng theo c ch ISR Thí nghi m c

th c hi n trên nhi u lo i cây tr ng nh cà chua, t chuông, d a lê, d a h u, c c i

ng, thu c lá… và cho hi u qu ch ng l i các b nh do n m, vi khu n, virus, tuy ntrùng…các lo i m m b nh nh Xanthomonas campestris pv armoraciae, Pythium

spp., Cucumber mosaic virus (CMV) gây b nh kh m trên d a leo, b nh m c xanh trên thu c là do n m Peronospora tabacina, Phytophthora infestans trên cà chua.

1.5.3 M t s ng d ng vi khu n Bacillus spp phòng tr b nh cây

Bacillus amyloliquefaciens FZB42 có kh n ng ki m soát n m Fusarium oxysporum

nh kh n ng ti t các lipopeptides (Montesinos, 2007)

Vi khu n Bacillus sp L324-92 c ch s phát tri n c a các m m b nh do các n m

Gaeumannomyces graminis var tritici, Rhizoctonia solani AG8, Pythium irregulare

và P ultimum gây b nh th i r lúa mì (Kim và ctv., 1997)

Vi khu n Bacillus subtilis AF1 kích thích kh n ng ti t peroxidase c a cây u ph ng

thông qua c ch khích kháng ISR ch ng l i n m Aspergillus niger và Fusarium udum

(Kloepper và ctv, 2004)

Vi khu n Bacillus mycoides làm gi m b nh m lá do n m Cercospora beticola Sacc

gây ra nh ti t các ch t chitinase, -1,3-glucanase, peroxidase và kích kháng ISR(Bargabus và ctv., 2003)

Theo Asaka và Shoda (1996), Bacillus subtilis RB14 cho hi u qu cao trong vi c phòng tr b nh r do n m Rhizoctonia solani b ng cách s n xu t kháng sinh iturin

A và surfactin

Bacillus subtilis ME488 c ch m m b nh do n m Fusarium oxysporum f sp.

cucumerinum trên h d a b u bí và Phytophthora capsici trên tiêu b ng cách ti t các

ch t kháng sinh nh bacD, bacAB, ituC, ituD, mrsA và mrsM là d n xu t c abacilysin, iturin, và mersacidin t ng ng (Chung và ctv., 2008).

Bacillus subtilis c ch s phát tri n c a n m Phytophthora và Pythium gây b nh

th i r nhi u lo i cây tr ng nh ti t ra các ch t kháng sinh, kích kháng b nh ISR,

ti t các enzyme phân h y vách t bào s i n m và tiêt di t bào t tr ng trong t(Berger và ctv., 1996)

qu n m, không n mòn kim lo i Thu c thu c nhóm c IV LD50 qua mi ng:

>10.000 mg/kg; LD50 qua da: >10.000 mg/kg Thu c ít c v i cá và không c i

v i ong m t

Ph ng th c tác ng và s d ng

Thu c tr n m n i h p có tác d ng b o v và di t tr r t nhi u n m b nh khác nhau.Sau khi c cây h p thu vào, benomyl c phân h y ra thành hai phân t butylcarbamate và methyl-2-benzimidazole carbamate (MBC) Butyl carbamate c b c

i thành ch t c butyl isothiocyanate Trong khi ó MBC là ch t khá b n bên trong

mô cây và chính là ch t di t n m c s d ng nh thu c kh ch t c h t gi ng,phun trên lá và kh c t (Ph m V n Kim, 2007)

Thu c có hi u l c m nh tr n m nang, n m b t toàn và n m m trên ng c c, các

lo i cây n qu , lúa và rau Thu c c ng có hi u qu di t tr ng nh n Thu c c phunlên cây tr c thu ho ch hay nhúng rau qu vào n c thu c tr b nh th i trong b o

qu n (V Tri u Mân, 2007) Benomyl còn c s d ng kh h t gi ng hành tr

b nh do n m Botrytis, x lý c hoa lay n, các lo i hoa h ng b ng c tr b nh th i

c và m m b nh do n m Botrytis và Fusarium spp., tr b nh m en trên lúa mì,

ph n tr ng cho rau qu , ph n tr ng hoa h ng, b nh ph n tr ng cây n qu , nho, dâu

tây, tr b nh th i nh n su hào, b p c i, xà lách, b nh th i và v t en cây c nh Ngoài

ra thu c còn có tác d ng c ch b nh khô v n và b nh o ôn phát tri n Th i giancách ly 17 ngày (Tr n Quang Hùng,1999)

Theo Nguy n Qu c Khánh (2011), khi ánh giá hi u qu c a các lo i thu c tr n mgây b nh thán th trên t trong u ki n in vitro và in vivo cho th y thu c Binhnomyl

50WP th hi n hi u qu cao nh t trong h n ch s phát tri n c a m m b nh

CH NG 2

PH NG TI N VÀ PH NG PHÁP 2.1 PH NG TI N

Ngu n vi khu n: Pseudomonas sp ch ng 159 và Bacillus sp ch ng 80 c cung c p

B môn B o V Th c V t – Khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng – Tr ng i

H c C n Th

Gi ng t: t S ng Vàng Châu Phi c tr ng và ch m sóc t i nhà l i, B môn B o

V Th c V t – Khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng – Tr ng i H c C n

Môi tr ng PDA (Potato dextrose agar) (Shurtleff và Averre,1997)

Công th c môi tr ng PDA:

Bón thúc l n 3: Khi cây 80-85 ngày sau khi c y, b t u thu trái L ng bón: 6 kg Urê,

5 kg Clorua kali, 10-15 kg 16-16-8 + 3 kg Calcium nitrat

c c t i 2 l n/ngày

2.2 PH NG PHÁP

2.2.1 Kh o sát s nh h ng c a các n ng thu c Binhnomyl 50WP lên s

phát tri n c a hai ch ng vi khu n Pseudomonas 159 và Bacillus 80

M c ích: nh m xác nh s nh h ng c a thu c Binhnomyl 50WP lên s phát tri n

Các ng nghi m ch a 10ml môi tr ng King’B ã vô trùng c chu n b tr c và

c gi 600C tránh s ông c Sau ó cho môi tr ng King’B lõng ch a vikhu n vào l c u và vào a petri

- Cách th i kháng

Khoanh gi y th m vô trùng c nhún vào các ng nghi m ch a các n ng thu c

ng ng, sau ó dùng k p t vào a petri ch a môi tr ng King’B ã chu n b

tr c ó

Ch tiêu theo dõi: quan sát s phát tri n c a vi khu n

2.2.2 ánh giá hi u qu c ch c a các n ng Binhnomyl 50WP i v i n m

Colletotrichum sp gây b nh thán th t trong u ki n phòng thí nghi m

M c ích: nh m tìm ra n ng thu c Benomyl hi u qu trong vi c c ch n m

Colletotrichum sp gây b nh thán th trong i u ki n phòng thí nghi m

Thí nghi m c b trí hoàn toàn ng u nhiên v i b n nghi m th c và 5 l n l p l i,nghi m th c g m Benomyl n ng khuy n cáo, 1/2 Benomyl n ng khuy n cáo,1/4 Benomyl n ng khuy n cáo, 1/8 Benomyl n ng khuy n cáo

v Cách ti n hành thí nghi m

Thu c c pha theo n ng khuy n cáo, 1/2 Benomyl, 1/4 Benomyl, 1/8 Benomyl

Thí nghi m c ti n hành trên a Petri ch a môi tr ng PDA t v i hai m xungquanh cách tâm 2,5 cm là hai i m c y hai nghi m th c khác nhau (dùng k p t

khoanh gi y th m vào hai i m), gi a là khoanh khu n ty n m Colletotrichum sp.

ST2 v i bàn kính kho ng 5mm

Ch tiêu theo dõi: bán kính vành kh n vô khu n và hi u su t i kháng

BKKL c: Bán kính khu n l c n m v phía i ch ng

BKKLvk: Bán kính khu n l c n m v phía vi khu n

Các s li u c phân tích th ng kê b ng ph n m m MSTATC qua phép thDUNCAN

2.2.3 ánh giá hi u qu i kháng c a hai ch ng vi khu n vùng r Pseudomonas

159, Basillus 80 và thu c Binhnomyl 50WP i kháng v i n m Colletotrichum sp.

ST2 trong i u ki n phòng thí nghi m

M c ích: Nh m tìm nghi m th c hi u qu cao trong vi c c ch n m Colletotrichum

sp gây b nh thán th trên t trong u ki n phòng thí nghi m

Thí nghi m c b trí hoàn toàn ng u nhiên v i sáu nghi m th c và 5 l n l p l inghi m th c g m Benomyl, ch ng vi khu n 80, ch ng vi khu n 159, h n h p vi khu n

80 + 159, h n h p vi khu n 80 + 159 + 1/2 Benomyl, h n h p vi khu n 80 + 159 + 1/4Benomyl

v Cách ti n hành thí nghi m

Chu n b ngu n n m b nh: N m Colletotrichum sp ST2 là dòng có kh n ng gây h i

cao nh t N m c c y trên a Petri ch a 10 ml môi tr ng PDA kho ng 4 ngày

tr c khi ti n thí nghi m, sau ó dùng cây c vô trùng c thành các khoanh n m có

ng kính 5 mm và t vào a petri ch a 10ml môi tr ng PDA kho ng 4 ngày

600nm, d a vào ng chu n xác nh m t s , t ó th c hi n pha loãng t m t

(3) Thu c Benomyl n ng khuy n cáo

Cách th i kháng: Khoanh gi y th m vô trùng c nhún vào ng nghi m ch a vikhu n, thu c ho c h n h p thu c và vi khu n t ng ng, sau ó dùng nhíp g p gi y

th m t vào a petri ch a môi tr ng PDA v i hai m xung quanh cách tâm 2,5

cm là hai i m c y hai nghi m th c khác nhau, gi a là khoanh khu n ty n m

HS K(%) =

BKKL c - BKKLvk

BKKL c

x 100%

BKKLvk: Bán kính khu n l c n m v phía vi khu n.

Các s li u c phân tích th ng kê b ng ph n m m MSTATC qua phép thDUNCAN

2.2.4 ánh giá hi u qu phòng tr b nh thán th trên t (Colletotrichum sp.)

c a hai ch ng vi khu n vùng r Pseudomonas 159, Basillus 80 và thu c

Binhnomyl 50WP trong i u ki n nhà l i

M c ích: Nh m tìm bi n pháp hi u qu cao trong vi c c ch n m Colletotrichum

sp gây b nh thán th trên t trong u ki n nhà l i

Cách ti n hành thí nghi m: Thí nghi m c th c hi n trong nhà l i, b trí thínghi m hoàn toàn ng u nhiên G m 7 nghi m th c, 5 l n l p l i, m i l p l i 1 ch u và

v i 5 l n phun/trái và m t s 2,5*105bào t /ml (Tr n Th L Trinh, 2011)

Cách x lý vi khu n và thu c Benomyl t ng nghi m th c:

Be: Phun thu c tr n m Benomyl c phun 2NTKCB và 5NSKCB theo li u l ngkhuy n cáo

159: Phun vi khu n Pseudomonas 159 m t s 108 cfu/ml 2NTKCB và 5NSKCB

80: Phun vi khu n Bacillus 80 m t s 108 cfu/ml 2NTKCB và 5NSKCB

1/4Be: Phun thu c tr n m Benomyl v i li u l ng 1/4 so v i khuy n cáo c phun2NTKCB và 5NSKCB theo li u l ng khuy n cáo

HHVK: Phun k t h p Bacillus 80 + Pseudomonas 159 c phun 2NTKCB và5NSKCB

HHVK+1/4Be: Phun k t h p Bacillus 80 + Pseudomonas 159 c phun tr c khi

ch ng b nh 2 ngày + 1/4 l ng Benomyl s d ng c phun 2NTKCB và 5NSKCB.Sau khi ch ng b nh cây c t u ki n nhà l i

v Ch tiêu theo dõi: theo dõi cây m i ngày sau khi ch ng b nh và b t u l y chtiêu khi xu t hi n v t b nh u tiên