Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào. (Khóa luận tốt nghiệp)

B ng 4.1 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 35

B ng 4.2 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu nhân nhanh

ch i cây Keo lai 38

B ng 4.3 K t qu nghiên c u ng c a s k t h p gi n

hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 41

B ng 4.4 K t qu nghiên c u nh ng c a s k t h p gi n

hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 44

B ng 4.5 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 47

B ng 4.6 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 49

B ng 4.7.K t qu nghiên c u ng c a giá th n t l s ng c a cây Keo lai 51

Bi 4.4 ng c a s k t h p gi n hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 45

Bi 4.5 ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 48

Bi 4.6 ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 50

Hình 4.1 nh ng c n kh ch i Keo lai BV32 36Hình 4.2 ng c n kh 39Hình 4.3 K t qu nghiên c u ng c a s k t h p gi a BAP n

hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 42Hình 4.4 K t qu nghiên c u ng c a s k t h p gi n

hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 45Hình 4.5 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 48Hình 4.6 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 50Hình 4.7:K t qu nghiên c u ng c a giá th n t l s ng c a cây Keo lai 52

BAP : Benzylamino purine

IBA : Indol butyric acid

NAA : Naphthyl acetic acid

MS : Murashige & Skoog Medium

PH N 1: M U 1

1.1 1

1.2 M c tiêu nghiên c u 3

1.3 M u 3

1.4 c và th c ti n c tài 3

PH N 2: T NG QUAN TÀI LI U 5

2.1 Ngu n g c c a cây Keo lai gi ng BV32 5

2.1.1 Lai gi ng nhân t o 5

2.1.2 Dòng Keo lai BV32 5

2.2 Tình hình nghiên c u v c 7

2.2.1 Tình hình nghiên c u trên th gi i 7

2.2.2 Tình hình nghiên c c 8

2.3 Khái ni m nuôi c y mô t bào th c v t 9

khoa h c c a nhân gi ng b ng nuôi c y mô t bào th c v t 9

2.4 a t bào th c v t 9

2.4.2 S phân hóa và ph n phân hóa c a t bào th c v t 10

n chính trong nuôi c y mô t bào th c v t 11

n chu n b 11

n kh trùng m u, c y kh ng 11

n t o ch i và nhân nhanh ch i 12

n t o cây mô hoàn ch nh 12

n chuy 12

2.6 Các y u t ng t i k t qu nuôi c y mô t bào 13

u ki n vô trùng 13

2.6.2 V t li u nuôi c y 14

ng nuôi c y 15

2.7 Nh ng v trong nhân gi ng in vitro 26

2.7.1 Tính b nh v m t di truy n 26

27

27

28

PH N 3: NG, N U 29

ng (v t li u) 29

m và th i gian nghiên c u 29

m nghiên c u 29

3.2.2 Th i gian nghiên c u 29

3.3 N i dung nghiên c u 29

3.3.1 N i dung 1: Nghiên c u ng c a m t s ch u ti ng n kh i cây Keo lai 29

3.3.2 N i dung 2: Nghiên c u ng c a m t s ch u ti ng n kh c a cây Keo lai 29

3.3.3 N i dung 3: Nghiên c u ng c a m t s giá th n t l s ng c a cây Keo lai 30

u 30

3 u ki n thí nghi m 30

u n i dung 1: Nghiên c u ng c a m t s ch u ti n kh nhanh ch i cây Keo lai 30

u n i dung 2: Nghiên c u ng c a m t s ch u ti n kh c a cây Keo lai 32

u n i dung 3: Nghiên c u ng c a m t s giá th n t l s ng c a cây Keo lai 33

4.1 K t qu nghiên c u ng c a m t s ch u ti n hi u

qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 35

4.1.1 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 35

4.1.2 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai (Acacia hybrids) 38

4.1.3 K t qu nghiên c u ng c a s k t h p gi a BAP v n hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 40

4.1.4 K t qu nghiên c u ng c a s k t h p gi n hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai 43

4.2 K t qu nghiên c u ng c a m t s ch u ti n hi u qu ra r ch i cây Keo lai .46

4.2.1 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai .46

4.2.2 K t qu nghiên c u ng c n hi u qu ra r ch i cây Keo lai 49

4.3 Nghiên c u ng c a giá th n t l s ng c a cây Keo lai nuôi c y mô .51

PH N 5: K T LU N VÀ KI N NGH 53

5.1 K t lu n 53

5.2 Ki n ngh 53

TÀI LI U THAM KH O 1

PH L C 4

Acacia mangium) và Keo lá tràm (Acacia auriculiformis) ( h Kh , 1999)

và cs, 1997)

b o v

Kh , 1999) là khó gây cháy r ng vì thân Keo lai có

c nhi i r ng Keo ít có th c bì, cây Keo l i ít lá

tr ng lâm nghi p, không ch rút ng n chu k kinh doanh, tr ng r ng, mang l i

hi u qu kinh t u khá cao mà còn góp ph n cân b ng, làm phong phú

, , nên Keo là m t trong các

g

và

cs, 2011)

Nghiên c u ng c a m t s ch n kh

i cây Keo lai

ch i cây Keo lai

Nghiên c u ng c a m t s giá th n t l s ng c a cây Keo lai

c:

+ Giúp sinh viên c ng c và h th ng l i ki n th c

+ Giúp sinh viên rèn luy n k c t p nghiên c u khoa h c

và phân tích s li u, cách trình bày m t bài báo khoa h c

và ch ng cây Keo m i

c ti n:

làm gi m chi phí giá t, ch ng nhu c u

c p gi ng Keo m i ra th ng

là cách t t nh t o ra các gi ng lai mong mu n.

2.1.2 Dòng Keo lai BV32

Keo lai BV32 Acacia hybrids là

Acacia mangium) và Keo lá tràm (Acacia auriculiformis) ( , 2006)

y cao ( và cs, 1997)

Thông tin v dòng Keo lai BV32:

- Tên loài: Keo lai nhân t o

- Tên la tinh: Acacia mangium × Acacia auriculiformis

-.-

(1996), nhóm

v 20,1% v i gian 2, 4, 6, 8, 10, 12 phút trong tháng 2, 5, 8,

10 và 12 cho th y trong 8 - 10 phút cho k t a ch

(0,05 ppm) và môi tr ch

n kh nriêng bi ppm) cho t cao (80-92) i

và cs, 2005)

và cs, 2005)

Hùng, 2009)

và

CO2

quan tr

và cs, 2008)

5 mg/l GA3

và cs, 2011)

in vitro

)

- 10 ngày Hùng, 2009)

Trong toàn quá tr in vitro

Có h

.-

-.-

B2 (Ribofravin), B5 (Axit panthotenic); B3 (Axit nicotinic), B6 (Piridoxin)

và cs, 2005);

Các Amino acid và Amit

hình thái Các Amino

acid); 2,4 D (2,4-Dicloro phenoxy axetic acid) và IBA (Indol butyric acid)

- Cytokinin: Là nhóm Pytohocmon

1963

Cytokinin

Auxin/Cytokinin trong môi tr nh s phân hoá c

- p

m vi 5,5-6,0 pH < 5,5 làm cho A

- các - 18h/ngày -

0% nên ta

Thanh và cs, 2005)

in vitro

in vitro Nguyên nhân là do cây in vitro

dàng

nhiên,

Ch i Keo lai BV32 c a phòng thí nghi m B môn Công ngh t bào - Vi n Khoa h c s s ng i h c Nông Lâm Thái Nguyên.

nhanh ch i cây Keo lai

- Nghiên c u ng c a s k t h p gi a (BAP ho c Kinetin) và

- Nghiên c u ng c a s k t h p gi a (BAP ho c Kinetin) và

3.3.3 N i dung 3: Nghiên c u ng c a m t s giá th n t l s ng

c a cây Keo lai (Acacia hybrids)

Th i gian theo dõi: trong 30 ngày

Cách ti n hành: Ch i nuôi c c ch n t các bình gi ng nhân nhanh phát tri n t t, không b nhi m C t l n thân kho ng 0,5cm c y vào môi

ng thí nghi m nhân nhanh

Thí nghi m nhân nhanh s d ng n n là MS* ng

i v thành ph n và n các ch t khoáng, Vitamin) + Saccharose 30g/l + Agar 6,5g/l + Myo inositol 0,1 g/l pH= 5,6- 5,8 Kí hi u là A

Th i gian theo dõi: trong 30 ngày

Cách ti n hành: Ch c nghi n c n nhân nhanh

ng, chi u dài 3 4 cm, có 4 c l a ch n c y

S d ng n n 1/2MS* + Sacharose 30 g/l + Agar 6,5 g/l + Myo inositol 0,1 g/l pH = 5,6 5,8 Kí hi u B

theo công th c thí nghi m

Các thí nghi m ti n hành:

Thí nghi m 5: Nghiên c u ng c n kh ch i cây Keo lai.

CT1: B + IBA 0,0 mg/l

CT2: B + IBA 0,2 mg/l

CT3: B + IBA 0,5 mg/l

CT4: B + IBA 0,8 mg/l

CT5: B + IBA 1,0 mg/l

Thí nghi m 6: Nghiên c u ng c n kh ch i cây Keo lai.

Chi u cao TB c a ch i (cm) =

u cao ch i

m

S r TB/ch i (r ) =

i ra r-Màu s c: Màu tr ng, màu vàng, màu tr c, mà

cây thí nghi mCác s li u thu th c th ng kê và x áp th ng kê toán h c b ng ph n m m Microsoft office Excel 2010 và ph n m m IRRISTAT 4.0

BAP là ch ng thu c

s d ng trong nuôi c y in vitro. c s d ng trong các nghiên c u t o

c m ch i n nhân nhanh Ch i thí nghi c c

ng nhân nhanh b sung BAP v i các n

hi n trong b ng 4.1.1

Công

th c

N BAP (mg/l)

T ng s

m u cây (m u)

Chi u cao

TB ch i (cm)

l n Các công th c thí nghi m có b sung BAP t CT2-CT3 h s nhân l n

t là: 4,81-4,89 l n, chi u cao ch i 1,12- ng lên CT4 (1,5 mg BAP/l) thì h s nhân ch t giá tr cao nh t là 5,91 l n, v i

Quan sát ta th y, khi b ng 1,5 mg/l ch i sinh

ng và phát tri n t t, thân ch i m p, lá xanh và hình thái cây kh

không b sung BAP

ch i Keo lai BV32

lai (sau 30 ngày)

Qua b ng s li u ta th y, n u ti p t ng BAP lên 2,0 mg/l (CT5) thì h s nhân ch i gi ng th i các ch tiêu theo dõi khác

Thí nghi m nghiên c u ng c n kh

nhanh c a cây Keo lai, m u thí nghi ng có hàm

ng Kinetin khác nhau và sau 30 ngày theo dõi, k t qu c th hi n b

Công

th c

N Kinetin (mg/l)

T ng s

m u cây (m u)

Chi u cao

TB ch i (cm)

Keo lai

i tác d ng riêng r c a BAP và Kinetin thì công th c cho hi u qu nhân nhanh t t nh t v i dòng Keo lai BV32 là BAP 1,5 mg/l Qua nghiên c u cho th y vi c s d ng BAP cho

hi u qu nhân nhanh t t, cây m p, kh e, lá xanh và phát tri n t t Vì v y, so

v i Kinetin, BAP thích h

hi u qu nhân nhanh ch i cây Keo lai (Acacia hybrids)

c a ch i trong nuôi c y mô t bào T l gi a Auxin/Cytokinin có ng

rõ r n s phát sinh hình thái c a m u thí nghi m Vì v y, vi c b sung

NAA, m i lo i cây s d ng v ng khác nhau (

N IBA (mg/l)

T ng s

m u cây (m u)

Chi u cao

TB ch i (cm)

H s nhân

ch ng H s nhân ch i gi m so v i công th c BAP t t nh t, tuy nhiên chi u cao

ch i l c c i thi n V m t hình thái, khi s d ng k t h p BAP, IBA làm cho

th i ch i xu t hi n lá th m m cây m c t h

IBA lên 0,3-0,4 mg/l các ch u gi m

ng có b sung IBA 0,2 mg/l vào công th c BAP t t

CT3: BAP+ IBA 0,2mg/l mg/l

T n BAP 1,5 mg/l, ti n hành nghiên c u ng c a BAP

k t h p v n hi u qu nhân nhanh ch i Keo lai BV32 Qua theo dõi

m u trong 30 ngày, k t qu và s li c trình bày trong b i

T ng s

m u cây (m u)

Chi u cao

TB ch i (cm)

H s nhân

nh t công th c 2 (IAA 0,1 mg/l) tuy nhiên v n th i công th c

t t nh t c a BAP t 5,91-3,83 l n, v i giá tr t 0,19 sai khác có ý

i ch ng Chi u cao ch t CT3 (IAA 0,2 mg/l)

t 1,82 cm, công th t 1,07 cm tuy nhiên ch tiêu chi u dài ch i

ng IAA lên 0,4 mg/l thì t t c các ch u gi m

N

BAP+ IAA 0,0mg/l CT2: BAP+ IAA 0,1mg/l

Keo lai BV32 là CT2 (0,1 mg/l) Qua k t qu nghiên c u và phân tích t

cây con hoàn ch nh Ch i Keo lai d ra r ng nuôi c y in vitro

tuy nhiên ch ng r m b o Vì v y, vi c nghiên c u b sung Auxin là r t c n thi t IBA là ch t kích thích ra r ng s d ng trong nuôi

c y mô t bào th c v tài th c hi n nghiên c u ng c a IBA các n khác nhau Sau 30 ngày theo dõi, k t qu c trình bày b ng

Công

th c

N IBA (mg/l)

T ng s

m u cây (m u)

T l ra r (%)

S r TB/cây(r )

Màu s c r

Keo lai

ch i và chuy ng có b sung NAA Sau 30 ngày nuôi c y K t

qu các ch tiêu theo dõi là t l ch i ra r , s r trung bình trên m u và ch t

T ng s

m u cây (m u)

T l ra r (%)

S r TB/cây(r )

M u s c r

r i v i dòng Keo lai BV32 Qua b ng ta th y, m tin c y 95% công

th c NAA cho k t qu t t nh t là CT5 (1,0 mg/l) v i các ch tiêu l t

i ch ng là: T l ra r 94,44%-87,04%; s r TB/cây 4,86%-1,93%

So sánh giá tr trung bình gi a các công th c thí nghi m v i ch ng thông qua giá tr LSD 5% cho th y t l ra r s d ng NAA v ng

i tác d ng riêng r c a hai lo i Auxin NAA, IBA thì công th c cho hi u qu ra r t t nh t là IBA 1,0 mg/l Qua quan sát ta th y vi c s d ng IBA cho hi u qu ra r i t t, r

kh e, cây phát tri n t i v i dòng Keo lai K t qu này phù h p v i k t

T l s ng (%)

Chi u cao TB cây(cm)

sau 4 tu n tr ng, t l s ng c t t t

ng và phát kém t t Trên giá th t t ng B + 20%

tr u hun +10% mùn h n t t nh t, t l s t 93,33% sau 30 ngày theo dõi

K t qu này có th gi ong thành ph n than tr t t ng

Qua k t qu tài rút ra k t lu

- V ng n n là: MS* + 30 g/l Saccharose+ 6,5 g/l Agar + 0,1 g/l Myo inositol thì n b sung BAP phù h p cho nhân nhanh ch i Keo lai là 1,5 mg/l BAP Vi c k t h p BAP v i IBA, IAA làm gi m h s nhân

ch i

- V ng n n ra r là: 1/2MS* + 30 g/l Saccharose + 6,5 g/l Agar + 0,1 g/l Myo inositol thì n b sung IBA t t nh t cho ra r là 1,0 mg/l IBA

- Giá th s ng g t t ng B + 20% tr u hun +10% mùn h u

ti p t c nghiên c u các giá th khác

5.2

C n ti n hành nghiên c u thêm v ng nhân ch i và ra r thích

h p nh t cho dòng Keo lai BV32, th nghi m v i các Cytokinin, Auxin khác

ng thích h p nh t

3 Hùng (2009),

Thái Nguyên

4 Kh (1999), Ngiên c u s d ng gi ng lai t nhiên gi a Keo tai

ng và Keo lá tràm Vi t Nam, Nxb Nông Nghi p.

5 Kh (2006), Lai gi ng cây r ng, Nxb Nông Nghi p, Hà N i.

6 Kh ng Hùng (2003), Gi ng cây r ng, Nxb Nông

Nghi p

7 Kh , Nguy i, H Quang Vinh (1997), K t qu m i v

kh o nghi m gi ng lai t nhiên gi ng và Keo lá tràm, T p

19 Sharma J.K (1994), Patbological investigations in Forest Nurseries and plantations in Vietnam, Report of Food and Agriculture organization of the United Nations, FAO VIE/92,022: Hanoi.

the technology, Exegetics Ltd., Edington, Wilts., BA13 4QG, England.

22 Trigiano R.N, Gray.D.J (1999), Plant Tissueculture Concepts and Laboratory Exercises, CRC press, Bocaration, Florida, USA.

23 Nissen S.J, Sutter.E.G (1990), Sability of IAA and IBA nutrient medium

to several tissue culture procedures, Hortsciense.

24 Bhojwani S.S, M.K Razdan (1983), Plant tissue culture: Theory and Practice, Amsterdam, Oxford, New York, Tokyo.