Nghiên cứu phân lập các hợp chất Flavônit từ cây Đề (Ficus Religiosa L.)

KHÓALUẬNTỐTNGHIỆPĐẠIHỌC Chuyênngành:Hóahữu cơ HÀ NỘI–2010... KHÓALUẬNTỐTNGHIỆPĐẠIHỌC Chuyênngành:Hóahữucơ NgườihướngdẫnkhoahọcPGS .TS.PHANVĂNKIỆM HÀ NỘI–2010... Tôixincamđoan: Đâylàcôngt

KHÓALUẬNTỐTNGHIỆPĐẠIHỌC

Chuyênngành:Hóahữu cơ

HÀ NỘI–2010

Khóaluậntốtnghiệp NguyễnQuangHợp

2

KHÓALUẬNTỐTNGHIỆPĐẠIHỌC

Chuyênngành:Hóahữucơ

NgườihướngdẫnkhoahọcPGS TS.PHANVĂNKIỆM

HÀ NỘI–2010

Khóaluậntốtnghiệp NguyễnQuangHợp

LỜICẢMƠN

KhoáluậntốtnghiệpnàyđượchoànthànhtạiPhòngHóahữucơViệnHoáhọccácHợpchấtThiênnhiên,ViệnKhoahọcvàCôngnghệViệtNam

Vớilòngbiếtơnsâusắc,emxinbàytỏlòngbiếtơntớiGS.TS.ChâuVănM i n h

v à c á c anhchịphòngHóahữuc ơ ,ViệnH ó a họcc á c

HợpchấtThiênnhiên-ViệnKhoahọcvàCôngnghệViệtNamđãtạomọiđiềukiệngiúpđỡ emtrongthờigianlàmkhóaluậntốtnghiệp

Emx i n đượcbàyt ỏ lòngbiếtơ n chânthànhv à s â u s ắ c tớit h ầ y giáoPGS.TS PhanVănKiệm- ViệnHoáhọccácHợpchấtThiênnhiên,ViệnKhoa

họcvàCôngnghệViệtNam,ngườiđãtậntìnhhướngdẫnemtrongsuốtquátrìnhthựchiệnvàhoànthànhkhoáluậntốtnghiệpnày

Emx i n b à y tỏlòngbiếtơ n tớiLãnhđạoViệnHóahọcc á c HợpchấtThiênnhiênđãtạođiềukiệnchoemđượchọctậpvàsửdụngcácthiếtbịtiêntiếncủaViệnđểhoànthànhtốtcácmụctiêuđềracủakhóaluậntốtnghiệp

EmxincảmơnthầygiáoTrưởngkhoaTS.NguyễnVănBằngvàcùngtoànthểcá

cthầycôgiáotrongkhoaHoáhọc,cácthầycôgiáotrongTrườngĐạihọcSưphạmHàNội2đãtruyềnđạtnhữngkiếnthứcquýbáuchoe mtrongsuốtquátrìnhhọctậptạitrường

HàNội,ngày09tháng05năm2010Sinhvi

ên

NguyễnQuangHợp

Khóaluậntốtnghiệp NguyễnQuangHợp

Tôixincamđoan:

Đâylàcôngtrìnhnghiêncứucủariêngtôi

Cácsốliệuvàkếtquảđượcnêutrongluậnvănlàhoàntoàntrungthựcv à chưađượcaicôngbốtrongbấtkỳcôngtrìnhnàokhác

HàNội,ngày09tháng05năm2010Sinhviên

NguyễnQuangHợp

thiệuchung 13

hợpchất 282.2.1. Sắcmỏng(TLC) ký lớp

2.6 Chiếthợpchất phân đoạn và phân lập các

30

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO 31

H-1HCOSY 1H-1HChemicalShift

CorrelationSpectroscopy2D-NMR

PhổcộnghưởngtừhạtnhânhaichiềuTwo-DimensionalNMR

CC SắckýcộtColumnChromatography

DEPT

DistortionlessEnhancementbyPolarisationTransferEI-MS

PhổkhốilượngvachạmelectronElectronImpactMassSpectrometryFAB-MS

PhổkhốilượngbắnphánguyêntửnhanhFastAtomBombardmentMassSpectrometry

HMBC

HeteronuclearMultipleBondConnectivityHMQC

HeteronuclearMultipleQuantumCoherenceHR-FAB-MS

SpectrometryIR

NhưchúngtađãbiếtViệtNamnằmtrongkhuvựcnhiệtđớicókhíhậunóngẩm,độẩmcaotrên80%,lượngmưalớn,nhiệtđộtrungbìnhkhoảng15đến270C.Đólàđiềukiệnrấtthíchhợpchothựcvậtpháttriển.DovậyhệthựcvậtViệtNamvôcùngphongphú,đadạngvớikhoảng12000loài,trongđ ó cótới4000loàiđượcnhândântadùnglàmthảodược[2].Điềunàythựcs ự cóýnghĩa

tolớnchosựpháttriểncủangànhytế,ngànhhoáhọcvàmộtsốngànhkhác.Hệthựcvậtphongphútrênđượccoinhưlàtiềnđềchosựpháttriểnngànhhóahọccáchợpchấtthiênnhiênởnướcta

Theotàiliệu[8]côngbốhiệnn a y c ó

khoảng60%-70%cácloạithuốcchữabệnhđangđượclưuhànhhoặcđangtronggiaiđoạnthửnghiệm

l â m sàngcónguồngốctừcáchợpchấtthiênnhiên

Vớisựpháthiệnranhiềuchấtcóhoạttínhsinhhọccógiátrịtừthiênnhiên,cácnhàkhoahọcđãcónhữngđónggópđángkểtrongviệctạoracácloạithuốcđiềutrịnhữngbệnhnhiệtđớivàbệnhhiểmnghèonhư:penicillin(1941);artemisinin(nhữngnăm1970); đểkéodàituổithọvànângcaochấtlượngcuộcsốngcủaconngười.Thiênnhiênkhôngchỉlànguồnnguyênliệucungcấpcáchoạtchấtquýhiếmđểtạoracácbiệtdượcmàcòncungcấpcácchấtdẫnđườngđểtổnghợpracácloạithuốcmới.Từnhữngtiềnchấtđượcphânlậptừthiênnhiên,cácnhàkhoahọcđãchuyểnhóachúngthànhnhữnghoạtchấtcókhảnăngtrịbệnhrấtcao

CâyĐề(FicusreligiosaL.),thuộchọDâutằm(Moraceae)làmộtloạicâyđãđ

ượcsửdụngtừlâutrongdângianlàmthuốcchữabệnh,nhưvỏ,thânc â y đượcsửdụnglàm

thuốcchữasâurăng,làmchắcrăng;ỞẤnĐộcâyđượcdùngđểchữabệnhlậu;ởViệtNamcâydùngchữalởloétngoàida,trịghẻ Tuynhiênchotớinaychưacómộtnghiêncứuchínhthứcnàovềhóathựcvậtc ủ a cây

Xuấtphátt ừýnghĩathựctiễntrênnêntôiđã chọnđ ề tàichokhoáluậntốtnghiệplà:

“NghiêncứuphânlậpcáchợpchấtflavonoittừcâyFicusreligiosaL.”.

LuậnvănnàytậptrungnghiêncứuthànhphầnflavonoittừlácâyĐềbaogồmnhữngnộidungchínhlà:

1 Thumẫul á c â y Đề(FicusreligiosaL.),x ử l ý mẫuv à t ạ o dịchchiếtmetanol.

2 Táchchiếtcáchợp chấtflavonoit

3 Xácđịnhcấutrúchóahọccủacáchợpchấtđãtáchchiếtđược

CHƯƠNG1:TỔNGQUAN1.1 Đặcđiểm,tínhvịvàcôngdụngcủacâyĐề.

Ởnướct a Đềđượctrồngl à m c â y b ó n g mát,c â y c ả n h quanhĐền,chùa,đình, miếu, trên đườnglàng,đườngphốvàcôngviên [9]

1.1.3 Thànhphầnhoáhọc.

TheoVõVănChi[4],vỏcâycóchứa4%tanin.Mủchứanhựa,trongmủđôngkhôcó85%nhựavà12%caosu.Theotracứucủachúngtôi,trướcđ â y chưacócôngtrìn

hnàonghiêncứuchitiếtvềthànhphầnhóahọccủacâyĐề–FicusreligiosaL.

1.1.4 Côngdụng.

Nướcsắctừvỏđượcdùngchữatrịmộtsốbệnhngoàida(ghẻ,ngứa).TạiẤnĐộ,ngườitađãdùngvỏhãmlấynướcuốnglàmthuốcchữabệnhtiểuđường,làmthuốccầmmáu,chữabệnhlậuhoặcbôingoàiđểchữamụnnhọthoặcmộtsốbệnhngoàida.Lávàchồinonđượcdùngđểgiảiđộchoặccầmmáuởnhữngvếtthươngdođộngvậtgâynên.Đồngthờicònđượcdùngchữabệnhlậuvàkíchthíchtìnhdục,làmthuốcxổ,chữahoramáuvàcácđườngròr ỉ ở mụnnhọt.Lớpsáptừlátươiđượcdùngchữađaubụng,bệnhtảvàtiêuchảy

Đồngb à o mộtsốđịaphươngnướct a đãdùngtuar ễ khísinhl à m thuốclợitiểuvàchữabệnhcổtrướng

Sợitáchratừvỏcâyđượcdùnglàmgiấy

“Quả”vàchồibúpcóthểănđược,mặcdùkhôngcómùivịgì.Ngườit a còndùng“quả”vàchồinontừcâyĐềđểlàmthuốcxổ,giảinhiệtvàthuốcl à m thayđổisựdinhdưỡng

Nhựa,mủđượcdùngđểbẫychim

VỏchứaTaninđượcdùngđểnhuộmvải

Gỗcóchấtlượngthấp,màutrắngxám,thườngchỉdùnglàmbaobì,l à m diêm,làmcủihay thanđốt [9]

1.2 Lớpchấtflavonoit, thành phầnhoáhọccótrongcâyĐề.

1.2.1 Giớithiệuchung[1,3,6,7,11]

Cácflavonoitlàlớpchấtphổbiếncótrongthựcvật

Hình1.4:Flavan(2-phenylchromen) 1.2.2 Cácnhómflavonoit[1,3,6,7,11]

OR O

OR O

RO

OH O

Hình1.8:Flavanonol-3

1.2.2.4 Chalcon:Chalconcóthểb ị đồngphânhoáthànhflavononkhiđunnóngvớia

xitclohydric(HCl)

OR OH

Hình1.14:(–)Catechin

O O

H

O

H O

Hình1.17:Rotenoit

1.3 Cácphươngphápchiếtmẫuthựcvật.

Saukhitiếnhànhthuháivàlàmkhômẫu,tuỳthuộcvàođốitượngchấtcótrongmẫukhácnhau(chấtphâncực,chấtkhôngphâncực,chấtcóđộphâncựctrungbình )màtachọndungmôivàhệdungmôikhácnhau

1.3.1 Chọndungmôichiết.

Thườngthìc á c chấtchuyểnhoáthức ấ p trongc â y c ó đ ộ phâncựckhácnhau.Tuynhiênnhữngthànhphầntantrongnướcítkhiđượcquantâm.Dungmôidùngtrongquátrìnhchiếtcầnphảiđượclựachọnrấtcẩnthận

Điềukiệncủadungmôilàphảihoàtanđượcnhữngchấtchuyểnhoát h ứ cấpđangnghiêncứu,dễdàngđượcloạibỏ,cótínhtrơ(khôngphảnứngvớichấtnghiêncứu),khôngđộc,khôngdễbốccháy.

Nhữngdungmôinàynênđượcchưngcấtđểthuđượcdạngsạchtrướckhisửdụng.Nếuchúngcólẫncácchấtkhácthìcóthểảnhhưởngđếnhiệuquảvàchấtlượngcủaquátrìnhchiết.Thườngcómộtsốchấtdẻolẫntrongdungmôinhưcácdiankylphtalat,tri-n-butyl-

axetylcitrarvàtributylphosphat.Nhữngchấtnàycóthểlẫnvớidungmôitrongquátrìnhsảnxuấthoặctrongkhâubảoquảnnhư

trongcácthùngchứahoặccácnútđậybằngnhựa

Methanolvàchloroformthườngchứadioctylphtalat[di-(2-

etylhexyl)phtalathoặcbis-2-etylhexyl-phtalat].C h ấ t n à y s ẽ làms a i lệchkếtquảphânlậptrongcácquátrìnhnghiêncứuhoáthựcvật,thểhiệnhoạttínhtrongthửnghiệmsinhhọcvàcóthểlàmbẩndịchchiếtcủacây.Chloroform,metylencloritv à methanollànhữngdungmôithườngđượclựachọntrongquátrìnhchiếtsơbộmộtphầncủacâynhư:lá,thân,rễ,củ,quả,hoa

Nhữngtạpchấtc ủ a chloroformn h ư C H 2Cl2,CH2ClBrc ó thểphảnứngvớimộtvàihợpchấtnhưcácancaloittạomuốibậc4vànhữngsảnphẩmkhác.Tươngtựnhưvậy,sựcómặtcủalượngnhỏaxitclohiđric(HCl)cũngcóthểgâyrasựphânhuỷ,sựkhửnướchaysựđồngphânhoávớicáchợpchấtkhác Chloroformcóthểgâytổnthươngchoganvàthậnnênkhilàmviệcvớichấtnàycầnđượcthaotáckhéoléo,cẩnthậnởnơithoángvàphảiđeomặtnạphòngđộc

Metylencloritítđộchơnvàdễbayhơihơnchloroform

Methanolvàetanol80%lànhữngdungmôiphâncựchơncáchiđrocacbonthếclo.Ngườit a chorằngc á c dungmôithuộcnhómrượusẽt hấ m tốthơnlênmàngtếbàonênquátrìnhchiếtvớicácdungmôinàysẽthuđượclượnglớncácthànhphầntrongtếbào.Tráilại,khảnăngphâncựccủachloroformthấphơn,nócóthểrửagiảicácchấtnằ

mngoàitếbào.Cácancolhoàtanphầnlớncácchấtchuyểnhoáphâncựccùngvớicáchợpchấtphân

Tuynhiêncũngc ó m ộ t v à i sảnphẩmmớiđượctạothànhkhidùngmethanoltrongsuốtquátrìnhchiết[5].Thíd ụtrechlonolideAthuđượctừTrechonaetesaciniatađượcchuyểnthànhtrechonolideBbằngquátrìnhphânhu ỷ1-

hydroxytropacocaincũngxảyrakhierythroxylumnovogranatenseđượcchiếttrongmethanolnóng

Ngườitathườngítsửdụngnướcđểthuđượcdịchchiếtthôtừcâymàthayvàođólàdùngdungdịchnướccủamethanol

Đietyletehiếmkhiđượcdùngchocácquátrìnhchiếtthựcvậtvìnórấtd ễ b a

y h ơ i , bốcc h á y v à rấtđộc,đồngthờinóc ó x u hướngtạothànhperoxitdễnổ,peroxitcủadietyletedễgâyphảnứngoxihoávớinhữnghợpchấtkhôngcókhảnăngtạocholesterolnhưcáccarotenoit.Tiếpđếnlàaxetoncũngcóthểtạothànhaxetonitnếu1,2-cis-

diolcómặttrongmôitrườngaxit.Quátrìnhchiếtdướiđiềukiệnaxithoặcbazơthườngđượcdùngvớiquátrìnhphântáchđặctrưng,cũngcókhixửlýcácdịchchiếtbằngaxit-bazơcóthểtạothànhnhữngsảnphẩmmongmuốn

Sựhiểubiếtvềnhữngđặctínhcủanhữngchấtc h u y ể n hoát h ứ cấptrongcâyđượcchiếtsẽrấtquantrọngđểtừđólựachọndungmôithíchhợpchoquátrìnhchiếttránhđượcsựphânhuỷchấtbởidungmôivàquátrìnhtạothànhchấtmongmuốn

Saukhichiếtdungmôiđượccấtrabằngmáyc ấ t quayở nhiệtđộkhôngquá30-400C,vớimộtvàihoáchấtchịunhiệtcóthểthựchiệnởnhiệtđộcaohơn

1.3.2 Quátrình chiết.

Hầuhếtquátrìnhchiếtđơngiảnđượcphânloạinhư sau:

- Chiếtngâm

- ChiếtsửdụngmộtloạithiếtbịlàbìnhchiếtXoclet.

- Chiếtlôicuốntheohơinước

Chiếtngâml à mộttrongnhữngphươngphápđượcs ử dụngrộngrãinhấttrongquátrìnhchiếtthựcvậtbởinókhôngđòihỏinhiềucôngsứcv à thờigian.Thiếtbịsửdụnglàmộtbìnhthuỷtinhvớimộtcáikhoáởdướiđáyđ ể điềuchỉnhtốcđộchảythíchhợpchoquátrìnhtáchrửadungmôi.Dungmôicóthểnónghoặclạnhnhưngnóngsẽđạthiệuquảchiếtcaohơn.Trướcđây,máychiếtngâmđòihỏiphảilàmbằngkimloạinhưnghiệnnaycóthểdùngbìnhthuỷtinh

Thôngthườngquátrìnhchiếtngâmkhôngđượcsửdụngnhưphươngphápchiếtliêntụcbởimẫuđượcngâmvớidungmôitrongmáychiếtkhoảng2 4 giờrồichấtchiếtđượclấyra.Thôngthườngquátrìnhchiếtmộtmẫuchỉthựchiệnqua3lầndungmôivìkhiđócặnchiếtsẽkhôngcònchứanhữngchấtgiátrịnữa.Sựkếtthúcquátrìnhchiếtđượcxácđịnhbằngmộtvàicáchkhácnhau

Vídụ:

- Khichiếtcácancaloit,tacóthểkiểmtrasựxuấthiệncủahợpchấtnàybằngs ự tạothànhkếttủavớinhữngtácnhânđặctrưngnhưtácnhân:Đragendroffv à tácnhânMayer

- Cácflavoloitthườnglànhữnghợpchấtmàu,vìvậykhidịchchiếtchảyramàkhôngcómàusẽđánhdấusựrửahếtnhữngchấtnàytrongcặnchiết

- Khichiếtc ác chấtbéothìnồngđộtrongcá c phầncủadịchchiếtravàsựxuấthiệncủacặnchiếttiếptheosauđósẽbiểuthịsựkếtthúcquátrìnhchiết

- Cáclactoncủasesquitecpenvàcácglicozidtrợtim,phảnứngKeddecóthểdùngđ ể biểuthịs ự xuấthiệncủachúnghoặckhichophảnứngvớianilinaxetats ẽ chobiếts ự xuấthiệncủacách y d r a t cacbon,v à t ừ đ ó c ó thểbiếtđượckhinàoquátrìnhchiếtkếtthúc

Nhưvậy,t u ỳ thuộcvàomụcđíchcầnchiếtl ấ y chấtgìđ ể lựachọndungmôichothíchhợpvàthựchiệnquytrìnhchiếthợplýnhằmđạthiệuquảc a o Ngoàira,cóthểdựavàomốiquanhệcủadungmôivàchấttancủacáclớpchấtmàta

cóthểtáchthômộtsốlớpchấtngaytrongquátrìnhchiết

1.4 Cácphươngphápsắckýtrongphânlậpcáchợpchấthữucơ.[8,10]

Phươngphápsắcký(chromatography)làmộtphươngphápphổbiếnvàhữuhiệunhấthiệnnay,đượcsửdụngrộngrãitrongviệcphânlậpcáchợpchấthữucơnóichungvàcáchợpchấtthiênnhiênnóiriêng

1.4.1 Đặcđiểmchungcủaphươngphápsắcký.

Sắck ý làphươngpháptáchc á c chấtdựav à o s ự khácnhauvềb ả n chấthấpphụvà sựphânbốkhácnhaucủachúnggiữahaipha:phatĩnhvàphađộng

Sắckýgồmcóphatĩnhvàphađộng.Khitiếpxúcvớiphatĩnh,cáccấutửcủahỗnhợpsẽphânbốgiữaphađộngvàphatĩnhtươngứngvớitínhchấtcủachúng(tínhbịhấpphụ,tínhtan ).Cácchấtkhácnhausẽcóáilựckhácnhauvớiphađộngvàphatĩnh.Trongquátrìnhphađộngchuyểnđộngdọctheohệsắckýhếtlớpphatĩnhnàyđếnlớpphatĩnhkhác,sẽlặpđilặplạiquátrìnhhấpphụvàphảnhấpphụ.Kếtquảlàcácchấtcóáilựclớnvớiphatĩnhsẽchuyểnđộngchậmhơnquahệthốngsắckýsovớicácchấttươngtácyếuhơnvớiphanày.Nhờđặcđiểmnàymàngườitacóthểtáchcácchấtquaquátrìnhsắcký

1.4.2 Cơsởcủaphươngphápsắcký.

Phươngphápsắckýdựavàosựphânbốkhácnhaucủacácchấtgiữah a i phatĩnhvàphađộng.Ởđiềukiệnnhiệtđộkhôngđổi,địnhluậtmôtảsựphụthuộccủalượngchấtbịhấpphụlênphatĩnhvớinồngđộcủadungdịch(hoặcvớichấtkhílàápsuấtriêngphần)gọilàđịnhluậthấpphụđơnphântửđẳngnhiệtLangmuir:

n   n.b.C 1b.C

n -lượngchấtbịhấpphụlênphatĩnhlúcđạtcânbằng

n∞-lượngcựcđạicủachấtcóthểbịhấpphụlênmộtchấthấpphụnàođó.b - hằngsố.C-nồngđộcủachấtbịhấpphụ

1.4.3 Phânloạicácphươngphápsắcký.

Trongphươngphápsắckýphađộnglàcáclưuthể(cácchấtởtrạngtháikhíhaylỏng),cònphatĩnhcóthểlàcácchấtởtrạngtháilỏnghoặcrắn.Dựavàotrạngtháitậphợpcủaphađộng,ngườitachiasắckýthànhhainhómlớn:sắckýkhívàsắckýlỏng.Dựavàocáchtiếnhànhsắcký,ngườitachiarathànhcácphươngphápsắckýchủyếusau:

1.4.3.1 Sắckýcột(C.C).

Đâylàphươngphápsắ c kýphổbiếnnhất,chấthấpphụl à phatĩnhg ồm cácloạisilicagel(cókíchthướchạtkhácnhau)phathườngvàphađảoYMC,ODS,Dianion.Chấthấpphụđượcnhồivàocột(cộtcóthểbằngthuỷtinhhoặckimloại,phổbiếnnhấtlàcộtthuỷtinh).Độmịncủachấthấpphụh ế t sứcquantrọng,nóphảnánhsốđĩalýthuyếthaykhảnăngtáchcủachấthấpphụ.Độhạtcủachấthấpphụcàngnhỏthìsốđĩalýthuyếtcànglớn,khảnăngtáchcàngcaovàngượclại.Tuynhiênnếuchấthấpphụcókíchthướch ạ t càngnhỏthìtốcđộchảyc à n g giảm.Trongmộts ố trườnghợpnếulựctrọngtrườngkhôngđủlớnthìgâyrahiệntượngtắccột(dungmôikhôngchảyđược),khiđóngườitaphảisửdụngápsuất,vớiápsuấttrungbình(MPC),ápsuấtcao(HPLC)

Trongsắckýcột,tỷ

lệđườngkínhcột(D)sovớichiềucaocột(L)rấtquantrọng,nóthểhiệnkhảnăngtáchcủacột.TỷlệL/Dphụthuộcvàoyêucầutách, tứclàphụthuộcvàohỗnhợpchấtcụthể.Trongsắcký,tỷlệgiữa

quãngđườngđicủachấtcầntáchsovớiquãngđườngđicủadungmôigọilàRf,vớimỗimộtchấtsẽcómộtRfkhácnhau.NhờvàosựkhácnhauvềRfn à ymàta

cóthểtáchtừngchấtrakhỏihỗnhợp.Tỉlệchấtsovớitỉlệchấthấpphụcũngrấtquantrọngvàtuỳthuộcvàoyêucầutách.Nếutáchthôthìtỉlệnàythấp(từ1/5–

1/10),cònnếutáchtinhthìtỉlệnàycaohơnvàtuỳvàohệsốtách(tứcphụthuộcvàosựkhácnhauRfcủacác chất),màh ệ sốn ày trongkhoảng1/20-1/30

Trongsắckýcột,việcđưachấtlêncộthếtsứcquantrọng.Tuỳthuộcvàolượngchấtv à dạngchấtmàngườitac ó thểđưachấtlêncộtbằngcácphươngphápkhácnhau.Nếulượngchấtnhiềuv àchạythô,thìphổbiếnlàt ẩ m chấtvàosilicagelrồilàmkhô,tơihoàntoàn,đưalêncột.Nếutáchtinh,thìđưatrựctiếpchấtlêncộtbằngcáchhoàtanchấtbằngdungmôichạycộtvớilượngtốithiểu

Cóhaicáchđưachấthấpphụlêncột:

- Cách1:Nhồicộtkhô.Theocáchnày,chấthấpphụđượcđưatrựctiếpvàocộtkhicònkhô,sauđódùngquemềmđểgõnhẹlênthànhcộtđểchấthấpphụsắpxếpchặttrongcột.Sauđódùngdungmôichạycộtđểchạycộtđếnkhicộttrongsuốt

- Cách2:Nhồicộtướt,tứclàchấthấpphụđượchoàtantrongdungmôichạycộttrướcvớilượngdungmôitốithiểu.Sauđóđưadầnvàocộtđếnkhiđủlượngcầnthiết

Khichuẩnbịcộtphảilưuýkhôngđượcđểbọtkhíbêntrong(nếucóbọtkhígâynênhiệntượngchạyrốitrongcộtvàgiảmhiệuquảtách),vàcộtkhôngđượcnứt,gẫy,dò

Tốcđộchảycủadungmôicũngảnhhưởngđếnhiệuquảtách

Nếutốcđ ộ dòngchảyquálớnsẽlàmgiảmhiệuquảtách.Cònnếutốcđộdòngchảyquáthấpthìsẽkéodàithờigiantáchvàảnhhưởngđếntiếnđộcôngviệc

1.4.3.2 Sắckýlớpmỏng.

Sắckýlớpmỏng(SKLM)thườngđượcsửdụngđểkiểmtravàđịnhhướngchosắckýcột.SKLMđượctiếnhànhtrênbảnmỏngtrángsẵnsilicageltrênđếnhômhayđếthuỷtinh.Ngoàir a, SKLMcòndùngđểđiềuc hế thuchấttrựctiếp.BằngviệcsửdụngbảnSKLMđiềuchế(bảnđượctrángsilicageldàyhơn),cóthểđưalượngchấtnhiềuhơnlênbảnvàsaukhichạysắc ký,ngườitacóthểcạoriêngphầnsilicagelcóchứachấtcầntáchrồigiảihấpphụbằngdungmôithíchhợpđ ể thuđượctừngchấtriêngbiệt.C ó thểpháthiệnchấttrênbảnmỏngbằngđèntửngoại,

bằngchấthiệnmàuđặctrưngchotừnglớpchấthoặcsửdụngdungdịchH2SO410%.

1.5 Mộtsốphươngpháphoálýxácđịnhcấutrúccủacáchợpchấthữucơ.

Cấutrúch o á họccách ợ p chấthữuc ơ đượcx á c địnhn h ờ vàoc á c phươngphápphổkếthợp.Tuỳthuộcvàocấutrúchoáhọccủatừngchấtmàngườitasửdụngphươngphápphổcụthểnào.Cấutrúccàngphứctạpthìyêuc ầ u phốihợpcá c phươngphápphổcàngc ao Trongmộtsốtrườnghợp,đểx ác địnhchínhxáccấutrúchoáhọccủacáchợpchất,ngườitaphảidựavàoc ác phươngphápbổsungkhácnhưchuyểnh o á h o áhọc,kếthợpvớicácphươngphápsắckýsosánh…

1.5.1 Phổhồngngoại(Infraredspectroscopy,IR).

Phổhồngngoạiđượcxâydựngdựavàosựkhácnhauvềdaođộngcủacácliênkếttrongphântửhợpchấtdướisựkíchthíchcủatiahồngngoại.Mỗikiểuliênkếtđượcđặctrưngbởimộtvùngbướcsóngkhácnhau.Dođó,dựavàophổhồngngoại,cóthểxácđịnhđượccácnhóm chứcđặctrưngtronghợpchất,vídụnhưdaođộnghoátrịcủanhómOHtự dotrongcácnhóm hydroxyllà3300-3450cm-1,của nhómcacbonylC=Otrongkhoảng1700-1750cm-1…

1.5.2 Phổkhốilượng(Massspectroscopy,MS).

Nguyêntắccủaphươngphápphổnàylàdựavàosựphânmảnhioncủaphântửchấtdướisựbắnphácủachùmionbênngoài.PhổMScòncho