Kiểm soát sinh học đối với Phytophthora capsici gây bệnh thối rễ ở cây ớt bằng cách sử dụng kết hợp nấm Trichoderma harzianum và vi khuẩn Streptomyces rochei

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC SEMINAR " Kiểm soát sinh học đối với Phytophthora capsici gây bệnh thối rễ ở cây ớt bằng cách sử dụng kết hợp nấm Trichoderma har

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC

SEMINAR

"

Kiểm soát sinh học đối với Phytophthora capsici gây

bệnh thối rễ ở cây ớt bằng cách sử dụng kết hợp nấm

Trichoderma harzianum và vi khuẩn Streptomyces

rochei”.

Chủ đề:

Nhóm sinh viên thực hiện:

Nhóm 34

Nhóm sinh viên thực hiện:

Nhóm 34

Nội dung

IV Kết luận và kiến nghị

III Kết quả và thảo luận

II Vật liệu và phương pháp

I Đặt Vấn Đề

ĐẶT VẤN ĐỀ

Capsicum annuum Bệnh thối rễ gây ra bởi nấm

Phytophthora capsici

ĐẶT VẤN ĐỀ

Kiểm soát tác nhân gây bệnh

Khử trùng đất với Methyl Bromide

Cấm vào năm 2005

Kiểm soát bệnh thối rễ do P

capsici ở cây ớt qua các phương

tiện sinh học.

Một tác nhân

kiểm soát sinh

học không thể

ức chế hoàn

toàn sự lây

nhiễm

Sử dụng kết hợp các tác nhân kiểm soát

sinh học

Trichoderma harzianum và Streptomyces

rochei

ĐẶT VẤN ĐỀ

• Hạt giống C annuum đã khử trùng được gieo trong chậu

(4 x 4 x 14 cm), chứa hỗn hợp gồm phân bón, cát và than bùn hấp (1:2:6) Các chậu được đặt trong phòng, duy trì ở

21 ± 3°C, độ ẩm tương đối 78% và thời gian chiếu sáng 12 giờ Sau 3 tháng, cây con được chuyển sang chậu lớn hơn và / hoặc đất đã được xử lý

• Các tác nhân gây thối rễ ớt P capsici đã phân lập được

duy trì trên môi trường PDA (Potato Dextrose Agar) ở 25 ± 2°C

• Rễ của cây con được lây nhiễm P capsici, các tác nhân

gây bệnh được tái phân lập từ bề mặt mô rễ đã tiệt trùng

và phân lập bào tử đơn để sử dụng cho các thí nghiệm

VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP

a Nguyên liệu thực vật và mầm bệnh

a Nguyên liệu thực vật và mầm bệnh

• Nấm Trichoderma harzianum được duy trì

trong bóng tối trên dịch chiết đường khoai tây PDB (Potato Dextrose Broth) ở 4°C.

• Vi khuẩn Streptomyces rochei được phân lập

từ rễ của cây ớt khỏe trồng ở Murcia, Tây Ban

Nha, có cả 2 đặc tính: đối kháng với P

capsici và tương hợp với T harzianum, được

nuôi cấy trên môi trường NA (Nutrient Agar).

b Các tác nhân kiểm soát sinh học

c Thí nghiệm invitro

P capsici

T harzianum

P capsici

S rochei

PDA giàu

laminarie

và

glucose

(3: 1)

NA

Ủ ở 23, 25, 27 và 30°C trong 72 giờ.

Xác nhận

sự đối kháng

Quan sát trực tiếp các đĩa Petri

Sử dụng kính hiển vi điện tử quét (SEM - Scanning Electron Microscopy) vùng tương tác

Khi cây ớt trong vườn ươm được 3 tháng tuổi, cấy

vào chậu gồm phân, cát và than bùn (1:2:6), đã được

thêm vào tác nhân gây bệnh.

3 phương pháp xử lý

T harzianum

Hỗn hợp cát - tác nhân đối kháng: 5, 10, 15 và 20 g mỗi chậu.

Thêm tỷ lệ khác nhau KCl vào đất để có các giá trị pH:

S rochei

T harzianum + S rochei

c Thí nghiệm invivo

c Thí nghiệm invivo

Bốn nhóm

Sử dụng 10 cây mỗi lần xử lý và mỗi lần lặp lại ba lần Tất

cả các cây được kiểm tra hàng ngày các triệu chứng thối

rễ trong 2 tháng, sau đó đào lên và rửa sạch rễ trước khi đánh giá hiệu quả của các phương pháp xử lý khác nhau

I + T

• Cây bị bệnh và được xử lý bằng tác nhân đối kháng.

NI + T

• Cây không bị bệnh nhưng được xử lý bằng tác nhân đối kháng

I + NT • Cây bị bệnh nhưng không được xử lý.

NT + NI

• Cây không được xử lý và cũng không bị bệnh

Hình 1: Sự tăng trưởng của các vi sinh vật

(a-c) Sự tăng trưởng invitro tại thời điểm

48 giờ của mầm bệnh Phytophthora capsici trên môi trường PDA (a) và các

nhân tố đối kháng, Trichoderma harzianum trên môi trường PDA (b) và Streptomyces rochei trong môi trường NA

(c) (d-g) Sự đối kháng kép của các tác nhân đối kháng chống lại mầm bệnh và với nhau trong môi trường PDA

Trichoderma harzianum ức chế sự tăng trưởng của P capsici bằng cách sống ký

sinh, sau 72 giờ (d) và sự hình thành bào

tử trên mầm bệnh, sau 5 ngày (e) Khả năng tương thích hỗ trợ nhau trong đối

kháng giữa T harzianum và S rochei

trong 48 giờ nuôi cấy (f) Các mũi tên chỉ vùng tương tác của các vi sinh vật.

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

(e) (d)

(c)

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Hình 2: Kính hiển vi điện tử quét sự tương tác giữa Phytophthora

capsici (Pc) và Trichoderma harzianum (Th) và Streptomyces rochei (S)

thu được trên môi trường PDA sau 48 giờ (a) Vi sinh vật ký sinh bao vây

sợi nấm Pc (mũi tên) (b) Sự tan rã của các sợi nấm Pc do sự hình thành

bào tử của vi khuẩn trên các sợi nấm.

Pc

Th

Vùng tương tác giữa S rochei và P capsici: ảnh hưởng ký sinh của các vi khuẩn dạng sợi dẫn đến cong, biến dạng sợi nấm P capsici.

Sợi nấm T harzianum phát triển đồng đều và không có dấu hiệu của

sự biến dạng hoặc tan rã Nhiệt độ không ảnh hưởng đến hoạt động cộng sinh giữa hai tác nhân đối kháng T harzianum, và S rochei:

tương thích và có thể được sử dụng cùng nhau chống lại mầm bệnh.

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Bảng 1: Bệnh thối rễ do Pc (Phytophthora capsici) ở cây ớt và tỷ lệ giảm bệnh khi đất được trộn với vi sinh vật đối kháng Th (Trichoderma harzianum) và Sr

(Streptomyces rochei) theo các phương pháp xử lý khác nhau.

Bảng 1: Bệnh thối rễ do Pc (Phytophthora capsici) ở cây ớt và tỷ lệ giảm bệnh khi đất được trộn với vi sinh vật đối kháng Th (Trichoderma harzianum) và Sr

(Streptomyces rochei) theo các phương pháp xử lý khác nhau.

[1] = 1.3 x , [2] = 2.0 x , [3] = 8.0 x , [4] = 35.0 x bào tử/

ml đối với T harzianum [1] = 9 x , [2] = 1.9 x , [3] = 2.8 x [4] = 1.0 x CFU/ml

NT: cây không xử lý; NI: cây không bị bệnh; I: cây bị bệnh; T: cây được xử lý.

 Tác nhân gây bệnh nguy hiểm đủ để giết chết cây trồng đã bị nhiễm bệnh nếu không được xử lý với nhân tố kiểm soát sinh học (I + NT)

trồng

liều lượng vi khuẩn đối kháng ảnh hưởng đến thời gian mà các triệu chứng của bệnh thối rễ xuất hiện

harzianum không ảnh hưởng đáng kể sự xuất hiện

của bệnh

nghiêm trọng của bệnh giảm mạnh

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

• Sự ức chế tác nhân gây bệnh phát triển là do T

harzianum phát triển nhanh chóng ngay từ đầu, sau đó

tỏa ra các colony của P capsici

T harzianum tiết rất nhiều kháng sinh và enzyme

(-1,3-glucanase, chitinase, protease và cellulase) vào môi trường, nơi nó làm suy yếu thành tế bào.

• T harzianum và S rochei có thể kết hợp với nhau để

tạo ra một ảnh hưởng lớn hơn đối với mầm bệnh.

• Các tác nhân đối kháng là vô hại đối với cây trồng và

có hiệu quả hơn khi kết hợp với nhau trong việc làm

•

Cảm ơn cô giáo và các

bạn đã lắng nghe