Phân tích vitamin E trong một số loại dầu thực vật bằng phương pháp HPLC đảo pha

Dầu được pha với hexane (1:10). Sau đó 200 μl được chuyển sang ống có chứa 600 μl methanol và 200 μl dung dịch chuẩn (300 μgml αtocopherol acetate trong ethanol) Sau đó mẫu được trộn vortex và ly tâm (5000RPM,5mins). Có thể lọc qua màng lọc 0,45 μm trước khi đưa mẫu vào. 50μl mẫu được nạp vào bộ nạp mẫu. Mẫu có thể được giữ trong bình tối màu ở 20 °C trong khoảng 1 tuần.

Trang 1

Phân tích vitamin E trong một số loại dầu thực vật bằng

phương pháp HPLC đảo pha

Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59

Trần Duy Anh 20140228 KTSH2-K59

Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS Quản Lê Hà

Trang 2

Đặc điểm chất cần phân tích

Trang 3

Cách chuẩn bị mẫu

• Dầu được pha với hexane (1:10)

• Sau đó 200 μl được chuyển sang ống có chứa 600 μl methanol và 200 μl dung dịch chuẩn (300 μg/ml α-tocopherol acetate trong ethanol)

• Sau đó mẫu được trộn vortex và ly tâm (5000RPM,5mins)

• Có thể lọc qua màng lọc 0,45 μm trước khi đưa mẫu vào

• 50μl mẫu được nạp vào bộ nạp mẫu

• Mẫu có thể được giữ trong bình tối màu ở -20 °C trong khoảng 1 tuần

Trang 4

Điều kiện chạy sắc kí

• Pha động được sử dụng là Methanol-Nước (96:4)

• Pha tĩnh là Silica gel được gắn với C18, kích thước cột 150x4,4 mm, kích thước hạt 5μm (http://www.glsciences.com/c-product/hplc/lc-columns/inertsil-ods-2/)

• Tốc độ dòng chảy: 2 ml/min

• Nhiệt độ cột: 45°C

• Sử dụng detector UV λ = 292 nm đo sau mỗi 6 phút chạy sắc kí

Trang 5

Kết quả điện di

Trang 6

Nhận xét

Ưu điểm:

• Chuẩn bị mẫu nhanh, đơn giản

• Độ nhạy cao

• Phương pháp có độ chính xác cao (RSD=2.69%) và lượng mẫu thu hồi được cao (98,14%)

• Mẫu dầu có thể được phân tích nhiều lần mà không làm ảnh hưởng đển chất lượng của cột sắc kí

Nhược điểm:

• Cột C18 không phân tách được β- và γ- tocol

Trang 7

Tài liệu tham khảo

• Journal of Chromatography A: Volume 881 issue 1-2 2000 E Gimeno; A.I Castellote; R.M Lamuela-Raventós; M.C de la Torre Rapid determination of vitamin E vegetable oils by RP HPLC.

• Analysis of Tocopherols and Tocotrienols by HPLC http://lipidlibrary.aocs.org/Analysis/content.cfm?ItemNumber=40389

• Differences Between Using Acetonitrile and Methanol for Reverse Phase Chromatography

http://www.shimadzu.com/an/hplc/support/lib/lctalk/35/35lab.html

Định dạng
Số trang	7
Dung lượng	153,67 KB