Đề tài Quy trình định lượng S.Aureus bằng phương pháp đếm đĩa

MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨMĐỀ TÀI: QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S.AUREUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM ĐĨA GVHD: NGUYỄN THỊ KIM OANH NHÓM THỰC HIỆN: 7... Tổng quan về vi khuẩn staphylococcus aureus

MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM

ĐỀ TÀI: QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S.AUREUS

BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM ĐĨA

GVHD: NGUYỄN THỊ KIM OANH NHÓM THỰC HIỆN: 7

1 Tổng quan về vi khuẩn staphylococcus aureus:

Đặc điểm:

- Hiếu khí hay kị khí tùy ý

- Cầu khuẩn, Gram (+), chùm nho

- Có thử nghiệm coagulase, phản ứng DNA, phosphatese

- Khả năng lên men đường manitol, trehalose, sucrose

- Phản ứng đặc trưng: phản ứng đông tụ huyết tương

Phân bố:

- Thịt, cá, rau quả,sữa, trứng,…qua con đường tiếp xúc với người thao tác trong quá trình chế biến Ngoài ra còn có trên

lông, mụn nhọt, vết thương,…

- Có khả năng tăng trưởng trong môi trường chứa đến 15% NaCl.

- Hầu hết các vòng tan máu đều tạo sắc tố vàng sau 1 – 2 ngày nuôi cấy ở nhiệt độ phòng

- Tạo độc tố Enterotoxin bền nhiệt

staphylococcus aureus

Quy trình định lượng S.aureus

350C – 370C.

- Tính số lượng Staphylococcus aureus trong một ml

hoặc một gram mẫu từ những khuẩn lạc điển hình và không điển hình trên các đĩa ở độ pha loãng khác nhau

và khẳng định bằng kết quả thử coagulase dương tính

2.3 Môi trường và hóa chất:

Môi trường Công dụng

Dung dịch Saline Peptone Water

(TSA) Bảo quản và phục hồi vsv trong quá

trình nuôi cấy Brain heart broth (BHI)

Huyết tương thỏ Dùng để khẳng định S.aureus HCl 10%

Chỉnh pH môi trường NaOH 10%

2.5 Qui trình phân tích:

Chương 3: Thuyết minh qui trình

Lấy 10g ( mẫu rắn) hoặc

hút 10ml ( mẫu lỏng)

90ml dung dịch pha loãng SPW

Cho vào máy dập mẫu (mẫu rắn) hoặc lắc đều (mẫu lỏng)

Bước 2: Pha loãng mẫu

Hút 1ml dd 10 -1

9ml SPW

DD 10 -2

Nếu cần, lặp lại thao tác trên để có được dung dịch pha loãng 10 -3 , 10 - 4 ,

10 -5 ,… cho đến khi đạt được độ pha loãng thích hợp.

Hút 0.1ml dd mẫu

BPA

Bước 3: Phân lập trên môi trường chọn lọc

Bước 4: quan sát, đếm số khuẩn lạc

Sau 24h

Đánh dấu khuẩn lạc điển hình

Sau 24h tiếp theo

Khuẩn lạc S.aureus dương tính,đánh dấu khuẩn lạc không điển hình

Bước 5+6: Phục hồi và khẳng định

Cấy 5 khuẩn lạc điển hình và 5 khuẩn lạc

không điển hình từ BPA sang các ống

nghiệm tương ứng chứa 5ml môi trường BHI

Ủ 37 ± 1oC trong 24 ± 3h

Hút 0,1 ml dịch nuôi cấy BHI vào ống nghiệm có kích thước 10mm × 75mm đã chứa 0,3 ml huyết tương thỏ ( hoặc theo hướng dẫn của nhà sản xuất)

Kiểm tra sự động tụ của huyết tương sau 4, 6, 8, 24h

Xác định tỷ lệ khẳng định dựa trên số khuẩn lạc đặc trưng và không đặc trưng

Báo cáo kết quả

- Âm tính: không có khối đông, hỗn hợp dung dịch vẫn

đồng nhất như ống không cấy

- Dương tính: có khối động tụ huyết tương chiếm ¾.

Âm tính Dương tính

Bước 7: báo cáo kết quả

Số phản ứng coagulase (+) H t H a

Kết quả

Cảm ơn cô và các bạn đã chú ý lắng nghe