Các dẫn xuất của furocoumarin từ rễ cây angelicae dahuricae (bạch chỉ) và ảnh hưởng của chúng tới sự điều hòa phiên mã gene RXRα

Các dẫn xuất của Furocoumarin từ rễ cây Angelicae Dahuricae Bạch chỉ và ảnh hưởng của chúng tới sự điều hòa phiên mã gene RXRα.. Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích Dual – Lucifera

Các dẫn xuất của Furocoumarin từ rễ cây Angelicae Dahuricae (Bạch chỉ) và ảnh hưởng của chúng tới sự điều hòa phiên mã

gene RXRα.

Giáo viên hướng dẫn:

Ths Phan Ngô Hoang

I Giới thiệu

II.Thực nghiệm

III.Kết quả & thảo luận IV.Kết luận

Trung Quốc cho các

bệnh như: đau răng,

đau đầu, ho, hen suyễn,

sổ mũi …

• Trong khi đó, 7-9, 13, 14 & cấu trúc mới – 1 ( mỗi thứ 20 µM) giảm rõ rệt sự phiên mã của RXRα kích thích bởi 9-cis-retionid acid

I Giới thiệu

• X receptor-α(RXRα) Retinoid là 1 thành phần trong nhóm nuclear receptor của nhân tố phiên mã ligand-ativated và là 1 thành phần heterodimer bắt buộc cho các nuclear receptor khác

• Nó đóng vai trò mấu chốt trong nhiều quá trình sinh học khác nhau như ung thư, tiểu đường, béo phì, xơ vữa động mạch

• Tế bào phôi người 293T

II Thực nghiệm

3 Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích

Dual – Luciferase reporter Gene

• Tế bào phôi người 293T được nuôi trong DMEM trung bình chứa 10% huyết thanh bào thai bò (FBS)

• Tế bào được chuyển nạp với hai plasmid, 30

ng pBind RXRα LBD và 60 ng pG5 luc sử dụng Lipofectamine 2000 (Invitrogen)

II Thực nghiệm

3 Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích

Dual – Luciferase reporter Gene

• 24 giờ sau, các tế bào được tiếp xúc với các hợp chất thử nghiệm trong 12 h

• Sau đó, các tế bào rửa bằng PBS và phân giải với bộ đệm passive lysis buffer (1 × PLB) trong máy rocking platform trong 15 phút

II Thực nghiệm

3 Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích

Dual – Luciferase reporter Gene

• Các hoạt động của Firefly luciferase và Rellina luciferase đã được kiểm tra bằng hệ thống phân tích Dual-Luciferase Reporter

• Tỷ lệ hoạt động của Firefly luciferase và Rellina luciferase là cơ sở để đánh giá hoạt động phiên mã của RXRα

III Kết quả & thảo luận

• Sắc kí dịch chiết EtOAc-soluble của rễ

Furocoumarin mới là 1, cùng với 17 Furocoumarin khác là 2-18

III Kết quả & thảo luận

• Hợp chất 1 thu được ở dạng bột trắng vô định hình Công thức phân tử là C17H6O5, được

thành lập bằng phương pháp phân tích quang phổ, HR – ESI – MS

III Kết quả & thảo luận

• Quang phổ IR -> nhóm α,β-unsaturated lactone, & α,β-unsaturated carbonyl

5 olefinic & 1 methylene proton

• Quang phổ 13C-NMR & DEPT ->18 carbon, bao gồm 2 methyl, 1 methoxyl, 5 olefinic methane,

2 ketone carbonyl & 5 quarternary carbon

III Kết quả & thảo luận

• Tất cả các hợp chất được phân lập đều là dẫn xuất của furocoumarin Tác dụng của chúng

lên hoạt động phiên mã của RXRα được đánh

giá thông qua hệ thống phân tích Dual – Luciferase reporter

• 9-cis-retinoid acid (9-cis-RA) được biết đến rộng rãi như là một yếu tố tăng cường sự phiên mã

III Kết quả & thảo luận

Tế bào chuyển gene 293T được xử lý với những hợp chất ( 20 µM) hoặc là 9 – cis – retinoid acid (RA) (0.1 µM) trong 12h Hoạt động của Firefly luciferase

và Rellina luciferase được đo đạc Mức độ ảnh hưởng từ các hoạt động của luciferase được tính toán thông qua tỉ lệ hoạt động của Firefly luciferase và Rellina luciferase RA được sử dụng như một yếu tố kiểm soát dương

III Kết quả & thảo luận

• Trong các hợp chất ly trích được, 18 (20 µM) tăng đáng kể (P < 0.01) sự kích hoạt phiên mã

ở RXRα, trong khi 13 và 16 (20 µM) cho thấy ảnh hưởng yếu (P < 0.05) trên sự tăng cường phiên mã

III Kết quả & thảo luận

• 18 với ảnh hưởng phụ thuộc nồng độ trong khoảng 10 – 40 µM

III Kết quả & thảo luận

• 7 – 9 , 13, 14 và hợp chất mới là 1 (mỗi loại 20 µM) cho thấy sự giảm đáng kể ảnh hưởng của các hoạt động của luciferase kích thích bởi 9 – cis – RA so với chỉ sử dụng 9 – cis – RA

III Kết quả & thảo luận

Xử lí đồng thời 9 – cis – Retinoid acid và các hợp chất thu được.

IV Kết luận

• Trong số những dẫn suất furocoumarin, hợp chất mới 1, và các hợp đã biết là 7-9, 13, 14, 16 và 18 cho thấy tiềm năng hoạt động trong việc điều chỉnh chức năng kích hoạt phiên

mã của RXRα

• Furocoumarin có thể đem lại một phương thức mới trong việc chống lại các bệnh nan y có liên quan đến RXRα, ví dụ như chống ung thư và chống bệnh tiểu đường

• Các hoạt động sinh học của các chất chuyển hóa và cơ chế phân tử hoạt động của Furocoumarin liên quan đến RXRα nuclear receptor có thể được nghiên cứu kĩ hơn trong tương lai.

Tài liệu tham khảo

Angelicae Dahuricae and Their Effects on RXRα Transcriptional Regulation Dong-Ping Liu , Qiang Luo, Guang-Hui Wang, Yang Xu , Xiao-Kun Zhang, Quan-Cheng Chen and Hai-Feng Chen