Nghiên cứu nhân nhanh protocorm giống lan Hồ điệp

Số lượng sản xuất cây hoa Lan hiện nay vẫn chưa đáp ứng được nhu cầu ngày càng tăng của thị trường, Giảm bớt các nhược điểm của phương pháp nhân giống truyền thống trên môi trường thạch và lỏng Hiện tượng thủy tinh thể khi nuôi cấy trong môi trường lỏng có tỷ lệ cao

Trang 1

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA

KHOA HÓA

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC

BÁO CÁO ĐỀ TÀI:

Nghiên cứu nhân nhanh protocorm giống lan Hồ điệp (PHALAENOPSIS SPP.) bằng

phương pháp nuôi cấy mô trên hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1

Trang 2

Giáo viên hướng dẫn:

TS ĐẶNG ĐỨC LONG

Sinh viên thực hiện:

LƯƠNG THANH BÌNH

Trang 3

NỘI DUNG CHÍNH

1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI

2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

Trang 4

I TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI

Trang 5

GiỚI THIỆU VỀ HOA LAN hồ điệp (phalaenopsis spp.)

Hoa lan Hồ Điệp

- tên khoa học là Phalaenopsis sp

- Lan Hồ Điệp có màu sắc phong phú

Trang 6

-II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Vật liệu nghiên cứu

Nguồn mẫu là protocorm giống lan Hồ điệp (Phalaenopsis spp.), (có màu xanh, đường kính từ 1-1,5mm) thu

nhận sau 2-3 tháng cấy chuyền sang môi trường MS (Murashige và Skoog, 1962) cơ bản có bổ sung 2,0 mg/l

BA, 0.5 mg/l NAA, 20% nước dừa và 30 g/l đường.

Trang 7

Thiết bị nghiên cứu

Có các thông số về kích thước như sau:

Trang 8

Nhìn từ bề ngoài ta thấy máy gồm các chi tiết như:

- Công tắc tổng (nguồn): Dùng để bật /tắc nguồn của máy

- Điều áp: Dùng để điều chỉnh cường độ dòng điện

- Đo dòng khí (Thủy kế): Dùng để đo dòng khí tổng

- Bộ hẹn giờ: Dùng để cài đặt chu kỳ hoạt động của máy

- Van điều áp: Điều chỉnh áp lực khí đi ra

- Công tắc đèn báo: bật/ tắc đèn báo

- Đèn báo: Báo các ống đang dùng

- Quạt: làm mát bên trong máy

Trang 9

Hệ thống BioCFI 1 là hệ thống tự động hóa hoàn toàn

Hệ thống BioCFI 1 hoạt động trên nguyên lý sự cung cấp dòng khí định kỳ vào bên trong bình nuôi cấy

Dòng khí được làm sạch bằng màng lọc vi sinh trước khi đi vào bình nuôi cấy

Trang 10

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Môi trường nuôi cấy MS cơ bản:

- MSđđ + 20g/l saccharose + 300ml/l CW + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC

- pH = 5,8 Điều kiện nuôi cấy:

- Nhiệt độ: 25 ± 20C

- Độ ẩm: 70 - 80%

- Thời gian chiếu sáng: 14 giờ/ngày

- Cường độ chiếu sáng: 2000 lux

Trang 11

- Môi trường nuôi cấy:

MS + 20g/l đường + 300ml/l CW + 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~

5,8

- Bố trí thí nghiệm:

Thí nghiệm được bố trí trên:

- Hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1

- Hệ thống máy lắc

- Nuôi cấy lỏng tĩnh

Trang 12

 Thí nghiệm 2 Khảo sát sự ảnh hưởng của chất sinh trưởng (BA, NAA) đến quá trình nhân nhanh protocorm trong hệ thống bioreactor

Môi trường nuôi cấy sử dụng MS nhưng thay đổi nồng độ BA và NAA:

- V1: MS + 20g/l đường + 300ml/l CW + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~ 5,8

- V2: MS + 20g/l đường + 300mg/l CW + 0,5mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~ 5,8

- V3: MS + 20g/l đường + 300ml/l CW + 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~ 5,8

- V4: MS + 20g/l đường + 300ml/l CW + 1,5mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~ 5,8

Trang 13

Bố trí thí nghiệm:

- Tiến hành cấy mẫu (5g) vào các bình nuôi cấy

- Môi trường đổ vào bình nuôi cấy là 300ml

- Khi cấy mẫu xong thì đem lắp vào hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1 với chế độ sục khí

1,5h/ngày.

Trang 14

 Thí nghiệm 3 Khảo sát sự ảnh hưởng của chế độ sục đến khả năng nhân sinh khối protocorm trên hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1

- Môi trường nuôi cấy:

MS + 20g/l đường + 300ml/l CW + 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~

Trang 15

Kết quả nghiên cứu THỨ 1

Điều kiện nuôi

cấy

Khối lượng tươi

Nhận xét Ban đầu (g) Thu hoạch (g)

Trang 16

Kết quả nghiên cứu THỨ 1

Biểu đồ 5.1 Ảnh hưởng của hệ thống bioreactor, lỏng lắc, lỏng tĩnh đến khả năng nhân sinh chồi protocorm

Trang 18

b c

Trang 19

Kết quả nghiên cứu 2

protocorm có màu xanh đậm, xuất hiện nhiều cụm

chồi to, một số hình thành chồi.

V 4 1,5 0,5 5 20,5 ± 0,529 protocorm hình thành chồi có từ 2-3 lá

Trang 20

Biểu đồ 5.2 Ảnh hưởng của chất sinh trưởng (BA, NAA) đến quá trình nhân nhanh protocorm trong hệ thống bioreactor tự

tạo BioCFI 1

Trang 22

Biểu đồ 5.3 Sự thay đổi thể tích và pH môi trường trong quá trình nuôi cấy ở hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1

Trang 23

v1 v2

v4 v3

Trang 24

Kết luận nghiên cứu 2

Trang 26

Biều đồ 5.4 Ảnh hưởng của chế độ sục đến khả năng nhân sinh protocorm trên hệ thống bioreactor tự tạo

BioCFI 1

Trang 27

Kết quả nghiên cứu 3

Trang 28

Biểu đồ 5.5 Sự thay đổi về thể tích và pH trong môi trường ở các chế độ sục khí trong hệ thống bioreactor tự tạo

BioCFI 1

Trang 29

g

h

Trang 30

Kết luận nghiên cứu 3

Khối lượng tươi 19,75 g

Trang 31

IV Kết luận và đề nghị

Qua quá trình nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu nhân nhanh protocorm giống lan Hồ Điệp bằng phương pháp

nuôi cấy trên hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1”, em rút ra được những kết luận sau:

. Đối với quá trình nuôi cấy trên hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1 thì sự nhân nhanh protocorm cho kết quả cao hơn so với nuôi cấy ở lỏng lắc và lỏng tĩnh Sau 8 tuần nuôi cấy đã đạt được khối lượng tươi của protocorm là 19,45g,

protocorm xanh tốt, tròn, nhiều từng cụm, một số protocorm phát triển thành chồi.

KẾT LUẬN

1

Trang 32

 Việc bổ sung chất điều hòa sinh trưởng trong môi trường nuôi cấy ở nồng độ 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA cho kết

quả tốt nhất: trọng lượng tươi của mẫu cấy là cao với 19,7g, các cụm mẫu cấy protocorm, sau 8 tuần nuôi cấy đã tạo thành

protocorm có sự phát triển đồng đều giữa các protocorm, sự xuất hiện nhiều cụm protocorm to có màu xanh đậm nhiều mẫu protocorm đã bắt đầu hình thành chồi

 Đối với chế sục khí 1,5h/ngày thì việc tạo cụm protocorm là rất tốt, có sự đồng đều giữa các protocorm, có màu

xanh đậm, to lớn Trọng lượng tươi đạt tới 19,75g Với chế độ sục 1h/ngày đạt được khối lượng tươi là 17,85g

KẾT LUẬN

1

Trang 33

. Tóm lại, thì khi nuôi cấy mẫu protocorm lan Hồ điệp trên hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1 với môi trường: MS + 20g/l đường +

300ml/l CW + 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC,

pH ~ 5,8, ở chế độ sục 1,5h/ngày thì khả năng nhân nhanh protocorm

và cho khối lượng tươi của protocorm là cao nhất so với nuôi cấy lỏng

lắc và lỏng tĩnh.

Trang 34

ĐỀ NGHỊ

2

Qua nghiên cứu này em xin đề xuất một số đề nghị như sau:

- Nên khảo sát thêm yếu tố “lưu lượng khí sục vào bình nuôi cấy” đến khả năng nhân nhanh protocorm.

- Các mẫu protocorm sau khi thu nhận từ quá trình nuôi cấy trên hệ thống bioreactor tiếp tục chuyển qua hệ thống

ngập chìm tạm thời để tạo chồi

- Mở rộng việc nhân nhanh protocorm của nhiều loại hoa lan khác như: Dendrobium, cũng như nhân nhanh callus

của một số loại thực vật khác: hoa Cúc, hoa Đồng tiền

Trang 35

THANK YOU

Định dạng
Số trang	35
Dung lượng	5,54 MB