khóa luận tốt nghiệp NGHIÊN cứu BIỂU HIỆN LYSIN của BACTERIOPHAGE CHỦNG k đặc HIỆU

Gen mã hóa lysin của thể thực khuẩn đặc hiệu tụ cầu vàng đã được tách dòng thành công trong vector tách dòng pCR2.1 Sử dụng vector biểu hiện pET32a(+) và chủng E.coli BL21 star DE3 cho mục đích biểu hiện protein tái tổ hợp được tốt nhất.

3 4

BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

Đề tài:

“NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN LYSIN CỦA BACTERIOPHAGE CHỦNG K ĐẶC

HIỆU Staphylococcus aureus Ở Escherichia coli”

Giáo viên hướng dẫn Sinh Viên: Địa điểm thực tập: Phòng vi sinh vật phân

tử, viện CNSH, viện Khoa học công nghệ Việt Nam

PHẦN 4:KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

PHẦN 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

PHẦN 1: MỞ ĐẦU

Nội dung

PHẦN 5: KẾT LUẬN TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ

Phần 1: Mở đầu

Đặt vấn đề

Hình thái

S aureus

Gây viêm, nhiễm trùng, gây ngộ độc thực phẩm

Tỷ lệ kháng kháng sinh

và đa kháng thuốc ngày càng tăng

Giải pháp thay thế kháng sinh

Peptide kháng khuẩn Liệu pháp kháng thể Liệu pháp thực khuẩn thể và lysin

ưu điểm của liệu pháp lysin

Tác dụng kháng

khuẩn cao

Không có hiện tượng kháng thuốc

An toàn với người, vật nuôi

Phần 3 Đối tượng, nội dung và phương pháp

nghiên cứu

3.1 Đối tượng, vật liệu

-Gen mã hóa lysin của thể thực khuẩn đặc hiệu tụ cầu vàng

đã được tách dòng thành công trong vector tách dòng pCR2.1

- Sử dụng vector biểu hiện pET32a(+) và chủng E.coli BL21 star DE3 cho mục đích biểu hiện protein tái tổ hợp được tốt nhất.

Nội dung nghiên cứu

 Thiết kế vector biểu hiện mang gen mã

hóa lysin của thực khuẩn thể đặc hiệu tụ

cầu vàng

 Biểu hiện được lysin tái tổ hợp trong E

coli BL21 starTM (DE3)

 Nghiên cứu các điều kiện tối ưu biểu hiện

lysin phage trong E.coli

3.2 phương pháp nghiên cứu

lysK

Biểu hiện

Tối ưu điều kiện biểu hiện

về nhiệt độ và nồng độ chất cảm ứng

Phần 4 Kết quả nghiên cứu và thảo luận

4.1 Kết quả thiết kế vector pET32a(+) mang gen lysK

Hình 4.1: Kết quả sàng lọc các dòng pET32 mang gen lysk

ĐC 1 2 3 4 5

ĐC: đối chứng là pET32 a(+) gốc

Giếng 1- 5: các dòng plasmid có khả năng mang gen

4.1 Kết quả thiết kế vector pET32a(+) mang gen lysK

Hình 4.2 Kết quả chọn lọc các dòng vector

tái tái tổ hợp pE- lysK bằng lập bản đồ giới

hạn

L: ladder DNA PCR: đối chứng (+)

Kết quả kiểm tra chiều gắn của vector bằng pp giải trình tự

- Trình tự gen lysk trong vector biểu hiện giống với trình tự lysk

đã được tách dòng

-kết quả dịch mã: có mã mở đầu và mã kết thúc, không có điểm kết thúc ở vùng khởi động

-Khi so sánh đoạn gen này trên ngân hàng gen cho độ tương đồng 100% so với endolysin phage K ( KF761114.1)

-Vậy đoạn chèn đã gắn đúng chiều, đảm bảo cho quá trình biểu hiện protein diễn ra thông suốt

Kết quả giải trình tự gen lysk

4.2 Kết quả biểu hiện lysin trong E coli

ĐC M: thang protein chuẩn (Understained);

ĐC 1: không cảm ứng IPTG

ĐC 2: cảm ứng IPTG

4.3 Kêt quả tối ưu điều kiện biểu hiện lysin

M : thang chuẩn protein

NC: nuôi cùng, không

cảm ứng

D: dịch nổi

D1, D2: dịch sau siêu âm

C: cặn

4.3.1 kết quả tối ưu điều kiện về

nhiệt độ

4.3 Kết quả tối ưu điều kiện biểu hiện lysin

4.3.2 Kết qủa tối ưu nồng độ chất cảm ứng IPTG

NC: nuôi cùng D: dịch

C: cặn

Phần 5 Kết luận và kiến nghị

5.1 Kết luận

•Thiết kế thành công vector biểu hiện pET32a(+) mang gen lysK có kích

thước 1488 bp

• Biểu hiện thành công protein tái tổ hợp - lysin phage dung hợp với

đuôi trxA trong vi khuẩn E.coli chủng BL21 StarTM (DE3) với kích thước khoảng 70 kDa

• Bước đầu tối ưu hóa được các điều kiện biểu hiện lysin tái tổ hợp để nâng cao hiệu suất biểu hiện và lysin tái tổ hợp được biểu hiện ở trạng thái hòa tan khi biểu hiện ở 180C và 1mM chất chất cảm ứng IPTG thu mẫu sau 16 giờ cảm ứng

5.2 Kiến nghị

• Tiếp tục nghiên cứu tinh sạch, thử hoạt tính, tìm điều kiện tối ưu cho hoạt động của lysin trong tiêu diệt tụ cầu vàng

• Sản xuất được lượng lớn lysin tái tổ hợp nhằm ứng dụng vào thực tiễn cuộc sống.