Slide thuyết trình trichoderma reesei tìm hiểu gen qui định enzyme cellulase và một số phương pháp nâng cao khả năng phân huy cellulose

Hoàng Mỹ DungSVTH: Nguyễn Thị Hương Đề tài : Trichoderma reesei- tìm hiểu gen qui định enzyme cellulase và một số phương pháp nâng cao khả năng phân huy cellulose Đề tài : Trichoderma

GVHD: ThS Hoàng Mỹ Dung

SVTH: Nguyễn Thị Hương

Đề tài : Trichoderma reesei- tìm hiểu gen qui định enzyme cellulase và một số phương pháp nâng cao khả năng phân huy cellulose

Đề tài : Trichoderma reesei- tìm hiểu gen qui định enzyme cellulase và một số phương pháp nâng cao khả năng phân huy cellulose

1 Tổng quan

2 Phương pháp tác động để nâng cao khả năng phân hủy cellulose

Nội dung

- TK 19, Elwyn T Reese

I Giới thiệu về nấm mốc Trichoderma reesei

I Giới thiệu về nấm mốc Trichoderma reesei

Cellulose :CTCT là (C6H10O5)n hay [C6H7O2(OH)3]n

liên kết β-D-Glucose, là thành phần vách tế bào thực vật

II Khả năng phân hủy cellulose ở Trichoderma reesei

II Khả năng phân hủy cellulose ở Trichoderma reesei

chuỗi đơn cellulose + kết tinh  Tetrasaccharides, disaccharides

• Cellobiase: Tetrasaccharides + disaccharides  Monosaccharide

Cơ chế xúc tác của cellulase

Hệ gene qui định cellulase ở T.reesei

2 Phương pháp hiện đại:

 Nâng cao khả năng sản xuất CBH

 Nâng cao khả năng sản xuất EG

Phần 2: Phương pháp tác động để nâng cao khả năng phân hủy cellulose

Phần 2: Phương pháp tác động để nâng cao khả năng phân hủy cellulose

Ảnh hưởng của thành phần môi trường: 4 môi trường khác nhau

-7.5 g/l cellulose, 0.3 g/l nấm men, 0.8 g/l peptone,

3 g/l urea

- 10 g/l glucose, 6.7 g/l đạm nấm men

Môi trường A ( ), môi trường B ( ), môi trường C ( ), môi trường D ( )

Ảnh hưởng giữa pH và cơ chất trong môi trường nuôi cấy

Ảnh hưởng của áp suất

Ảnh hưởng của sục khí và không sục khí

Quá trình sục khí ( ) và không sục khí ( )

Nâng cao khả năng sản xuất cellobiohydrolases ( CBH )

Tăng số bản sao gen cbh1

plasmid pALK496  T reesei ALKO2221 tăng số lượng bản sao của gen cbh1.

Kiểm tra sự tồn tại của đoạn ADN cần chèn vào các chủng

biến đổi bằng Southern Blot

Kết quả Southern Blot ở các chủng biến đổi

Giếng 1 và 2: marker Giếng 3: ALKO2221, giếng 4: ALKO3760, giếng 5: ALKO3761, giếng 6: ALKO3862

Khả năng tổng hợp cellulase ở các chủng

 Sử dụng promoter mạnh cbh1

plasmid pALK546  T reesei ALKO2221

Nâng cao khả năng sản xuất cellobiohydrolases ( CBH )

Sản lượng cellulase bởi chủng đã biến đổi so với chủng chủ ALK02221

Kết quả: Southern blotting của chủng ALKO3530 và ALKO3574

Kết quả sản lượng cellulase bởi chủng chủ VTT-79125 và các chủng đột biến

Chủng Melanocarpus albomyces có 3 gen hiệu quả sản xuất cellulase đó là :Cel7A, Cel45A, Cel7B.

Các plasmid được sử dụng cho biến đổi T.reesei ALK3620 biểu

hiện gen cel45A, cel7A, cel7B ở M.albomyces

Nâng cao khả năng sản xuất endoglucanases ( EG ) bằng cách nhân bản và biểu hiện gen khác loài

Nâng cao khả năng sản xuất endoglucanases ( EG ) bằng cách nhân bản và biểu hiện gen khác loài

Kết quả:

- Tạo chủng đột biến

- Khảo sát điều kiện tối ưu