Nghiên cứu tạo đột biến khử độc và biểu hiện gen mã hoá kháng nguyên tái tổ hợp Staphylococcal enterotoxin B (SEB) phục vụ cho việc chế tạo kít phát hiện t

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ---*--- PHAN THỊ HOÀNG HẢO NGHIÊN CỨU TẠO ĐỘT BIẾN KHỬ Đ

Trang 1

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

i

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

-* -

PHAN THỊ HOÀNG HẢO

NGHIÊN CỨU TẠO ĐỘT BIẾN KHỬ ĐỘC

VÀ BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN TÁI TỔ HỢP STAPHYLOCOCCAL ENTEROTOXIN B (SEB) PHỤC

VỤ CHO VIỆC CHẾ TẠO KÍT PHÁT HIỆN TỤ CẦU VÀNG

TRONG THỰC PHẨM

Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học

Mã số: 604280

LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Người hướng dẫn khoa học: TS NCVC Chu Hoàng Hà

Thái Nguyên, Năm 2010

Trang 2

ii

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan các kết quả nghiên cứu dưới đây do tôi và nhóm cộng

sự nghiên cứu phòng Công nghệ tế bào thực vật, Viện Công nghệ sinh học thực hiện từ tháng 3 tới tháng 9 năm 2010

Hà Nội, ngày 27 tháng 09 năm 2010 Học viên ký tên

Phan Thị Hoàng Hảo

Trang 3

iii

LỜI CẢM ƠN

Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới TS NCVC Chu Hoàng Hà, TS Nguyễn Hữu Cường, TS Phạm Bích Ngọc phòng Công nghệ tế bào thực vật, Viện Công nghệ sinh học đã tận tình hướng dẫn và dìu dắt tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành khóa luận

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn TS Nghiêm Ngọc Minh đã cho phép tôi tham gia thực hiện đề tài “Nghiên cứu tạo kháng nguyên tái tổ hợp Staphylococcal enterotoxin B (SEB) phục vụ cho tạo kít phát hiện nhanh ngộ độc thực phẩm do độc

đã tạo điều kiện và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu tại Trường và Viện

Bên cạnh đó, tôi xin cảm ơn những người thân trong gia đình và bạn bè đã tạo điều kiện động viên giúp đỡ tôi cả về vật chất và tinh thần để tôi có thể hoàn thành bản luận văn này

Một lần nữa tôi xin chân thành cảm ơn!

Phan Thị Hoàng Hảo

Trang 4

iv

MỤC LỤC

Trang

CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii

DANH MỤC BẢNG ix

DANH MỤC HÌNH xi

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Tình hình bệnh ngộ độc thực phẩm do Saphylococcus aureus và độc tố ruột staphylococcal enterotoxin B trên thế giới và tại Việt Nam 3

1.1.1 Khái quát về bệnh ngộ độc thực phẩm 3

1.1.2 Tình hình dịch bệnh ngộ độc thực phẩm do Saphylococcus aureus và độc tố ruột staphylococcal enterotoxin B trên thế giới và tại Việt Nam 4

1.2 Tụ cầu vàng Staphylococcus aureus 6

1.2.1 Đặc điểm phân loại 6

1.2.2 Đặc điểm vi khuẩn học 6

1.2.2.1 Hình dạng và kích thước 6

1.2.2.2 Độc tố và khả năng gây bệnh 7

1.2.3 Hệ gen tụ cầu vàng Staphylococcus aureus 10

1.3 Nội độc tố ruột staphylococcal enterotoxin B 10

1.3.1 Cấu trúc phân tử staphylococcal enterotoxin B 10

Trang 5

v

1.3.2 Cơ chế gây độc của staphylococcal enterotoxin B 12

1.3.3 Staphylococcal enterotoxin B tái tổ hợp và tiềm năng ứng dụng 14

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.1 Vật liệu, trang thiết bị và dụng cụ nghiên cứu 16

2.1.1 Chủng vi khuẩn và plasmid 16

2.1.2 Các bộ kít 16

2.1.3 Hóa chất, máy móc và thiết bị 16

2.1.4 Môi trường và đệm 17

2.1.5 Cặp mồi sử dụng 17

2.1.6 Phần mềm 17

2.2 Phương pháp nghiên cứu 17

2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 17

2.2.2 Các phương pháp nghiên cứu 18

2.2.2.1 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) 18

2.2.2.2 Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony-PCR) 20

2.2.2.3 Phương pháp xử lý enzym hạn chế 20

2.2.2.4 Phương pháp tinh sạch ADN từ gel agarose 22

2.2.2.5 Phản ứng ghép nối gen ngoại lai vào vector 23

Trang 6

vi

2.2.2.6 Phương pháp biến nạp ADN plasmid vào tế bào vi khuẩn Escherichia

coli DH5α 24

2.2.2.7 Phương pháp tách ADN plasmid từ tế bào vi khuẩn Escherichia coli DH5α 24

2.2.2.8 Biểu hiện protein staphylococcal enterotoxin B tái tổ hợp trong tế bào vi khuẩn Escherichia coli chủng BL21(DE3) 26

2.2.2.9 Phương pháp điện di protein trên gel polyacrylamide 26

2.2.2.10 Phương pháp tinh sạch protein 27

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28

3.1 Kết quả nhân gen seb phục vụ cho thiết kế vector biểu hiện 29

3.1.1 Thiết kế mồi 30

3.1.2 Kết quả PCR nhân gen seb 31

3.1.3 Xử lý enzym hạn chế tạo đầu cắt so le trên gen seb 32

3.2 Kết quả thiết kế vector biểu hiện pET21a+ mang gen seb đột biến 34

3.2.1 Xử lý enzym hạn chế tạo đầu cắt so le trên pET21a+ 34

3.2.2 Phản ứng gắn đoạn gen đích seb vào vector biểu hiện 36

3.2.3 Kết quả kiểm tra vector tái tổ hợp bằng phản ứng colony-PCR 37

3.2.4 Kết quả kiểm tra plasmid tái tổ hợp bằng enzym hạn chế 38

3.2.5 Kết quả giải trình tự gen seb đột biến trên vector biểu hiện …… ……….……40

3.3 Kết quả biểu hiện gen mã hóa cho protein SEB tái tổ hợp 39

Trang 7

vii

3.3.1 Biến nạp vector tái tổ hợp pET 21a+/SEB vào Escherichia coli chủng

BL21(DE3) 40

3.3.2 Kiểm tra sự biểu hiện gen seb 41

3.3.3 Tối ƣu các điều kiện biểu hiện gen seb 43

3.3.4 Tinh sạch protein tái tổ hợp SEB 47

KẾT LUẬN 49

KIẾN NGHỊ 49

TÀI LIỆU THAM KHẢO 50

Trang 8

viii

CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Trang 9

3.1 Trình tự cặp mồi nhân bản đoạn gen seb đột biến từ vector GS45350 31

Trang 10

x

Trang 11

data error !!! can't not

read

Trang 12

read

Trang 13

read

Trang 14

read

Trang 15

read

Trang 17

read

Trang 18

read

Trang 19

read

Trang 20

read

Trang 21

read

Trang 22

read

Trang 23

read

Trang 24

read

Trang 26

read

Trang 27

read

Định dạng
Số trang	27
Dung lượng	375,51 KB