Ung thư vú là một trong những loại ung thư thường gặp nhất và gây tử vong hàng đầu ở phụ nữ.Theo cơ quan nghiên cứu Ung thư Thế giới (IARC) vào năm 1998 ung thư vú đứng đầu, chiếm 21% trong tổng số các loại ung thư ở phụ nữ trên toàn thế giới. Ung thư vú đang ngày càng phổ biến ở các nước đang phát triển. Tại Việt Nam ở nữ giới, ung thư vú là loại ung thư có tần xuất cao sau ung thư cổ tử cung 28,6 (trên 100.000 dân)Nguyên nhân gây ung thư vú được cho là có nhiều nguyên nhân khác nhau như yếu tố môi trường, yếu tố di truyền, đột biến gen
Trang 1ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
ĐỀ CƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI
Trang 21 Giới thiệu tổng quan
2 Mục đích nghiên cứu
3 Đối tượng nghiên cứu
4 Các phương pháp nghiên cứu
5 Nội dung và phạm vi của vấn đề nghiên cứu
6 Nơi thực hiện đề tài nghiên cứu
7 Thời gian thực hiện
8 Tài liệu tham khảo
NỘI DUNG
Trang 31 GIỚI THIỆU TỔNG QUAN
Hình 1: Khối mô ung thư vú
- Ung thư vú: thường gặp
nhất và gây tử vong hàng đầu ở phụ nữ.
(Theo cơ quan nghiên cứu Ung thư Thế giới (IARC))
Trang 41 GIỚI THIỆU TỔNG QUAN
Hình 2: Thụ thể HER và con đường truyền tín hiệu tế bào
HER (Human Epidermal Receptor): Thụ thể nhân tố tăng trưởng biểu mô.
Biểu hiện quá mức của HER2 chiếm 10-34% các ca ung thư vú.
Trang 51 GIỚI THIỆU TỔNG QUAN
Hình 3: Kháng thể đơn dòng tái tổ hợp
Trang 6Hình 4: Tác động của Herceptin lên HER2
1 GIỚI THIỆU TỔNG QUAN
Trang 7Tạo dòng thành công các tế bào CHO DG44 mang
gen sản xuất kháng thể đơn dòng tái tổ hợp
kháng thụ thể HER2
Tạo dòng thành công các tế bào CHO DG44 mang
gen sản xuất kháng thể đơn dòng tái tổ hợp
kháng thụ thể HER2
2 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU
Trang 8• Tăng sinh tế bào CHO DG44 in vitro.
• Chuyển gen Herceptin vào tế bào thành công sử dụng phương pháp Liposome.
• Chọn dòng tế bào CHO DG44 chuyển gen thành công bằng Zeocine.
• Tạo dòng tế bào đơn biểu hiện Herceptin tốt nhất.
• Khảo sát đặc tính của tế bào CHO DG44 sau khi chuyển gen.
2 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU
Trang 9Tạo dòng thành công các tế bào CHO DG44 sản xuất Herceptin:
• Đóng góp cho xã hội
Thành công đầu tiên tại Việt Nam.
Mở ra cơ hội tiếp cận các phương pháp chữa trị ung thư vú
Giá bán thấp hơn.
• Đóng góp cho ngành học
Thành công trong lĩnh vực sinh học tại Việt Nam
Tiền đề có tính định hướng cho các nghiên cứu khác (tạo dòng các dòng tế bào ung thư
mang gen sản xuất thuốc chữa bệnh có nguồn gốc từ protein tái tổ hợp).
ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI
2 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU
Trang 103 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
- CHO DG44 - Invitrogen
- Vector pcDNA chứa gene mã hóa cho chuỗi nặng
(Hc), chuỗi nhẹ (Lc) của Herceptin – Invitrogen
- Bộ kit chuyển gen Liposome - Invitrogen.
- Môi trường nuôi cấy cho tế bào CHO DG44 – Sigma
Aldrich
Trang 11Tăng sinh plasmid chứa Hc và Lc Tăng sinh tế bào CHO-DG44
Chuyển plasmid vào tế bào DG44
Chọn lọc tế bào bằng Zeocine
Tạo dòng tế bào chứa gen Herceptin
Nuôi cấy tăng sinh và Khảo sát tế bào
4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Hình 5: Sơ đồ thiết kế thí nghiệm
Trang 12Nuôi cấy tế bào
Chuyển gen vào tế bào động vật
Chọn lọc tế bào chuyển gen bằng Zeocine Nuôi cấy tăng sinh và Khảo sát tế bào
4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Trang 13Thí nghiệm 1: Nuôi cấy tế bào
4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Bảng 1: Khảo sát dụng cụ nuôi cấy ảnh hưởng đến nuôi cấy tế bào
- Môi trường nuôi cấy: CD DG44 CHO Nhiệt độ: 37oC CO2 7%
- Chỉ tiêu theo dõi: Mật độ tế bào
Trang 14Thí nghiệm 2: Chuyển gen vào tế bào động vật: Liposome
Môi trường nuôi cấy: CD DG44 CHO
Dụng cụ chuyển gen: Đĩa 24 giếng
4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Bảng 2: Khảo sát tỉ lệ gen Hc-Lc trong plasmid chuyển vào tế bào CHO
Trang 15Thí nghiệm 3: Chọn lọc tế bào chuyển gen bằng Zeocine
4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Môi trường nuôi cấy:CD DG44 CHO
Tế bào chọn lọc: Tế bào CHO đã được chuyển gen
Chỉ tiêu đánh giá: Thời gian tế bào tồn tại sau chuyển gen
Trang 16Thí nghiệm 4: Nuôi cấy tăng sinh và khảo sát tế bào
4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Bảng 4: Xác định loại môi trường và thể tích thích hợp để nuôi cấy tăng sinh tế bào
Chỉ tiêu theo dõi: số lượng copy tế bào, độ bền sản xuất Herceptin.
Trang 17- Chuyển gen Herceptin vào tế bào CHO DG44.
- Khảo sát đặc tính của tế bào CHO DG44 sau khi chuyển gen Herceptin.
5 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
Trang 186 NƠI THỰC HIỆN ĐỀ TÀI
Phòng nghiên cứu và ứng dụng tế bào gốc –
Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQG TPHCM
Trang 19Thời gian dự kiến: tháng 07/2016 đến tháng 07/2017
7 THỜI GIAN THỰC HIỆN
Trang 208 TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 A&G Pharmaceutical, CHO stable Cell Line Development
2 B Leyland-Jones & A Rakhit et al 2001 Pharmacologic insights into the future of trastuzumab Annals of Oncology 12 (Suppl
I): S43-S47, 2001.
3 Camire, Joseph 2000 Chinese Hamster Ovary Cells for the Production of Recombinant Glycoproteins Art to Science, Vol 19, No
1; Logan, UT, 2000
4 D Zhao et al 2008 Improving Protein Production in CHO Cells BioPharm June 2008.
5 F Michael Yakes et al 2002 Herceptin-induced Inhibition of Phosphatidylinositol-3 Kinase and Akt Is Required for
Antibody-mediated Effects on p27, Cyclin D1, and Antitumor Action Cancer Res 2002;62:4132-4141
6 Hao Zeng, Zhe-Sheng Chen, Martin G Belinsky, et al 2001 Transport of Methotrexate (MTX) and Folates by Multidrug
Resistance Protein (MRP) 3 and MRP1 : Effect of olyglutamylation on MTX Transport Cancer Res 2001;61:7225-7232.
7 J Baselga & J Albanell 2001 Mechanism of action of anti-HER2 monoclonal antibodies Annals of Oncology 12 (Suppl 1):
S35-S41, 2001.
8 J Baselga, L Norton, J Albanell, et al 1998 Recombinant Humanized Anti-HER2 Antibody (HerceptinTM) Enhances the
Antitumor Activity of Paclitaxel and Doxorubic against HER2/neu Overexpressing Human Breast Cancer Xenografts Cancer Res
1998;58:2825-2831.
9 J Baselga 2001 Phase I and II clinical trials of trastuzumab Annals of Oncology 12 (Suppl 1): S49-S55, 2001
10.P R Pohlmann, R Mernaugh et al 2009 Resistance to Trastuzumab in Breast Cancer Clin Cancer Res 2009;15:7479-7491
11.S A Sharbaf et al 2012 In silico design, contruction and cloning of Tratuzumab humanized monoclonal antibody: A possible biosimilar for Herceptin Advanced Biomedical Research/ January – March 2012/ Vol 1/ Issue 1
