Bài giảng công nghệ di truyền chương 5 cải biến và đột biến

Nhằm… • Xác định promotor hoặc các trình tự điều hòa • Xác định cấu trúc sơ cấp và thứ cấp của protein quyết định đến hoạt động của nó • Di truyền ngược: biến đổi kiểu gene  xem xét, đá

Cải biến và đột biến

Nhằm…

• Xác định promotor hoặc các trình tự điều hòa

• Xác định cấu trúc sơ cấp và thứ cấp của

protein quyết định đến hoạt động của nó

• Di truyền ngược: biến đổi kiểu gene  xem xét, đánh giá sự ảnh hưởng đến kiểu hình

Phương pháp

• Dựa trên enzyme cắt giới hạn

– Loại bỏ trình tự nhận biết đặc thù của RE

– Đưa vào trình tự nhận biết

– Xen đoạn

– Làm mất đoạn

• Đột biến định hướng bằng oligonucleotide

– Không dùng PCR

– Dùng PCR

Loại bỏ trình tự nhận biết của RE

Đột biến định hướng

Đột biến định hướng bằng PCR, megaprimer

Đột biến định hướng bằng PCR

Đột biến bằng overlap PCR

Bất hoạt gene

• Giúp khám phá vai trò sinh lý của gene

• Điều khiển sự biểu hiện một gene đột biến

• Bất hoạt một gen không mong muốn

• Phương pháp:

– Làm gián đoạn cấu trúc gene

– Kìm hãm sự biểu hiện của gene

Gián đoạn cấu trúc gene

Gián đoạn cấu trúc gene (cont.)

Làm câm lặng gene sau phiên mã (Post-transcriptional gene silencing, PTGS)

• Antisense RNA:

RNA sợi đơn, được đưa vào trong tế bào nhằm ức chế bộ máy phiên mã thông qua sự bắt cặp bổ sung với mRNA của gen mục tiêu

Làm câm lặng gene sau phiên mã (Post-transcriptional gene silencing, PTGS)

• RNA interference