ÁP DỤNG KỸ THUẬT QF – PCR ĐỂ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HỘI CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HỘI CHỨNG DOWN

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vnTài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Bác Sỹ Nội Trú ÁP DỤNG KỸ THUẬT QF – PCR ĐỂ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HỘI CHỨNG DOWN Ngườ

Trang 1

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Luận văn tốt nghiệp Bác Sỹ Nội Trú

ÁP DỤNG KỸ THUẬT QF – PCR ĐỂ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HỘI

CHỨNG DOWN

Người hướng dẫn: Ts Bs Hoàng Thị Ngọc Lan

Học viên: Vũ Thị Huyền

Trang 2

ĐẶT VẤN ĐỀ

 Dị tật bẩm sinh đang là vấn đề quan tâm lớn của toàn xã hội.

 HC Down: 120 – 150/100000 (Who 1972) – gánh nặng về

kinh tế và tâm lý cho gia đình xã hội.

 Sàng lọc và chẩn đoán phát hiện sớm DTBS: Siêu âm, Sàng

lọc ở huyết thanh mẹ, nuôi cấy NST, FISH.

 QF – PCR: khuếch đại STR – xác định số lượng alen trên điện

di – xác định bất thường số lượng NST.

Trang 3

MỤC TIÊU

1. Ứng dụng kỹ thuật QF – PCR để chẩn đoán

trước sinh hội chứng Down.

2. Đánh giá giá trị của kỹ thuật QF – PCR trong

chẩn đoán trước sinh hội chứng Down.

Trang 4

TỔNG QUAN

Kỹ thuật di truyền tế bào Kỹ thuật FISH

Trang 5

Kỹ thuật QF – PCR

- STR:

- Nguyên tắc kỹ thuật QF - PCR

Trang 6

Trang 7

Trang 8

A 2:1:TRISOMI 1:1:1 :TRISOMI

Trang 9

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

Trang 10

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Chọc hút ối ở các thai phụ có tuổi thai ≥ 16 tuần có các tiêu chuẩn:

 Kết quả sàng lọc Triple test hoặc Double test nguy cơ cao DS.

 Và (hoặc) có hình ảnh siêu âm bất thường.

 Và (hoặc) có tiền sử sinh con DS, sinh con dị tật.

 Và được sự đồng ý của thai phụ.

Trang 11

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Mẫu dịch ối

1ml để tách ADN 9 - 10ml nuôi cấy tế bào bằng phương

pháp cấy hở Tách chiết ADN

Đo độ tinh sạch của ADN

Kỹ thuật QF - PCR

Điện di mao quản trên máy đọc trình tự tự động ABI

3130 (3100) XL Phân tích dữ liệu bằng phần mềm Genemapper ID 3.2

Thu hoạch sau 9 - 12 ngày nuôi cấy

Nhuộm băng G

Phân tích KARYOTYP

Đối chiếu kết quả Kết luận về di truyền cho thai

Đánh giá giá trị của

QF - PCR

Tư vấn di truyền

Trang 12

Tổng số

Thành công 1.Tách chiết

Phenol/Chloroform 06 06

2.Kỹ thuật

QF-PCR

Thành phần phản ứng theo bảng 2.1 với tổng thể tích là

Thành phần phản ứng theo bảng 2.1 với tổng thể tích

-Thành phần cho 1 mẫu điện di với tổng thể tích 10,75µl.

-Biến tính -Chọn GeneScan 500 LIZ Size

-Máy đọc trình tự tự động

là ABI 3100 XL ứng dụng Fragment POP4, mao quản 36.

4.Phân tích

kết quả Bằng phần mềm chuyên dụng Genmapper ID 3.2.

Trang 13

Primer gắn huỳnh quang

dNTP

Buffer

Taq DNA

Bộ kit Aneufast

Trang 14

Trang 15

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Trang 16

KẾT QUẢ SÀNG LỌC THAI H/C DOWN

Trang 17

KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT ADN

Phương pháp tách ADN

bằng Chelex (84 mẫu)

Phương pháp tách ADN bằng Phenol/Chloroform

Trang 18

KẾT QUẢ KỸ THUẬT QF - PCR

Đặc điểm

Bệnh viện Phụ sản Trung Ương

Trang 19

Kết quả QF-PCR của thai

có 2 NST 21

Trang 20

Phù hợp với kết quả di

truyền tế bào

Trang 21

có 3 NST 21

Trang 22

Phù hợp với kết quả di

truyền tế bào

Trang 23

Trang 24

Kiểu NST

Kết quả QF – PCR (90 mẫu)

Kết quả di truyền tế bào

(90 mẫu)

Độ chính xác (%)

Số mẫu (n)

Tỷ lệ thai (%)

Số mẫu (n)

Tỷ lệ thai (%)

47,

XY, +21

47,

XX, +21

46,XX,t (21q;21q)

Nghi ngờ DS chuyển đoạn

Trang 25

có karyotype nghi

DS chuyển đoạn

Trang 26

Trang 27

Kết quả Karyotype của thai phụ có thainghi DS chuyển đoạn

Trang 28

KẾT LUẬN

đoán trước sinh DS ở các nơi: BVPSTW và Học viện quân Y và trung tâm nghiên cứu Gen – Protein

định một thai DS mà di truyền TB còn nghi ngờ)

trường hợp DS chuyển đoạn

Trang 29

KIẾN NGHỊ

đoán các trường hợp bất thường số lượng NST.

tại của kỹ thuật QF-PCR

Trang 30

Em xin trân trọng cảm ơn

Trang 31

Kết quả QF-PCR Khảm

46, XX/46, XY

Trang 32

70% (46,XY)

Trang 33

30% (46,XX)

Định dạng
Số trang	33
Dung lượng	2,72 MB