CHUYỂN GEN KHÁNG HIV Ở KHỈ VÔ MÈO

Con mèo nhà là một loài có hệ thần kinh phức tạp, các loài có thể truy cập với giá trị cụ thể trong các tình huống nghiên cứu nơi động vật gặm nhấm là không phù hợp trên cơ sở tính dễ mắc bệnh, kích thước, hoặc các yếu tố khác. Ví dụ, các nghiên cứu trong con mèo đã tiết lộ nhiều kiến thức hiện nay của chúng ta về các tổ chức của bộ não động vật có vú, đặc biệt là vỏ não, và người và mèo được mỗi ảnh hưởng với virus mãn tính AIDS đại dịch nhạy cảm với các yếu tố hạn chế các loài cụ thể. Một khả năng cho biến đổi thông tin di truyền mèo là cần thiết để nhận ra tiềm năng đặc biệt. Dưới đây chúng tôi giới thiệu một yếu tố hạn chế retrovirus, rhesus macaque TRIMCyp và GFP, vào dòng tế bào mầm mèo nhà. Phương pháp thiết lập trao đổi thông tin di truyền bởi biến đổi gen giao tử trực tiếp lần đầu tiên trong bất kỳ động vật ăn thịt. Chúng tôi sản xuất các kết quả thống nhất chuyển gen và quan sát biểu hiện phổ biến rộng rãi, không có khảm, và truyền tải dòng mầm mà không có F1 im lặng. Tế bào Lympho mèo TRIMCyp chuyển gen chống FIV nhân rộng. Cách tiếp cận này mang lại một khả năng đầu tiên để thử nghiệm thao tác các yếu tố hạn chế vi rút AIDS tại các hệ thống, mức độ chăn nuôi toàn bộ trong một loài nhạy cảm. Ngoài việc xác định nếu một loài có thể được thực hiện miễn dịch di truyền virus AIDS của nó, nó có thể được sử dụng để kiểm tra HIV1 gen tiềm năng điều trị, và để xây dựng mô hình mèo có liên quan đến các bệnh khác. Felis catus đã được thuần hóa trong hơn 9.000 năm và số lượng 0,51,0 tỷ trên toàn thế giới. Giám sát y tế của động vật đồng hành phổ biến ...

SỰ TRAO ĐỔI THÔNG TIN DI TRUYỀN HẠN CHẾ VIRUS AIDS

VÀO TRONG CON MÈO NHÀ.

Pimprapar Wongsrikeao1, Dyana Saenz1, Tommy Rinkoski1,

Takeshige Otoi2 & Eric Poeschla1,3

GIỚI THIỆU

Con mèo nhà là một loài có

hệ thần kinh phức tạp, các loài có thể

truy cập với giá trị cụ thể trong các

tình huống nghiên cứu nơi động vật

gặm nhấm là không phù hợp trên cơ

sở tính dễ mắc bệnh, kích thước, hoặc

các yếu tố khác Ví dụ, các nghiên

cứu trong con mèo đã tiết lộ nhiều

kiến thức hiện nay của chúng ta về

các tổ chức của bộ não động vật có

vú, đặc biệt là vỏ não, và người và

mèo được mỗi ảnh hưởng với virus

mãn tính AIDS đại dịch nhạy cảm với

các yếu tố hạn chế các loài cụ thể

Một khả năng cho biến đổi thông tin

di truyền mèo là cần thiết để nhận ra

tiềm năng đặc biệt Dưới đây chúng

tôi giới thiệu một yếu tố hạn chế

retrovirus, rhesus macaque TRIMCyp

và GFP, vào dòng tế bào mầm mèo

nhà Phương pháp thiết lập trao đổi

thông tin di truyền bởi biến đổi gen

giao tử trực tiếp lần đầu tiên trong bất

kỳ động vật ăn thịt Chúng tôi sản

xuất các kết quả thống nhất chuyển

gen và quan sát biểu hiện phổ biến

rộng rãi, không có khảm, và truyền tảidòng mầm mà không có F1 im lặng

Tế bào Lympho mèo TRIMCypchuyển gen chống FIV nhân rộng.Cách tiếp cận này mang lại một khảnăng đầu tiên để thử nghiệm thao táccác yếu tố hạn chế vi rút AIDS tại các

hệ thống, mức độ chăn nuôi toàn bộtrong một loài nhạy cảm Ngoài việcxác định nếu một loài có thể đượcthực hiện miễn dịch di truyền virusAIDS của nó, nó có thể được sử dụng

để kiểm tra HIV-1 gen tiềm năng điềutrị, và để xây dựng mô hình mèo cóliên quan đến các bệnh khác

Felis catus đã được thuầnhóa trong hơn 9.000 năm và số lượng0,5-1,0 tỷ trên toàn thế giới Giám sát

y tế của động vật đồng hành phổ biếnnhất này là rộng lớn, và hơn 250 bệnh

lý di truyền phổ biến cho cả mèo vàcon người đã được biết đến Bộ genFelis catus gần đây đã được giải trình

tự và lắp ráp sắp xảy ra Hơn 90% cácgen xác định con mèo có mộthomolog, và so sánh với những conchuột có ít sắp xếp lại bộ gen Kích

thước trung bình, khả năng sinh sản

nhiều, giống với các hệ thống con

người, sự phong phú, chi phí khiêm

tốn và sự phức tạp của một hệ thần

kinh của thú ăn thịt làm cho con mèo

có giá trị trong các nghiên cứu thử

nghiệm khác nhau, từ sinh học thần

kinh di truyền, nhãn khoa và bệnh

truyền nhiễm khác nhau Chúng bao

gồm các điều kiện mà trong đó những

con chuột là không hữu ích trên cơ sở

tính dễ mắc bệnh, kích thước cơ quan

hoặc các yếu tố khác Các biến đổi di

truyền là như vậy, quan tâm cho cả

nghiên cứu sức khỏe con người và

con mèo và có tiềm năng để phát triển

bảo vệ khỏi tác nhân gây bệnh dịch để

giải phóng khác nhau, loài ngoại mèo,

tất cả trong đó 36 con phải đối mặt

với các mối đe dọa tuyệt chủng

Trên thế giới có hai đại dịch

AIDS, một trong những con mèo nhà

và một đại dịch khác ở người Các

vius mãn tính là nguyên nhân gây

bệnh, feline immuno- deficiency

virus (FIV) và HIV-1, được đánh giá

cao, chúng tương tự trong cấu trúc

gene, biểu hiện bệnh và tế bào chủ sử

dụng yếu tố phụ thuộc Sự khác biệt

giữa các lentivirus cũng có nhiều

thông tin và có khả năng khai thác Ví

dụ, các yếu tố hạn chế lentivirus cific

lentiviral như TRIM và APOBEC3

protein-s6 trình hạn chế FIV và

HIV-1 với mẫu khác biệt Những gen nàychưa được nghiên cứu một cách cókiểm soát ở cấp độ hệ thống và cácloài bằng cách giới thiệu vào hệ gencủa một loại virus AIDS dễ mắc cácloài (linh trưởng hoặc thú họ mèo trênthế giới) Với những thách thức cốhữu để biến đổi di truyền ở khỉ, virus–sus- ceptible AIDS mèo sẽ được dùngriêng cho những nghiên cứu như vậynếu nó có thể đưa vào bởi các phươngpháp di truyền được sử dụng ở chuột.Ngược lại với các loài linh trưởng,các loài mèo thiếu kháng virusTRIM5α genes11 nhưng có potentlyhạn chế proteins9,10 APOBEC3,trong đó thiết lập khả năng hấp dẫn đểthử nghiệm gen như vậy ở cấp toàn bộđộng vật, cho trao miễn dịch gen dựatrên bản thân họ hoặc thiết kế vari -ants12, 13 và có khả năng để pháttriển mô hình bệnh

Để nhận ra tiềm năng củacác loài virus học và mô hình khôngvirus học, một phương tiện để thựchành sửa đổi hệ gen của con mèo làcần thiết Tế bào soma chuyển nhân(SCNT) gần đây đã được sử dụng đểtạo ra những con mèo thể hiệnproteins14,15 huỳnh quang Tuynhiên, hiệu quả của nhân bản vô tínhđộng vật là rất thấp, và kết quả SCNT

bị lỗi trong lập trình lại biểu sinh ởhầu hết các phôi Động vật có vú nhân

bản với tổng giải phẫu dường như

bình thường có thể có nhiều bất

thường do sự thất bại để xóa và lập

trình lại bộ nhớ biểu sinh hoàn toàn

Hai phương pháp chính để

tạo ra những con chuột biến đổi gen là

tiêm DNA vào nhân non của phôi thụ

tinh và tiêm tế bào gốc phôi biến đổi

gen (ESC) dòng vào giai đoạn đầu của

phôi Tuy nhiên, động vật có vú

nonrodent, tiêm vào nhân non là

không hiệu quả, và phương pháp thứ

hai là bị chặn bởi các thiếu ESC

germline có khả năng Sự biến đổi di

truyền với germline trans - mision đã

đạt được trong một số động vật có vú

bởi vector lentivirus tiêm vào tế bào

trứng hoặc hợp tử đơn bào Điều này

đã không đạt được ở bất kỳ loài độngvật ăn thịt Dưới đây chúng tôi trìnhbày noãn bào được nhắm mục tiêubiến đổi di truyền lentivirus trong conmèo nhà

bị nhận để thiết lập mèo biến đổigene tối ưu (Fig 1a) Chúng tôi thuđược từ giao tử cả hai giới mà khôngcần thủ tục bổ sung bằng vi phẫu cơquan sinh dục động vật bị loại bỏ saukhi phun hoặc thiến

Hình 1 | chuyển gen thế hệ phôi mèo

(a)giao thức chuyển gene Tối ưu hóa PMSG: mang thai hormonkích thích sinh dục huyết thanh ngựa; HCG: hormon kích thích sinh dụcmàng đệm ở người; IU, đơn vị quốc tế; IVM: làm chín invitro; IVC: nuôicấy invitro.

(b) Biểu hiện gen trong nuôi invitro phôi trong giai đoạn đầu pháttriển (blastocyst) sau khi tiêm pre – IVF lentiviral vector vào trong noãn bàomèo Chuyển gen GFP vào phôi mèo trong giai đoạn đầu phát triển từ noãnbào trước khi thực hiện IVF với TsinG Ảnh tiêu điểm của biến đổi gen(TBDmGpT), phôi nang miễn dịch với virus thấy có gắn tín hiệu HA-taggedrhTRIMCyp, GFP gene phát huỳnh quang của sứa, DAPI nhuộm thấy hìnhảnh DNA hạt nhân của hai gene được kết hợp

trứng mèo nhà để tiêm lentivirus

vector TSinG5 quanh bề mặt noãn

bào (PVSMI); chúng tôi thực hiện

tiêm 10-12 h trước hoặc 10-12 giờ sau

khi thụ tinh ống nghiệm (IVF) (Hình

1 bổ sung.) Sau đó chúng tôi nuôi

những phôi đó cho đến giai đoạn phôi

nang (ngày 7) So sánh tỷ lệ phát triển

của phôi (bảng phụ 1 và 2) và tăng

cường biểu hiện GFP (gọi là GFP

trong suốt) (Hình 1b) cho thấy tỷ lệ

chuyển gene thành công đều ở mức

cao (> 75%) và quá trình này được

dung nạp tốt, như sự phân chia và túi

phôi tỷ lệ hình thành không khác biệt

đáng kể giữa PVSMI và phôi chứng

(Bảng 1) Không có khác biệt về hình

thái hoặc tổng số tế bào và không có

ưu tiên cho tiêm vector thời giantrước hoặc sau khi thụ tinh ốngnghiệm (Bảng 1) Tuy nhiên, khảmghi được bằng biểu hiện proteinhuỳnh quang không đồng dạng trongtúi phôi là không đáng kể khi chúngđược tiêm vectơ trước khi thực hiệnIVF nhưng là đáng kể với tiêm saukhi thụ tinh ống nghiệm(Bảng 1)

(f) Để điều tra nhiều hơnmột gen chuyển có thể được thể hiệntrong phôi mèo trong một bước duynhất bởi PVSMI, chúng tôi vi tiêm

418 tế bào trứng với các vectorlentivirus đơn hoặc kép gen chuyển

Tổ hợp gen chuyển là gen mã hóaGFP, GFP cộng RFP, hoặc GFP cộngrhesus macaque TRIMCyp (Hình 1.)

Sự kết hợp sau này đã được thể hiện

từ hoặc là một promoter kép hoặc là

một 2A đơn peptide liên kết

preprotein Sau khi tiêm, chúng tôi

thực hiện tiêm với tinh trùng mèo 10

giờ sau đó Chúng tôi luôn quan sát

phôi phổ biến, biểu hiện phong phú

của cả hai protein được mã hóa bởi

gen vectơ kép trong phôi nang mèo

khi tiêm vector lentivirus trước khi

thực hiện IVF (hình 1b Và Bảng 2)

Chúng tôi quan sát thấy không có tác

dụng có hại trước IVF trên phát triển

của phôi hoặc biểu hiện GFP không

phân biệt sự kết hợp gen chuyển

(Bảng 2) Ngoài ra, các peptide 2A

hoặc promoter kép là mỗi một cách

hiệu quả để biểu hiện đồng thời

(g)Yếu tố hạn chế mèo

biến đổi gen và thế hệ GFP.

(h)Quá trình từ bộ sưu tập

trứng chuyển vào ống dẫn trứng mất

3-4 ngày (Hình 1a.) Chúng tôi lựa

chọn ngẫu nhiên phôi cho cắm sâu

vào từ tế bào trứng phân cắt mà đã

phải chịu tác động của IVF và

chuyển chúng vào ống dẫn trứng bằng

phẫu thuật tiếp xúc lúc 48-72 h sau

lentivirus vector dẫn truyền Chúng

tôi thực hiện không có sự chọn lọc

trước cho biểu hiện gen sau khi tiêm

(phôi được chọn không có bất kì

huỳnh quang đáng tin cậy vào thời

điểm chuyển giao) Chúng tôi thực

hiện chuẩn bị đồng bộ hormon chuyển

vào mèo bởi một môi trường ánh

sáng-tối 14-10 h Chúng tôi quản lý

để mèo mang thai dưới tác dụnghormon kích thích sinh dục của huyếtthanh ngựa vào ngày 4 và hormonkích thích sinh dục trên màng đệmngười vào ngày -1 với lentivirusvector truyền vào, và giao phối phóngthích chúng từ ngày tiêm hormon kíchthích sinh dục người vào cho đếnngày trước khi chuyển phôi và thắtmột ống dẫn tinh đối với mèo đực,xác nhận không còn tinh trùng mèođực để gây rụng trứng và hình thànhthể vàng vì trong khi phẫu thuật sẽ bịthủng nang với một cây kim, nếukhông phải tự nhiên rụng trứng

(i) Hai mươi hai phôichuyển giao có kết quả trong nămmang thai (có nhãn A-E), năm sinh và

ba chú mèo con sống (Bảng 1) Chúngtôi đã đạt được một tỷ lệ cao của biếnđổi gen, với 10 trong số 11 con đượcsinh ra kiểm tra thấy đã được biến đổigen (1/12, một cách tự nhiên bị sẩythai 10 ngày non, đã được tiêu thụ bởicon mẹ thay thế và không thể đượckiểm tra) Ba con đực và hai con mèobiến đổi gen cái, tên là TgCat1-5,được sinh tự nhiên và tất cả năm đãbiến đổi gen (Hình 2, bảng 1 và bổsung hình 2) TgCat1 (đực), TgCat2(đực) và TgCat3 (cái) sống sót, trongkhi những con mèo thứ tư và thứ nămchết (Bảng 1) TgCats1-3 là mạnh mẽ

từ khi sinh ra, cho ăn, chơi, phát triển

và xã hội hóa bình thường và khỏe

mạnh, con TgCat2 bị ẩn tinh hoàn Nó

cũng có viêm da ngứa không liên tục,

mà có thể là do dị ứng thực phẩm

Trong năm đầu tiên phát triển nó đã

được thoát vị bụng và kích thích đưa

tinh hoàn xuống, nó đã được chữakhỏi bằng phẫu thuật Mặc dù chúng

ta không thể loại trừ vector chèn genđộc tính trong TgCat2 nhưng cácđiều kiện này không phải là một hộichứng dễ nhận biết

TgPre5 được tiêu thụ bởi người mẹ thay thế và không thể phân tích được Fan kém phát triển, thai nhi không chuyển gen giao 6 h sau TgCat3 Không mang thai là kết quả của hai chuyển phôi vector tải nạp TBDmGpR.

(n)

(o)Souther blot trên DNA sau khi được cắt bởi enzyme cắt giới hạn từ bachú mèo con biến đổi gen sống, từ TgCat4 và từ bốn bào thai bị sẩy thai cho thấyrằng tất cả tám là biến đổi gen, với 6-12 chèn mỗi con mèo (Fig 2b) Xét nghiệmPCR trên bộ gen DNA xác nhận mức độ cao của sự chuyển đổi gen (Hình 2c).Băng lai Southern blot là cụ thể, như tất cả là không có sự kiểm soát mèo DNA,khác nhau từ mèo để mèo lớn hơn so với kích thước tối thiểu dự đoán xác địnhbằng khoảng cách từ vị trí hạn chế kết thúc của vector tiền virus, lập bản đồ hệ gencủa con mèo (Bảng phụ 3)

(p)

(q)

(r) Hình 2 |mèo con mang gen chuyển

(s) (A) ánh sáng huỳnh quang bao quanh và 485 hình ảnh nM ánh sáng chiếu sáng cho tín hiệu GFP vào các thời điểm chỉ sau khi sinh cho TgCat3 Trong

30 ngày và 5 tháng hình ảnh đã được chụp ảnh TgCat3với một con mèo đối chứng không chuyển gen (bên phải) Lông, móng vuốt, râu ria, mũi, lưỡi và niêm mạc miệng họng huỳnh quang là hiển nhiên; huỳnh quang không rõ ở vùng lông đen.

(t) (B) hiển thị kết Southern blot của DNA từ TgCat1, TgCat2 và TgCat3 khoảng cách từ ngã ba DNA vật chủ vectơ để gen AflIII gần nhất hoặc vị trí BamH1trong cặp cơ sở; P, promoter; LTR, lặp lại đoạn cuối dài; G, EGFP (mẫu dò); T, TRIMCyp DNA ở đoạn cuối đã được phân giải với AflIII (blot trái) ADN hệ gen từ tế bào đơn nhân máu ngoại vi đã được phâng giải với BamH1 (blot phải) Sau khi điện di và chuyển sang Southern blot, màng được khảo sát cho tổng hợp DNA vector như được chỉ ra (C) bản sao DNAđược khuếch đại PCR bán định lượng của mèo con, DNA sử dụng mồi cho chuỗi rhTRIMCyp.

(u)DNA trong mỗi tế bào lưỡng bội và bình thường hóa với tín hiệu thu được với mồi GAPDH.

(v)

(w)

được chỉ định (c) biểu hiện GFP trong PBMCs so với mèo ở những tháng tuổi khác nhau (trái) và biểu hiện GFP trong PBMCs từ một thời điểm duy nhất, như

là một chức năng của các ngày trong nuôi ex vivo; lấy mẫu ở đây là lúc 3-4 tháng tuổi (mũi tên) (d) PBMCs từ mèo bị nhiễm 105 Crandell (CrFK) tế bào thận mèo đơn vị tế bào gây lây nhiễm của FIV vào ngày 0, rửa sạch vào ngày 1 và sau đó theo sau lấy mẫu cho hoạt động sao chép ngược bề mặt xác định sau 48 h như hình vẽ RT, sao chép ngược; SSC, phía phân tán.

(ad)

(ae) .

và kiểu hình của gen chuyển

(ag) TgCat3, trong đó

gen chuyển biểu hiện được thúc đẩy

bởi các tiêu chuẩn (0,52-kilobase)

virus gây nhiễm trùng cơ hội ở bệnh

nhân HIV nhanh chóng tiến triển

thành AIDS và tử vong ở con người

(HCMV) promoter của vector

TSinT2AG, đã sáng huỳnh quang và

ổn định màu xanh lá cây trong lớp da

của động vật và bề mặt niêm mạc hầu

họng (Hình 2a.) Nhưng biểu mô bề

mặt ít tươi sáng cho TgCat1 và

TgCat2 (vector TBDmGpT) Đối với

những chú mèo con sống, chúng tôi

thu thập các tế bào cho phân tích

protein bởi sự cạo niêm mạc miệng

(trong đó cho thấy GFP-thể hiện các

tế bào biểu mô vảy), máu và tinh dịch

Cả hai gen được thể hiện trong hoạt

động bên ngài tế bào đơn nhân máu

(PBMCs) nhưng với sự thay đổi đáng

chú ý (Hình 3a, b) Tỷ lệ phần trămcủa các tế bào GFP dương như đượcxác định bởi FACS là 15-80% trongTgCat1, TgCat2 và TgCat3 và tăngdần như mèo con trong độ tuổi (Hình3b., C) TgCat2 có các tế bào tích cựcGFP nhất trong PBMC chia thànhnhiều ngăn, được khoảng 65% GFPtích cực sớm trong cuộc sống và sau

đó là 70-75% sau (Hình 3a-c và bổsung hình 3) Một số khía cạnh cụ thể

ở đây là thú vị để phát triển mô hình

mà sẽ phụ thuộc vào tế bào lymphohoặc biểu hiện dòng tế bào mono Thứnhất, không phân biệt promoter được

sử dụng, FACS và phát hiệnimmunoblot của GFP và rhTRIMCyptrong PBMCs ở mèo sống kích hoạttheo yêu cầu của phytohemagglutin-E(PHA-E) và interleukin 2 (IL-2), vàbiểu hiện GFP tăng dần theo thời giannuôi cấy ( Hình 3c) Cường độ huỳnhquang đã biến đổi (Hình 3b 3a và bổsung hình ) Thứ hai, biểu hiện GFP

từ một CMV tối thiểu (mCMV) yếu tốpromoter tiếp giáp với promoter PGK

có hiệu quả trong TgCat2, nhưng

chúng tôi chỉ quan sát được biểu hiện

GFP thấp với các vector cùng trong

TgCat1, mặc dù ngay cả trong biểu

hiện GFP mèo này tăng đều đặn từ

tích cực hiếm hoi đến 14,8% của 20

tháng (Fig 3b, c) Thứ ba, tất cả ba

con mèo bày tỏ hemagglutinin epitope

(HA) mỏm gen rhTRIMCyp trong

mèo chuyển gen PBMC số lượng lớn

như phát hiện bởi điểm yếu miễn dịch

(Fig 3a) TgCat1 luôn hiển thị nhiều

rhTRIMCyp hơn hai con mèo sống

khác bằng cách phân tích dấu vết định

lượng bằng Souther blot Tuy nhiên,

loại protein này là rất khó khăn đểphát hiện GFP, và đã hình dung rõràng bằng miễn dịch huỳnh quang,bằng cách sử dụng một kháng thể đểcác tag HA, chỉ một phần nhỏ của tếbào (Hình bổ sung 3) Mặc dù vậy,rhTRIMCyp của PBMCs mèo biếnđổi gen hiển thị kháng FIV nhân rộng,với cuộc kháng chiến vĩ đại nhất đểnhân rộng nhìn thấy trong các tế bào

từ những con mèo mà bày tỏ nhấtrhTRIMCyp (TgCat1; Hình 3d) Cáckháng FIV nhân rộng là một phần,như dự đoán cho quần thể tế bào thểhiện như một phầnyếu tố hạn chế này

(ah)

(aj)Hình 4 | truyền dòng mầm và biểu hiện trong đời con F1 Tinh trùng

từ hai con đực (20 tháng) và điều khiển một mèo không chuyển gen mèo đã được lọc, ăn viên, rửa sạch và sau đó tinh chế bằng các kỹ thuật swim - up Tinh trùng DNA đã phải chịu thời gian thực PCR định lượng với mồi khuyếch đại trình tự GFP Hình ảnh cho thấy bốn F1 thế hệ con cháu của một giao phối của TgCat1 và TgCat3, chụp ảnh cho biểu hiện GFP; lông đen như vậy l àm d ừng biểu hiện huỳnh quang của gen GFP mà trong con mèo đen chỉ móng vuốt đã thấy rõ huỳnh quang màu xanh lá cây (ở giữa, bên phải).

(ak)

(al)Khả năng sinh sản,

truyền tải dòng mầm và biểu hiện gen

chuyển F1

(am) Rửa swim-up tinh

trùng tinh khiết từ hai con đực có khả

năng vận động bình thường và mạnh

mẽ thể hiện gen chuyển được xác định

bằng phương pháp PCR (Fig 4) Phù

hợp với kết quả này và với sự thiếu

phôi khảm khi IVF được thực hiện

sau khi tiêm vector (Bảng phụ 1)

truyền dòng mầm đã được dễ dàng đạt

được bằng cách giao phối trực tiếp,

với tất cả các thế hệ con cháu được

chuyển gen Do đó, quy trình chuyển

gen đảm bảo khả năng sinh sản, và

các dòng mầm được biến đổi Biểu

hiện gen chuyển tồn tại ở con F1 củacha mẹ F0 chuyển gen, chỉ ra rằng sự

im lặng đã không xảy ra (Hình 4).Giao phối của TgCat1 với ba con mèocái không chuyển gen sản xuất nămmèo con bổ sung từ ba thai Tương tựnhư các bố, nó có ít bề mặt xanhhuỳnh quang nhưng đã mạnh mẽ'PCR- và Southern blot dương' (dữliệu không hiển thị); những con chếtquanh kỳ sinh do chứng khó sinh vớimột tử cung co bên dưới lại Như vậy,tất cả những con mèo F1 là biến đổigen; 8 trong số 9 vẫn còn sống vàkhỏe mạnh

(an)

(ap)

(ar)

(as)