CHƯƠNG 1 CÁC ENZYME DÙNG TRONG TẠO DÒNG PHÂN TỬ

Tổng hợp sợi thứ 2 của cDNA trong tạo dòng cDNA Tổng hợp DNA sợi đôi từ các khuôn mẫu sợi đơn trong phát sinh đột biến in vitro Phát sinh đột biến điểm trực tiếp bao gồm Dloops. Tăng chiều dài chuỗi sản phẩm trong mọi phản ứng được xúc tác bởi DNA polymerase trên khuôn mẫu dài.

CÔNG NGHỆ DNA TÁI TỔ HỢP

CHƯƠNG I: CÁC ENZYME DÙNG TRONG TẠO DÒNG PHÂN TỬ

ĐHKH HUẾ

I Các enzyme hạn chế

II Các enzyme trùng hợp

III Các enzyme gắn

IV Các enzyme phân cắt

V Các protein liên kết DNA sợi đơn

NỘI DUNG CHÍNH

Phân loại

Type III

Type I

Type II

Các enzyme hạn chế type II

Cách gọi

tên

Chữ thứ nhất của tên chi

Ví dụ : EcoRI => Escherichia coli + chủng RY13 , I :

bậc xác định đầu tiên trong vi khuẩn

Hai chữ đầu của tên loài

Eco

Chủng liên quan + Bậc xác định

RI

Các enzyme hạn chế type II

- Enzyme nh n bi t các trình t đ c hi u g m : ậ ế ự ặ ệ ồ4,6 ho c 8 c p base có trình t đ i x ng đ o ặ ặ ự ố ứ ả

ngược nhau (palindrome)

Vd: Enzyme EcoRI nhận biết chuỗi 6 nucleotide

Đầu bằng

Cắt ở vị trí chính giữa trình tự nhận biết

Nối các đoạn DNA lại:

Ngoài enzyme ligase,có thể sử dụng các linker hay dùng terminal transferase

Đầu dínhvà đầu bằng

Đầu dính và đầu bằng

Nối đầu dính

Đầu dính và đầu bằng

Nối đầu bằng

3 Isochizomer

Vd : MboI và Sau3AI cùng nhận biết trình tự

BamHI nhận biết trình tự

* Khái ni m ệ

4 Methyl hóa

Bảo vệ DNA chống lại sự phân hủy của các enzyme cắt hạn chế

dam dcm

4 Methyl hóa

Tất cả các chủng E coli đều chứa 2enzyme methyl hóa DNA là: dam và dcm

Trung

Th p (L) ấ Th p ấ 100 50 10 1

II Các enzyme trùng hợp

1 DNA polymerase

1 DNA polymerase I của E.coli

ng d ng

2 Đoạn Klenow của DNA polymerase I của

E.coli

3 DNA polymerase của bacteriophage T4

ng d ng

4 Taq DNA polymerase

Đ ượ ử ụ c s d ng nhi u trong k thu t PCR ề ỹ ậ

SX l ượ ng l n ớ RNA t DNA ừ

đ ượ ạ c t o dòng

3 Enzyme phiên mã ngược

4 Terminal transferase

ng d ng

• Thêm đuôi đ ng trùng h p (homopolymer) ồ ợ 

đ u so le cho phân t DNA trong t o dòng ầ ử ạ

• Đánh d u đ u 3’OH c a DNA ấ ầ ủ  trình t gen ự

III Các enzyme g n ắ

3.1 Bacteriophage T4 DNA ligase

3.2 Bacteriophage T4 RNA ligase

3.3 Bacteriophage T4 polynucleotide kinase

3.4 Alkaline phosphatase ( E.coli và ru t bê) ộ

IV Các enzyme phân c t ắ

Các nuclease th ườ ng s d ng : ử ụ

4.1 Dnase I

Deoxyribonuclease I

Enzyme Mg2+

3’P

3’OH 5’

3’P

E 3’OH 5’

4.4 Ribonuclease (Rnase A)

4.5 RNase H

V Các protein liên k t DNA s i đ n ế ợ ơ

• K t h p v i DNA s i đ n và không k t h p ế ợ ớ ợ ơ ế ợDNA s i đôiợ

Trong t o dòng phân t ạ ử

• Ứ ng d ng : ụ

- Phát sinh đ t bi n đi m tr c ti p bao g m D-ộ ế ể ự ế ồloops

- Tăng chi u dài chu i s n ph m trong m i ph n ề ỗ ả ẩ ọ ả

ng đ c xúc tác b i DNA polymerase trên

khuôn m u dài ẫ

C M N TH Y và Ả Ơ Ầ

NGHE !