PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM

PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM... Phạm vi áp dụng :– Phương pháp dùng để phát hiện Shigella trong các loại thực phẩm 2... Định nghĩa:• Shigella là trực khuẩ

PHƯƠNG PHÁP PHÂN

TÍCH ĐỊNH TÍNH

SHIGELLA TRONG THỰC

PHẨM

1 Phạm vi áp dụng :

– Phương pháp dùng để phát hiện Shigella trong các

loại thực phẩm

2 Tiêu chuẩn tham chiếu:

– FDA – BAM, 2001, chapter 6 – Shigella,

Bacteriological Analytical Manual Online.

3 Định nghĩa:

• Shigella là trực khuẩn Gram âm, hiếu khí và

kỵ khí tùy nghi, không sinh bào tử và không di

động, thuộc họ Enterobacteriaceae

• Có phản ứng LDC âm tính, không lên men

đường Lactose trong 2 ngày

• Lên men Glucose và một số đường khác sinh acid nhưng không sinh hơi

• Không có khả năng sử dụng citrate và

malonate

4 Nguyên tắc:

• Tăng sinh kỵ khí trong môi trường lỏng chọn lọc một lượng mẫu xác định

• Cấy phân lập huyền phù tăng sinh sang môi

trường rắn chọn lọc

• Những khuẩn lạc nghi ngờ sẽ được thử nghiệm sinh hóa và kháng huyết thanh

5 Môi trường và thuốc thử:

• Canh Shigella với novobiocin

• Thạch MacConkey (MC)

• Canh Glucose

• Motility test medium (semisolid)

• Thạch triple sugar iron (TSI)

• Tryptone

• Thuốc thử Kovac’s

• Kháng huyết thanh của Shigella: Shigella polyvalent

nhóm A, B, C, D

• 6 Thiết bị chính:

• Tủ ấm 37.0 ± 1.0oC

• Bể điều nhiệt 42 ± 0.2 oC và 44 ± 0.2 oC

• Bình ủ kỵ khí với GasPak

7 Quy trình: 25 gam mẫu +

225g Shigella broth

Rót dịch nổi vào bình

ủ kỵ khí 42.0 o C trong 20 ± giờ

Ủ 35 o C, 20 ± 2 giờ

Ủ 37 o C, 20 ± 2 giờ

Cấy ria lên môi trường

MacConkey

Đọc kết quả

và cấy chuyển lên TSA

Thử nghiệm sinh hóa

và kháng huyết thanh

7.4 Thử nghiệm sinh hóa

Môi trường thử Biểu hiện Đặc tính

1 Canh Glucose Môi trường chuyển vàng, không sinh hơi Lên men glucose glucose (+)

sinh acid, Gas (-)

2 Lysine Decarboxylase

(LDC) Môi trường chuyển vàng LDC (-)

3 Thạch thử tính di động

(Mortility agar)

Vi khuẩn không mọc lan khỏi đường cấy Không di động

4 Canh Tryptone (44 o C) Không xuất hiện vòng đỏ với thuốc thử Kovac’s Indol (-)

5 Thạch Triple sugar iron

(TSI)

Phần nghiêng đỏ, phần đáy vàng, không chuyển màu đen và không sinh hơi

Lactose(-),sucrose(-) glucose (+), H 2 S (-), Gas (-)

7.5 Khẳng định bằng kháng huyết thanh

Kháng huyết thanh được sử dụng thuộc nhóm A, B,

C và D

7.6 Báo cáo kết quả

Có (hoặc không có) Shigella trong 25g mẫu.

Định lượng

Pseudomonas aeruginosa

bằng phương pháp màng lọc

ISO 16266: 2006

ISO 16266:2006 specifies a method for the isolation and enumeration of Pseudomonas

aeruginosa in samples of bottled water by a membrane filtration technique This method

can also be applied to other types of water with a low background flora, for xample, pool

waters and waters intended for human consumption

Sơ đồ

Water sample filtration

Membrane

CN agar

Nutrient agar

Raeding at λ= 366 nm- UV light

Reading/ enumeration

Wood lamp

Nessler reagent

Enumeration fluorescent colonies

Reading at λ= 366 nm- UV light

King B Acetamid broth Oxidase test

Reading/ enumeration

ammonia producing colonies

Pseudomonas agar base/CN-agar

Môi trường thạch để phát hiện Pyocyanin của Pseudomonas

1.Thành phần môi trường cơ bản:

• Gelatin peptone: 16,0 g

• Casein hydrolysate: 10,0g

• K2HP04 khan: 10,0 g

• MgCl2 khan : 10,0g

• Agar : 11-18,0g

• Glycerol: 10,0 ml

• Nước cất: 1000 ml

2.Thành phần CN supplement:

• Hecxadecyltrimethyl ammonium bromide(cetrimide)0,2g

Giải thích kết quả

Khuẩn lạc trên

CN agar

trên canh acetamide

Thử nghiệm Oxidase

Phát hùynh quang trên

Phát hùynh quang (Không xanh

lục hay xanh lá cây)

NT: không kiểm tra