khảo sát thành phần hóa học của cao ethyl acetate của địa y roccella sinensis (nyl ) hale thu hái ở bình thuận

Các loại hợp chất khác nhau và các dẫn suất của depside được chiết từ các chi Evernia, Parmelia và Ramalina, một số có mùi hương hấp dẫn được dùng trong xà phòng và nước hoa.. Với những

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA HÓA

BỘ MÔN HÓA HỮU CƠ

_ _

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

Người hướng dẫn : ThS Dương Thúc Huy

Sinh viên th ực hiện : Phan Hoài Thu

Mã số sinh viên : 35106049

Tp Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2013

Cetraria islandica bán rộng rãi trong các tiệm bào chế thuốc ở Thụy Điển và dùng để

điều trị bệnh đái tháo đường, bệnh phổi và bệnh viêm mũi Peltigera canina được sử

dụng ở Ấn Độ như một dược phẩm làm giảm các cơn đau gan

Ngoài công dụng chữa bệnh, địa y còn được sử dụng làm thực phẩm, mỹ phẩm, xà phòng, nước hoa Các loại hợp chất khác nhau và các dẫn suất của depside được chiết từ

các chi Evernia, Parmelia và Ramalina, một số có mùi hương hấp dẫn được dùng trong

xà phòng và nước hoa Đặc biệt, địa y được xem như là các chất chỉ thị sinh học cho ô nhiễm môi trường

Với những công dụng đó, địa y được nhiều nhà hóa dược nghiên cứu, nhiều hợp

chất tự nhiên được cô lập và một số được xác định có hoạt tính kháng khuẩn, kháng ung thư, kháng virut, giảm đau, hạ sốt, …

Địa y là thực vật bậc thấp, là kết quả của sự cộng sinh của tảo và nấm Nhờ dạng

sống này, địa y có thể sống được ở nhiều nơi trên đất, đá, thân cây, trong những điều

kiện khác nghiệt và khô hạn của vùng nhiệt đới Ở Việt Nam, người ta dễ dàng tìm thấy

sự có mặt của địa y ở những nơi quen thuộc với sự phân bố phong phú và đa dạng Vậy

mà từ trước đến nay ở Việt Nam chưa có tác giả nào nghiên cứu về hóa học cũng như ứng dụng của địa y Để góp phần vào sự phát triển của khoa học Việt Nam, chúng tôi đã

lựa chọn loại địa y Roccella sinensis (Nyl.) Hale (họ Rocellaceae) thu hái ở thành phố

huyện Liên Hương, tỉnh Bình Thuận, Việt Nam để nghiên cứu

MỤC LỤC

LỜI MỞ ĐẦU 1

MỤC LỤC 2

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 4

DANH MỤC HÌNH ẢNH-SƠ ĐỒ-BẢNG BIỂU 5

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 6

1.1 KHÁI QUÁT VỀ ĐỊA Y 6

1.1.1 Định nghĩa và phân loại địa y 6

1.1.2 Vai trò của các hợp chất tự nhiên trong địa y [4] 6

1.1.3 Một số ứng dụng của địa y 7

1.2 HOẠT TÍNH CỦA CÁC HỢP CHẤT TỪ ĐỊA Y 7

1.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VỀ CÁC HỢP CHẤT CÓ TRONG ĐỊA Y 7

1.4 MÔ TẢ THỰC VẬT ROCCELLA SINENSIS (NYL.) HALE (ROCCELLACEACE) 8

1.5 MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ CÓ TRONG ĐỊA Y THUỘC CHI ROCCELLA ĐÃ ĐƯỢC NGHIÊN CỨU 9

1.5.1 Các acid béo 9

1.5.2 Các hợp chất carbohydrat 9

1.5.3 Các hợp chất chromane và chromone 9

1.5.4 Các hợp chất dibenzofurane 9

1.5.5 Các hợp chất depside 10

1.5.6 Các hợp chất carotenoid 10

1.5.7 Các hợp chất aliphatic vòng 10

1.5.8 Các hợp chất chứa N 10

1.5.9 Công thức hóa học các hợp chất 10

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 13

2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 13

2.1.1 Hóa chất 13

2.1.2 Thiết bị 13

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU 13

2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 14

2.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO ETYL AXETAT 15

2.4.1 Sắc kí cột cho cao EA1 15

2.4.2 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn EA1.2 (15.137g) 16

2.4.3 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn EA1.2.3 (1.920g) 17

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18

3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS-C1a 19

3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS-C2 19

3.3 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS-C1 20

3.4 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS- C15 23

Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 26

4.1 KẾT LUẬN 26

4.2 ĐỀ XUẤT: 27

TÀI LIỆU THAM KHẢO 28

Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear magnetic resonance) Heteronuclear Single Quantum Correlation

Heteronuclear Multiple Bond Coherence Proton Nuclear Magnetic Resonance Carbon Nuclear Magnetic Resonance High-Perfo Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

Hằng số tương tác spin-spin Part per million

Tia cực tím (Ultra violet) Hight Resolution- Electro Spray Ionization -Mass Spectrometry Ether dầu

Ethyl acetate Chloroform Methanol Acid Acetic

DANH MỤC HÌNH ẢNH-SƠ ĐỒ-BẢNG BIỂU

Hình 2: Sinh tổng hợp của các hợp chất từ địa y 08

2 Sơ đồ

Sơ đồ 1: Sơ đồ điều chế các loại cao 15

Sơ đồ 2: Các phân đoạn được tạo thành từ cao EA.1 18

3 B ảng

Bảng 1: Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1 16

Bảng 2: Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1.2 16

Bảng 3: Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1.2.3 17

Bảng 4: Bảng số liệu của hợp chất RS-C2 trong dung môi

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 KHÁI QUÁT VỀ ĐỊA Y

1.1.1 Định nghĩa và phân loại địa y

Địa y là một dạng thực vật bậc thấp đặc biệt, nó là kết quả cộng sinh của nấm (mycobiont) và một thành phần quang hợp (photobiont) thường là tảo (green alga) hay

vi khuẩn lam (cyanobacterium) Hiện nay có khoảng 17000 loài địa y đã được tìm

thấy Địa y thường được chia làm ba dạng chính: dạng khảm (crustose), dạng phiến (foliose) và dạng sợi (frucose)

Thành phần tảo của địa y sản sinh các carbohydrate bằng quá trình quang hợp, còn thành phần nấm sản sinh các hợp chất tự nhiên (để chống tia UV, ngăn chặn sâu

bọ và các loài động vật ăn cỏ, …), cung cấp nước và khoáng chất Kết quả từ sự cộng sinh này giúp địa y có thể sinh trưởng và sống sót trong những điều kiện khắc nghiệt,

chủ yếu ở vùng vĩ độ cao, vùng nhiệt đới, và có thể hiện diện ở khắp mọi nơi như trên

đá, đất, lá cây, thân cây, kim loại, thủy tinh [2]

Hình 1: Ba dạng chính của địa 1.1.2 Vai trò của các hợp chất tự nhiên trong địa y [4]

Bảo vệ đối với cây trồng bậc thấp và bậc cao

Các hợp chất thơm hấp thụ tia UV, bảo vệ địa y chống lại bức xạ có hại

Các carboxylic acid từ địa y là tác chất tạo phức mạnh và giúp cho địa y lấy được các khoáng chất từ vật chủ nơi địa y bám vào (substrate) Giúp xua đuổi thú ăn

thịt và côn trùng

Địa y dạng khảm Địa y dạng phiến Địa y dạng sợi

1.1.3 Một số ứng dụng của địa y

Địa y đã được sử dụng làm thực phẩm, làm phẩm nhuộm, nguyên liệu thô trong

sản xuất nước hoa và trong y học cổ truyền

1.2 HOẠT TÍNH CỦA CÁC HỢP CHẤT TỪ ĐỊA Y

Địa y sản sinh ra một lượng lớn các hợp chất hữu cơ, đa số có hoạt tính sinh

học và nhiều loại trong chúng là đặc hiệu của địa y trong hoá học các hợp chất tự nhiên Tuy vậy, các khảo sát hoá học trên địa y bị hạn chế do nguồn cung có hạn, vì các địa y phát triển rất chậm Những nghiên cứu gần đây cho thấy việc nuôi cấy địa y trong phòng thí nghiệm cũng không dễ dàng, chỉ khoảng 10% địa y được nuôi cấy thành công, tuy nhiên chúng lại chứa các hợp chất hữu cơ khác hẳn với các hợp chất

có trong cùng loại địa y tự nhiên [1].Lê Hoàng Duy [2] đã nghiên cứu nuôi cấy thành công 10 % trên khoảng 50 loài địa y lấy từ Việt Nam Tuy đạt thành công về mặt cô

lập hợp chất mới nhưng hầu như các hợp chất cô lập từ địa y nuôi cấy đều khác so với các hợp chất địa y tự nhiên

Khoảng gần 1000 hợp chất địa y đã được cô lập cho đến nay Nghiên cứu về

hoạt tính sinh học và khả năng dược học của các hợp chất tự nhiên từ địa y được thống

kê đầy đủ của Boustie (2007) [6], Huneck (1999) [7], Muller (2001) [8] về kháng khuẩn, kháng virus, chống oxy hóa, kháng ung thư, kháng viêm, kháng enzyme …

1.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VỀ CÁC HỢP CHẤT CÓ TRONG ĐỊA Y

Có nhiều hệ thống phân loại các hợp chất hóa học từ địa y, trong đó hệ thống phân loại được sử dụng nhiều nhất là hệ thống phân loại do Shibata và cộng sự đề nghị[3]

Các hợp chất hóa học trong địa y được chia làm ba nhóm chính dựa theo nguồn

gốc sinh tổng hợp của chúng (hình 2)

 Ngu ồn gốc polyketide: depside, depsidone, quinones, xanthones, chromones,

aliphatic acid …

 Ngu ồn gốc shikimic acid: terphenylquinone và dẫn xuất của tetronic acid

 Ngu ồn gốc mevalonic acid: terpenoid, steroid

Hình 2: Sinh t ổng hợp của các hợp chất từ địa y [1]

1.4 MÔ TẢ THỰC VẬT ROCCELLA SINENSIS (NYL.) HALE

1.5 MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ CÓ TRONG ĐỊA Y THUỘC CHI

ROCCELLA ĐÃ ĐƯỢC NGHIÊN CỨU

Năm 1969, C F Culberson đã cô lập được hợp chất meso-erythitol (3) từ

Roccella phycopis [10] và D-tagatose (4) từ Roccella fuciformis [10]

Năm 1945, Anker R M., Cook A H đã cô lập được ethyl orsellinate (5) từ

Roccella fuciformis [11] Sau đó hợp chất này cũng được tìm ra bởi Dyke H J., Elix J A., Marcuccio S M.,Whitton A A (1987); Gavin J., Tabacchi R (1975); Hase T A., Suokas E,, McCoy K (1978) và Sonn (1928)

Năm 1969, C.F Culberson và các cộng sự đã cô lập được (+)-montagnetol (6) từ

Năm 1972, Hucneck S., Follmann G đã tìm được lobodirin (8) từ Roccella

cerebriformis [13] Cũng trong năm đó Huneck và các cộng sự của mình cô lập được

2-methyl-5-hidroxy-6hidroxymethyl-7- methoxychromone (9) từ Roccella fuciformis [13]

Năm 1992, Huneck S., Jakupovic J., Follmann G đã cô lập được mollin (10)

và roccellin (11) từ Roccellaria mollis [14] Năm 1992, Huneck S., Jakupovic J.,

Follmann G đã công bố hợp chất galapagin (12) từ Roccella galapagoensis Follm [14]

1.5.4 Các hợp chất dibenzofurane

Năm 1991, Huneck S.và cộng sự đã cô lập được 9-methyl pannarate (13) từ

Roccella capesis Follm [15]

Năm 1993, Huneck S và cộng sự của mình đã tìm thấy

3-O-demethylschizopeltic acid (14) từ Roccella hypomecha Bory [16]

1.5.5 Các hợp chất depside

Năm 1980, Sundholm E G và Huneck S đã cô lập được erythrin (15) từ

Roccella phycopsis Ach [17]

1.5.6 Các hợp chất carotenoid

Năm 1988, Czeczuga đã cô lập được các β-carotene (16) từ Roccella

fuciformis [18] và γ-carotene (17) từ Roccella montagnei Bell [18]

1.5.7 Các hợp chất aliphatic vòng

Năm 1970, Ferguson G., Mackey I R tìm ra acetylportentol (18) từ Roccella

fuciformis [19]; cũng trong năm đó Aberhart D J.,Overton K H., Huneck S., đã phân

lập được prortentol (19) từ Roccella galapagones[20]

Me HOOC

O

Roccellic acid (2) Roccellaric acid (1)

OH

OH

CH2OH OH

H H OH

H H

D-tagatose (4)

Me COOC2H5OH HO

H3C

Leprapic acid (7)

Lobodirin (8)

hydroxymethyl-7-

2-methyl-5-hidroxy-6-methoxychromone (9)

(+)- Montagnetol (6)

O

O OH HOH2C

Me O

OAc

OAc AcO

HO

O

O

CH3HOOC

O HO

OAc

OH Me

Me HO

Galapagin (12) 9-Methyl pannarate (13)

O

Me COOH

OH COOMe

3-O-Demethylschizopeltic acid (14)

Me COO

Me

OH

COO CH2

OH H

OH H

CH2OH

Erythrin (15)

Me

Me Me

Me Me

Me

Me Me

β-Carotene (16)

Picrorocellin (20)

HN

OH N O

OMe O

Me

N

OH NH O

OMe O Me

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ

2.1.1 Hóa c hất

Dung môi dung trong sắc ký cột và sắc ký điều chế, sắc ký lớp mỏng gồm ether

dầu hỏa (60-90oC), ether dầu hỏa thắp sáng (40-60oC), ethyl acetate, acid acetic, chloroform, acetone, methanol điều là hóa chất của hãng Chemsol-Việt Nam và được làm khan bằng Na2SO4 nếu sử dụng lại và nước cất

Thuốc thử: để hiện hình các vết hữu cơ bằng sắc ký lớp mỏng, phun xịt bằng dung dịch acid sulfuric 30%, vanillin/H2SO4, soi đèn UV

Sắc ký cột thường dùng silica gel sắc ký cột 70- 30, cỡ hạt: 0.04-0.06 mm, Ấn

Độ

2.1.2 Thiết bị

Các thiết bị dùng để ly trích (lọ thủy tinh, becher, bình lóng)

Máy cô quay chân không Buchi-111 kèm bếp cách thủy Buchi 461 Water Bath

Cột sắc ký: cột cổ điển

Sắc ký lớp mỏng 25DC-Alufolien 20 x 20 cm Kiesel gel F254 Merck

Thiết bị đo nhiệt độ nóng chảy khối Maquenne

Các thiết bị ghi phổ: Phổ 1H-NMR, 13C-NMR, phổ DEPT- NMR 135 và 90: Ghi trên máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker ở tần số 500 MHz cho phổ 1

H-NMR và

125 MHz cho phổ 13

C-NMR

Tất cả phổ được ghi tại: Phòng Phân Tích Trung Tâm Trường đại học Khoa học

Tự nhiên thành phố Hồ Chí Minh, số 227, Nguyễn Văn Cừ, Quận 5, thành phố Hồ Chí Minh

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU

Tên khoa học: Roccella sinensis (Nyl.) Hale

Họ: Rocellaceae

Địa y mọc trên thân cây chín tầng ở chùa Hang, ở độ cao 300 mét so với mực nước biển, huyện Liên Hương, tỉnh Bình Thuận

Mẫu ký hiệu US-B028, được lưu trong quyển tiêu bản thực vật, bộ môn Hóa

hữu cơ, khoa Hóa, trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TP.HCM

Tên khoa học của địa y được xác định bởi tiến sĩ Harrie J M Sipman, Khoa

Thực vật học, Đại Học Freie, Berlin, Đức

2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO

Từ địa y khô và sạch tiến hành ngâm dầm trong dung môi methanol ở nhiệt độ phòng Lấy dịch chiết cô quay thu hồi dung môi dưới áp suất thấp

Trong khi dịch methanol bay hơi một kết tủa tách ra và được lọc ra khỏi dịch

Dịch còn lại được tiếp tục làm khô thu được cao methanol thô Sử dụng phương pháp sắc ký cột trên cao methanol thô, giải ly bằng dung môi hexan 100% thu được Cao He

và một phân đoạn khác

Phân đoạn còn lại cũng sử dụng sắc ký cột với dung môi giải ly He:EA lần lượt

từ 9:1 đến 0:10 thu được 4 phân đoạn từ cao EA1 đến EA4 và phân đoạn còn lại, phần này dùng sắc ký cột giải ly bằng dung môi methanol 100% thu được cao Me

Sơ đồ 1: Sơ đồ điều chế các cao của địa y Roccella sinensis (Nyl.) Hale

2.4 CÔ L ẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO ETYL AXETAT

2.4.1 Sắc kí cột cho cao EA1

Cao EA1 (21g) thực hiện sắc kí cột silica gel, giải ly bằng dung môi ED:EA (8:2) và tăng dần độ phân cực Dịch giải ly từ cột sắc kí được hứng vào các bình tam giác 500ml Sau đó, dùng máy cô quay thu hồi dung môi, phần cao thu được đựng vào các hủ bi Dùng sắc kí bản mỏng để kiểm tra phần cao thu được, những phần giống

nhau gom lại thành một phân đoạn Kết quả được 3 phân đoạn (EA1.1, EA1.2, EA1.3), các phân đoạn được trình bày trong sơ đồ 2

Bảng 1: Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1

Phân

đoạn Dung môi giải ly

Khối lượng (gam)

Sắc kí bảng mỏng Ghi chú

EA1.1 ED:EA (8:2) 2.780 Vết không rõ Không khảo sát EA1.2 ED:EA (6:4) 15.137 Vết rõ Khảo sát EA1.3 ED:EA (3:7) 2.178 Vết không rõ Không khảo sát

2.4.2 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn EA1.2 (15.137g)

Phân đoạn EA1.2 (15.137g) thực hiện sắc kí cột silica gel, giải ly bằng dung môi ED:EA (8:2) và tăng dần độ phân cực Dịch giải ly từ cột sắc kí được hứng vào các bình tam giác 250ml Sau đó, dùng máy cô quay thu hồi dung môi, phần cao thu được đựng vào các hủ bi Dùng sắc kí bản mỏng để kiểm tra phần cao thu được, những

phần giống nhau gom lại thành một phân đoạn Kết quả được 4 phân đoạn, các phân đoạn được trình bày trong bảng 2

B ảng 2: sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1.2

Phân đoạn Dung môi giải ly Khối lượng

(gam)

Sắc kí bảng

mỏng Ghi chú EA1.2.1 ED:EA (8:2) 8.813 Vết không rõ Không khảo sát

EA1.2.2 ED:EA (6:4) 0.540 Vết tách rõ SV Nguyễn Thị

Ngọc Nga khảo sát EA1.2.3 ED:EA (4:6) 1.920 Vết rõ Khảo sát

EA1.2.4 ED:EA (3:7) 0.600 Vết tách rõ

2.4.3 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn EA1.2.3 (1.920g)

Phân đoạn EA1.2.3 (1.920g) thực hiện sắc kí cột silica gel, giải ly bằng dung

môi ED:EA:AcOH (8:2:0.02) và tăng dần độ phân cực Dịch giải ly từ cột sắc kí được

hứng vào các hủ bi Sau đó, dùng máy cô quay thu hồi dung môi, phần cao thu được đựng vào các hủ bi Dùng sắc kí bản mỏng để kiểm tra phần cao thu được, những phần

giống nhau gom lại thành một phân đoạn Kết quả được 3 phân đoạn (EA1.2.3.1, EA1.2.3.2) Phân đoạn EA1.2.3.2 (0.580g) vết rõ nên tiến hành khảo sát và thu được

C2, C1 và C15 Phân đoạn EA1.2.3.1 (0.550g) vết rõ sinh viên Nguyễn Thị Ngọc Nga

khảo sát

Bảng 3: sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1.2.3

Phân đoạn Dung môi giải ly

Khối lượng (gam)

Sơ đồ 2: Các phân đoạn được tạo thành từ cao EA.1

EA.1(21g)

EA.1.2.3.1

(0.500g)

EA.1.2.3 (1.920g)

EA.1.1

(2,780g)

EA.1.2 (15.137g)

EA.1.2.4 (0.50g)

EA.1.3 (2.178g)

EA.1.2.2 (0.600g)

EA.1.2.1

(8.813g)

RS-C2

EA.1.2.3.2 (0.580g)

RS-C15

-Sắc ký cột silicagel -Giải ly bằng ED:EA(7:3-0:10) -Lọc cô quay thu hồi dung môi

-Sắc ký cột silicagel -Giải ly bằng ED:EA(6:4-0:10) -Lọc cô quay thu hồi dung môi

-Sắc ký cột siicagel -Giải ly bằng ED:EA:Ac (4:6:0.02-0:10:0.02) -Lọc cô quay thu hồi dung

i

-Sắc ký cột silicagel -Giải ly bằng ED:EA:Ac(8:2:0.02) -Sắc ky bảng mỏng điều chế

RS-C1

EA.1.2.4 (0.50g)

RS-C1a

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS-C1a

o Trạng thái: RS-C1a là tinh thể hình kim không màu

H-NMR cho thấy một nhóm methyl vòng thơm [δH 2,51 ppm (3H, s)], hai

proton vòng thơm ghép cặp meta với nhau [δH 6,28 ppm (1H, d, 2.5 Hz, H-3), 6,22 ppm (1H, d, 2.5 Hz H-5)] Đây là những tín hiệu của một đơn vị orcinol

Phổ 13

C-NMR cho thấy có tám carbon đặc trưng của đơn vị orcinol: nhóm methyl vòng thơm 6-CH3 (δC 24,2 ppm), nhóm carboxyl C-7 (δC 174,2 ppm), các carbon vòng thơm gắn O tại δC 167,1 ppm (C-2) và δC 163,5 ppm (C-4); 2 carbon methine vòng thơm tại δC 101,6 ppm (C-3) và δC 112,2 ppm (C-5); các carbon tứ cấp vòng thơm khác tại δC 105,0 ppm (C-1) và δC 144,9 ppm (C-6)

Từ các dữ liệu trên kết hợp với tài liệu tham khảo[23]

ta suy ra hợp chất RS-C1a là acid orsellinic:

COOH

CH3

OHHO

acid orsellinic

1234

87

56

3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS-C2

o Trạng thái: Hợp chất RS-C2 là tinh thể hình kim không màu

o Phổ 1

H-NMR (Acetone) (phục lục 3) Trình bày trong bảng 4

o Phổ 13C-NMR (Acetone) (phục lục 4) Trình bày trong bảng 4

 Bi ện luận cấu trúc phổ RS-C2

Phổ 1

H-NMR cho thấy 2 proton vòng thơm ở δH 6,38 (1H, s br), δH 6,53 (1H, s br);

một nhóm methylene ở vùng từ trường thấp δH 5,27 Độ chuyển dịch hóa học của nhóm methylene này chứng tỏ nó phải vừa gắn với vòng thơm vừa liên kết với O

Phổ 13

C-NMR cho thấy tín hiệu của nhóm methylene liên kết với O tại δC 70,3 ppm; các carbon vòng thơm gắn O tại δC 166,2 ppm (C-2) và 158,8 ppm (C-4), nhóm carboxyl tại δC 171,5 ppm (C-7), 2 carbon methine tại δC 102,0 ppm (C-3) và 103,1 ppm (C-5) và các carbon tứ cấp vòng thơm khác tại δC 104,4 ppm (C-1) và 151,8 ppm (C-6); đây là các tín hiệu một đơn vị orcinol

B ảng 4: Bảng số liệu của hợp chất RS-C2 đo trong dung môi Acetone-d6

Từ các dữ liệu trên kết hợp vơi tài liệu tham khảo[24]

ta suy ra cấu trúc của hợp

chất RS-C2 là 5,7-dihydroxy phtalide

OHHO

OO1234

7

5 68

5,7-dihydroxyphtalide

3.3 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS-C1

o Trạng tái: Hợp chất RS-C1 là chất bột màu trắng vô định hình

o Phổ 1

H-NMR (DMSO) (phục lục 5, 5a) Trình bày trong bảng 5

o Phổ 13C-NMR (DMSO) (phục lục 6, 6a) Trình bày trong bảng 5

o Phổ 1H-NMR (Acetone) (phụ lục 7, 7a) Trình bày trong bảng 6

o Phổ HSQC (phụ lục 8, 8a)

o Phổ HMBC (phục lục 9, 9a, 9b) Trình bày trong bảng 5

o Phổ MS (phụ lục 10)

 Biện luận cấu trúc phổ RS-C1

Phổ 1H-NMR cho thấy một nhóm methyl vòng thơm (δH 2,36 ppm), một nhóm –

OH kiềm nối (δH 10,89 ppm) và hai proton ghép cặp metha với nhau (δH 6,14 ppm, d,

J=2,5 Hz) (δH 6,18 ppm, d, J=2,5 Hz) Đây là những tín hiệu của vòng orcinol

Hơn nữa phổ 1H-NMR còn cho thấy tín hiệu của hệ thống AA ʹX: 2 proton không

tương đương của nhóm methylene (liên kết với O ( -CH2-O-)) (HA-1 ʺ, δH 4,46 ppm,

J=10,5 Hz) (HB-1 ʺ, δH 4,25 ppm, J 1= 10,5 Hz, J2= 5,5 Hz) ghép cặp với một nhóm methine (liên kết với O ( >CH-O-)) tại δH 3,76 ppm Phổ 1H-NMR còn cho thấy 1 proton khác ở vùng từ trường δH 5,29 ppm, được cho là của nhóm –OH

Phổ 13C-NMR cho thấy 10 carbon, gồm 8 carbon đặc trưng của đơn vị orcinol: nhóm methyl vòng thơm 6-CH3 (δC 22,6 ppm); các carbon vòng thơm gắn O tại δC161,9 (C-2) và 161,4 ppm (C-4); nhóm carboxyl C-7 (δC 169,9 ppm); 2 carbon methine tại δC 100,4 ppm (C-3) và 110,5 (C-5); các carbon tứ cấp vòng thơm khác C-1 (δC 106,6 ppm), C-6 (δC 141,7 ppm)

Phổ 13C-NMR cũng cho thấy sự xuất hiện của 2 carbon sp3 có liên kết O (δC 66,6

và 69,2ppm) Phổ 1H-NMR kết hợp với 13C-NMR cho phép dự đoán hợp chất RS-C1

có cấu trúc đối xứng

Phổ HRMS cho thấy 1 pic ion giả phân tử [M+Na]+ ở m/z = 445,1127 (cho

C20H22NaO10, 445,1111) tương ưng với công thức phân phân tử C20H22O10

Phổ HSQC tái khẳng định cấu trúc của một đơn vị orcinol Hơn nữa, phổ HSQC tái

khẳng định hệ thống AA ʹX -CH2-CH-

Phổ HSQC tái khẳng định một nhóm methylene thứ 2 (δH 4,25 ppm; 4,46 ppm, δC66,6 ppm) và một nhóm methine thứ 2 (δH 3,76 ppm; δC 69,2 ppm) liên kết với O

Ở vòng thơm, trên phổ HMBC cho thấy proton nhóm methyl ở δH 2,49 tương quan

với các carbon δC 110,5 (C-5), 141,7 (C-6), 106,6 (C-1) Proton ở δH 6.18 tương quan

với các carbon δC 22,6 (C-8), 100,4 (C-3), 141,7 (C-6) và ghép meta với proton δH6.14 Proton ở δH 6.14 tương quan với carbon δC 110,5 (C-5), 161,4 (C-4), 161.9 (C-2) Từ các dữ liệu phổ trên khẳng định nhân thơm có cấu trúc của một đơn vị orcinol

Nhóm methylen ở [δC 4,46, 4,25] dịch về vùng từ trường thấp nên phải liên kết ester với nhóm –COO của đơn vị orcinol Trên phổ HMBC thấy proton này tương quan với carbon nhóm carboxyl ở δC 169,9 (C-7), carbon ở δC 69,2 (C-2”) Điều này tái khẳng định vị trí của nhóm methylen này

B ảng 5: Bảng số liệu của hợp chất RS-C1 đo trong dung môi DMSO-d6

Vị trí δ H , J

(Hz) δ C

HMBC (1H→13

C) Vị trí δ H , J (Hz) δ C

HMBC (1H→13

2,2’-OH 10.89 s

1, 2, 3 1’, 2’, 3’

Tương quan cùa hợp chất RS-C1:

7'1" 2" 3" 4"

H

H

(2R,3S)-2,3-dihydroxybutane-1,4-diyl bis(2,4-dihydroxy-6methylbenzoate)

B ảng 6: Bảng số liệu của hợp chất RS-C1 đo trong dung môi Acetone

(2R,3S)-CH3

OHHO

O

H2CO

7'1" 2" 3" 4"

H

H

(2R,3S)-2,3-dihydroxybutane-1,4-diyl bis(2,4-dihydroxy-6methylbenzoate)

3.4 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT RS- C15

o Trạng thái: Hợp chất RS-C15 là một chất vô định hình màu trắng

H-NMR cho thấy một nhóm methyl vòng thơm (δH 2.53 (3H, s)), hai proton

vòng thơm ghép cặp meta với nhau (δH 6,28 ppm, 6,22 ppm, d, J=2,5 Hz) Hơn nữa,

phổ 1

H-NMR cũng cho thấy hệ thống AA ʹX: hai proton không tương đương của