Nghiên cứu định lượng cyclopentolate hydroclorid trong dung dịch thuốc nhỏ mắt do viện mắt trung ương sản xuất bằng HPLC

Hiên nay trên thi truong câc thuôc nhô mât cô chüa Cyclopentolate hydroclorid dêu là thuôc nhâp ngoai vôi giâ thành cao, viên mât trung uong dâ tien hành pha ché dung dich thuôc nhô mat

+£0 +Ï+ 4kSj0 %3+ «£ 1 # « 1 # «£ % t# % i# «f# *£« % ỵ«

•y» ry» # y % < rj* rç* rj* rj* ry* rj% # y % ry» # y % ry» # y % *y %

NGUYEN THI DIEU LINH

NGHIÊN CÛm DjNH LIT0NG CYCLOPENTOLATE HYDROCLORID TRONG DUNG DICH THUƠC NHO MÂT DO VIÊN MÂT TRUNG IfflNG SAN XUÂT BflNG HPLCm

(KHÔ LUÂN TOT NGHIÊP DUÜC SÏ KHÔ 2002- 20 p J ^ ^

/c r" \

:

T U if-v ;r‘:S

*h-Nguài hifong din:

Nol thije hiên:

ThS Nguyên Thanh Phirong ThS Nguyên Trung Hieu Phơng phân tich 2 - TT Kiê'm nghiêm Di/çrc phlfm - Mÿ phlfm Hà Nơi

A 7 ,

Thạ gian thi/c hiên: Thang 9/2006 - 3/2007

Em cûng xin câm on su quan tâm cüa Ban giâm hiêu, Phông dào tao nhà trudng dâ tao diêu kiên tôt cho em trong suôt thài gian hoc tâp và thuc hiên khoâ luân.

Cuôi cùng, em xin câm on gia dinh và ban bè dâ luôn dông viên, khfch le em trong hoc tâp

Em xin chân thành câm on!

Hà Nôi, thâng 5 2007

Sinh viên Nguyên Thi Diêu Linh

1 3 3 3

4 5

6

6

6

7

10

11

12

14 15

16 16 16 16 19 19 19 19

MUC LUC

Dât van d e

Phân 1 Tong quan .

1 Cyclopentolate hydroclorid

1.1 Giôi thiêu Cyclopentolate HC1

1.2 Mot sô phuong phâp dinh luong dung dich thuôc nhô mât Cyclopentolate HC1

1.3 Mot sô' ché phâm

2 Phuong phâp HPLC

2.1 Khâi quât phuong phâp

2.2 Nguyên tâc câu tao

2.3 Câc dai luong dâc trung

2.4 Pha tînh trong HPLC

2.5 Pha dông trong HPLC

2.6 Nguyên tâc lua chon

2.7 Câch dânh giâ pic

2.8 Câch trnh két quâ

Phân 2 Thuc nghiêm và ket quâ .

1 Nguyên lieu, phuong phâp nghiên cüu

1.1 Hoâ chât, dung eu

1.2 Dôi tuong, nôi dung, phuong phâp nghiên cîru

2 Két quâ thuc nghiêm

2.1 Khâo sât diêu kiên sâc k ÿ

2.1.1 Lua chon côt sâc kÿ

2.1.2 Lua chon dung môi pha dông

2.1.3 Lua chon toc dô dong

2.1.4 Lua chon buôc sông thfch hop dé phât hiên chât

2.2 Thâlm dinh chuong trïnh sâc k ÿ 24

2.2.1 Khâo sât tmh thich hop cüa hê thong sâc kÿ 24

2.2.2 Khâo sât khoâng tuyén tfnh cüa phuong phâp 24

2.2.3 Khâo sât dô dung cüa phuong phâp 26

2.2.4 Khâo sât dô chmh xâc 27

2.2.5 Khâo sât dô dàc hiêu 29

2.2.6 Khâo sât tmh on dinh cüa ché phlm trong dung môi pha dông 31

2.3 üng dung chuong trînh sâc kÿ dâ xây dung de dinh luong Cyclopentolate HC1 trong dung dich thuôc nhô m ât 33

3 Bàn luân vê két quâ .36

Phân 3: Két luân và de xuât 38 Phu lue

Tài liêutham khâo

*4

CHU GIÂI CÂC CHÜ VIÉT TÂT

Cyclopentolate hydroclorid là thuôc khâng Muscarin cô tâc dung tuüng tu nhu atropin trong su dung dùng tra mât de kiëm tra dô khüc xa cüa mât Thuoc cô tâc dung nhanh han atropin và khoâng tâc dung ngân h an nên cô nhiêu thuân tiên cho bâc sÿ cùng nhu bênh nhân Hiên nay trên thi truong câc thuôc nhô mât cô chüa Cyclopentolate hydroclorid dêu là thuôc nhâp ngoai vôi giâ thành cao, viên mât trung uong dâ tien hành pha ché dung dich thuôc nhô mat cô chüa hoat chât này vôi mong muôn giâm giâ thành cho bênh nhân và chü dông trong nguôn cung cap.

Trong Duac diën Anh 2005 và Duoc diën Mÿ 29 dâ cô chuyên luân

vé thuôc nhô mat chüa Cyclopentolate hydroclorid, nhung khi sü dung chuyên luân này dë kiëm nghiêm thuôc nhô mat do Viên mât trung uong sân xuât thi cô nhùng khô khân nhât djnh Duoc diën Mÿ sü dung loai côt sac kÿ không thông dung, côn theo trung tâm kiëm nghiêm duac phâm- mÿ phâm Hà Nôi nê'u dùng phucfng phâp trong duac diën Anh thi chuang trinh chay sâc kÿ không tâch duac hoàn toàn hoat chât ra khôi câc chât khâc Dë dinh luong hoat chât này phù hap vôi diêu kiên pho bien cüa câc phông kiëm nghiêm cüa Viêt Nam, chüng tôi dâ tién hành thuc hiên dè tài:

Nghiên cûu dinh luong Cyclopentolate hydroclorid trong dung dich thuôc nhô mât do Viên mât trung uong sân xuât bang HPLC.

Vôi câc mue tiêu sau:

- Xây dung phuong phâp dinh lirorng Cyclopentolate hydroclorid trong thuoc nhô mât bàng HPLC.

- Üng dung phuong phâp dâ xây dung dë dinh luwng mot so mâu thuoc nhô mat do Viên mât trung uong sân xuât.

PHAN 1: TÔNG QUAN

1 Cyclopentolate hydroclorid: [1], [4], [12], [13], [14], [17], [18], [19]

1.1 Giâithiêu vêCyclopentolate hydroclorid: [1], [13], [14], [17], [18], [19]:

Cyclopentolate hydroclorid là thuoc khâng Muscarin cô tâc dung tuang tu nhu atropin trong sü dung tra mat kiëm tra dô khüc xa cüa mât Thuôc cô tâc dung nhanh h on và khoâng tâc dung ngân hon atropin nên cô nhiêu thuân lai cho bac sÿ cüng nhu bênh nhân

(Cyclopentolate hydroclorid chûa không duôi 98,5% và không quâl01,5%)

+ Tinh chat: Cyclopentolate hydroclorid à dang bôt màu trâng két tinh Tan nhiëu trong nuôc, dê tan trong côn Nhiêt dô nông chây: 135°C dê'n 141°C Dung dich nông dô lg/ml cô pH 4,5- 5,5

chât kich thich hê muscarinic khâc, ngân cân su gân acetylcholine vào

receptor muscarinic câ à thàn kinh trung uong và ngoai vi, gây kich thich thân kinh trung uong và huÿ phô giao câm, biëu hiên trên mot sô ca quan

và tuyën nhu sau:

- Trên mât: Gây giân dông tu, gây liêt thé mi dân tcfi mât khâ nâng diêu tiet cüa mât.

- Trên tuân hoàn: Liêu binh thuàng ît ânh huông tai tim mach; Khi dùng liêu cao gây urc ché

- Tâc dung giân ca trcfn, giâm tiét dich ngoai vi

• Théo BP 2005 [13]: Phuong phâp chuân dô do thé

Hoà tan 0,25 g Cyclopentolate hydroclorid trong hôn hop gôm 1ml HC1 và 50ml alcol

Chuân dô bàng dd NaOH 0,1 M Diëm tuang duang duac xâc dinh bàng buac nhây thé 1ml NaOH 0,1 M tuang duang 32,97 mg

c17h25n o3h c i

• Théo USP29 [19]: Phuang phâp HPLC:

- Côt L15 ( 150 x 4,6 mm ; 5p.m)

- Pha dông: Acetonitril- dd dêm Phosphat pH3( 70:30)

- The tfch tiêm: 20 |iim

- Toc dô dong: 2ml/phüt

- Detector UV à buac sông 220 nm

1.2.Mot so phuong phâp dinh luçfng dung dich thuoc nhô mat

+ Dung dich 2: Pha loâng môt thé ti'ch thuôc nhô mât chüa 20mg

Cyclopentolate hydroclorid vôi 20ml pha dông

+ Dung dich 3: 4ml ddA vôi mot thé tfch thuôc nhô mât chùa 20mg

Cyclopentolate hydroclorid vôi 10ml pha dông

- Côt: Nucleosil C18 20cm x 4,6mm, 10p.m

- Pha dông: Methanol: dd Natridihidrogen Orthophosphate(55: 45) (Hôn hop duac diêu chïnh tai pH= 3 bàng acid Orthophosphoric).

- Thé tich tiêm: 20p,l

- Toc dô dông: 2ml/phüt

- Detector UV àbuôc sông 254nm

Vôi diêu kiên sâc kÿ này, két quâ thu duac chî hop lÿ khi hê sô phân giâi giùa câc dïnh cüa Cyclopentolate hydroclorid và chât chuân nôi lôn hon 4

b Dinh luong theo USP 29 [19]: Phuang phâp HPLC

- Côt L15 ( 150 x 4,6 mm ; 5|im)

- Pha dông: Acetonitril- dd dêm Phosphat pH3( 70:30)

- The tich tiêm: 20 ^m

- Toc dô dông: 2ml/phüt

- Detector UV a buôc sông 220 nm

Bàng 1: Mot so che phdm thuoc nhô mat chûa Cyclopentolate hydroclorid

2 Phurong phâp HPLC [2], [3], [5], [7], [15], [16]

2.1 Khâi quât chung:

Sâc kÿ long hiêu nâng cao là mot phuang phâp tâch dira trên âi lue khâc nhau cûa câc chât vôi hai pha luôn tiép xuc và không dông tan vôi nhau Pha dông là chât long chây qua côt vôi mot toc dô nhât dinh duôi âp suât cao, côn pha tmh là mot chât long duac bao trên nên mot chât mang ran, hoâc mot chât mang rân dâ duac liên két hoâ hoc vôi câc nhôm hùu ca Pha dông cùng vôi mâu thü duac bam qua côt duôi âp suât cao, câc chât cân phân tich sê di chuyên theo pha dông qua côt vôi toc dô khâc nhau Câc chât sau khi ra khôi côt duac nhân biét bai bô phân phât hiên goi là detector

2.2 Nguyên tâc câu tao cüa hê thong mây HPLC:

Hê thông kÿ thuât cüa HPLC bao gôm câc bô phân chmh:

- Bînh chùa dung môi: Bînh thuông làm bàng thuÿ tinh hoâc thép không ri

- Bam cao âp: Bam này cô chùc nâng bam dung môi vào côt dé thuc hiên quâ trïnh tâch Bam này duac diêu chînh âp suât dë tao ra nhùng toc

dô on dinh cüa câc chât cho phù hap vôi quâ trinh sâc kÿ

Bam dùng trong sâc kÿ long cân phâi dâp ùng mot sô yêu câu khâ cao: tao duac âp suât cao(250-500 at), luu luong bam khoâng 0,1-10 ml/phüt, không bi ân mon bai nhiêu loai dung môi

- Van tiêm mâu: Van này dë bam mâu phân tich vào côt tâch theo nhùng luong mâu nhât dinh không doi trong mot quâ trinh sac kÿ Câc van này cô thé tich thay doi

- Côt tâch: Là côt chùa pha tînh Côt thuông duac làm bàng thép không rî Côt tâch cô nhiêu kich cô khâc nhau, và thuông cô chiêu dài tù 10-25 cm, duông kmh trong tù 2-5 mm, hat chât nhôi cô 5-10 fam

- Hê thông phât hiên chât phân tich(detector): Dua theo tmh chât cüa câc chât cân phân tfch mà nguôi ta sü dung câc detector khâc nhau nhu:

Detector hâ'p thu UV-VIS, Detector dây diod quang, Detector huÿnh quang,

Detector diên hoâ, Detector khüc xa , Detector do dô dân

- Hê thông thu nhân và xü lÿ két quâ: phô biê'n là mây tu ghi tfn hiêu

do duôi dang pic

So dô khôl cüa hê thông sâc kÿ:

Hinh 1: Sa dô khoi cüa hê thông sâc kÿ.

Chu giâi: 1: Bînh dura dung môi 2: Bom

3: Van tiêm mâu 4: Côt tâch

5: Detector

2.3 Câc dai luong dàc trung:

- Thcri gian luu ( tR ) và thé tfch luu:

Thôi gian luu là thài gian cân thiét dë môt chât tan di chuyên tir nôi

tiêm mâu qua côt sâc kÿ, toi detector và cho pic trên sâc dô ( tmh tir lue

tiêm tôi khi xuât hiên dînh cüa pic) Dua vào thôi gian liru cô thë phât hiên

dinh tmh chât dô là chât gi

Thôi gian liru phu thuôc vào nhiêu yê'u tô nhu bân chât sac kÿ cüa

pha tinh; bân chât, thành phân, tôc dô cüa pha dông; câu tao và bân chât cüa

phân tü chât tan; pH cüa pha dông, nông dô chât tao phüc

Tuang ûng vôi thôi gian liru, rîai luçfng thé tich liru cüa mot chât là the tich cüa pha dông chây qua côt sâc kÿ trong khoâng thôd gian tù lue bam mâu

vào côt cho dén khi chât tan duac rüa giâi ra à thôfi diëm cô nông dô eue

- Hê sô phân bô ( K ):

Quâ trînh tâch sâc kÿ cüa câc chât là dua trên ca sa su phân bô cüa chât tan giüa pha dông và pha tinh Su phân bô này duçfc dâc trung bai hê sô

Cphân bô, nô duac tmh theo công thirc: K = S

- Thùa sô dung luçfng ( k’ ):

Dây là mot dai luong quan trong duac dùng dë mô tâ toc dô di chuyên cüa mot chât Nô cho ta biet khâ nâng phân bô cüa chât tan trong môi pha nhu thê' nào Thùa sô dung luong duçfc tmh theo công thuc:

Qck’

Qm

Trong dô: Qs và QM là luong chât tan phân bô trong pha tinh vàpha dông

VsQuan hê giûa hê sô phân bô và thùa sô dung luçfng: k’ = K

V MTrong dô: Vs và VM là thë tich pha tïnh và pha dông

T -T

Ngoài ra cô thë dinh nghïa k’ theo mot câch khâc: k’ = TM

- Hê sô chon loc ( a ):

Toc dô di chuyên tÿ doi cüa hai chât duofe dâc trung bôi hê sô chon loc:

a =—— = —— = — k a k * t' A

Theo quy uôc, chât B là chât bi luu giû manh han chât A, nhu vây a

>1 a càng ldm thi hai chât tâch ra khôi nhau càng xa, thuông dùng a trong

khoâng 1,05 dén 2,0 de thôfi gian phân tich không quâ dài

to

Hînh 2: Câc dai luong dâc trung trên sâc kÿ dô dinh luong bàng HPLC

- Sô dïa lv thuvét ( N ) và chiêu cao cûa dïa ( H ):

Hiêu lue cüa côt thuông duac do bàng hai thông sô: sô dïa lÿ thuyét

và chiêu cao dïa lÿ thuyét Côt sac kÿ duac coi nhu cô n tàng lÿ thuyét, a

môi tâng su phân bô chât tan vào hai pha lai dat dén mot trang thâi cân

bàng môi Môi tàng duac giâ dinh nhu là môt lôp chât nhôi cô chiêu cao là

H Ta cô thê tmh sô dïa lÿ thuyét N theo công thuc sau:

l BJ l 1/2 )

Trong dô: - WB là chiêu rông pic à dây pic

- W1/2 là chiêu rông pic do à nüa chiêu cao cüa dînh

Néu goi L là chiêu cao cüa côt sâc kÿ, chiêu cao cûa dïa lÿ thuyét

duac tmh bàng công thuc: H = ^

- Dô phân giâi ( Rs ):

Dô phân giâi là dai luong do müc dô tâch hai chât trên mot côt sâc

kÿ Dô phân giâi duoc dinh nghîa nhu sau:

D _ ^ r b—^ r a _ khoâ ng câch giû a hai pic

Ks — —

-1/2 ^ W B + W A j dô rông trung b i nh gi û a hai pic

- Hê sô bât doi xung T: Hê sô bât doi cho biét mire dô cân doi cüa pic

T -W x

sâc kÿ, duoc tmh theo công thuc: 2a

Trong dô: Wx là dô rông dây pic do à 1/20 chiêu cao cüa pic.

a là khoâng câch tù duông vuông gôc ha tù eue dai cüa pic dén mép duông cong phfa truôc tai vi tri 1/20 chiêu cao pic

- Phân loai pha tïnh:

+ Cân cû theo bân chât chfnh cüa quâ trinh sâc kÿ trong côt tâch, nguôi ta chia nô ra nhiêu loai nhu hâp phu, phân bô, trao doi ion, rây phân

tü Tuang üng vôi loai chât nhôi nhu thé nguôi ta cô mot loai sac kÿ riêng trong kÿ thuât HPLC

+ Càn cù theo trang thâi rân hoâc long cüa pha tinh, néu pha tïnh là chât rân ta cô sac kÿ long- rân (LSC), néu pha tïnh là chât long thi ta cô sâc

kÿ lông-lông (LLC)

+ Cân cû theo câu truc xôp cüa pha tïnh là câc hat ràn, nguôi ta

chia nô làm hai loai là xôp toàn phân hat và xôp chî à lôp vô ngoài (xôp bê

mât)

- Diêu kiên vôi mot pha tïnh:

+ Phâi tra và bên vûng vôi câc diêu kiên cüa môi truông sac kÿ

+ Cô khâ nàng tâch chon loc mot hôn hçfp chât tan nhât dinh trong nhùng diêu kiên sac kÿ nhât dinh.

+ Tmh chât bê mât phâi on dinh

+ Cân bàng dông hoc cûa su tâch phâi xây ra nhanh và lap lai tôt.+ Cô hat phâi tuang doi dông nhât

2.5 Pha dông trong HPLC:

- Pha dông là dung môi dùng dë rua giâi câc chât tan (chât cân phân tich) ra khôi côt tâch dë thuc hiên lôt quâ trinh sac kÿ Nô cô thë chî là mot dung môi hùu cor hay cüng cô thë là hôn hop nhiêu dung môi trôn lân nhau theo nhùng tÿ le thich hop, cüng cô thë là dung dich cüa câc muôi chüa chât dêm, chât tao phûc

- Pha dông ânh huông dén hiêu quâ su tâch sâc kÿ:

+ Dô chon loc cüa hê pha

+ Thôi gian luu cüa chât tan

+ Hiêu lue cüa côt tâch

+ Dô phân giâi cüa câc chât trong mot pha tinh

+ Dô rông và su cân doi cüa pic sac kÿ

- Diêu kiên vôi mot pha dông:

+ Phâi tra vôi pha tïnh

+ Hoà tan duac chât cân phân tich

+ Bên vûng vôi thôi gian

+ Cô dô tinh khiét cao

+ Nhanh dat câc cân bàng trong quâ trinh sac kÿ

+ Phù hop vôi detector dùng dë phât hiên câc châ't phân tich

+ Cô tmh kinh té, không hiém, không quâ dât

- Trong sàc kv phân bô pha thuân: pha dông phâi là câc dung môihùu ca không phân eue hoâc ft phân eue nhu n-hexan, n- heptan, cloroform,tetraclorocarbon Trong quâ trinh chay sac kÿ, dë cho quâ trinh tâch duac

ôn dinh, dô lâp lai cao, phâi bâo hoà pha dông truôc khi chay sàc kÿ bàng nuôc

- Trong sàc kÿ phân bô pha dào: pha dông là hê dung môi cüa nhûng dung môi dông tan vôi nuôc, cô khi nuôc lai là thành phân chmh trong pha dông vî du nhu methanol, acetonitril Trong nhiêu truông hop, thành phân pha dông côn cô thêm câc chât dêm pH dë ôn dinh pH cho quâ trinh sàc kÿ, chât tao phûc dë tao ra su rua giâi chon loc, chât tao cap ion dë sur dung trong sac kÿ cap ion.

- Trong sac kv trao doi ion: pha dông là dung dich nuôc cüa câc acid hay base, hoâc là dung dich nuôc cüa câc muô'i kim loai kiêm, kiêm thô, cô chûa chât dêm pH, chât tao cap ion, chât tao phûc Trong loai sàc kÿ này thi

pH pha dông và chât tao phûc cô ÿ nghîa rât lôn

2.6 Nguyên tâc lua chon:

a Chon kÿ thuât HPLC:

Cô bon kÿ thuât sàc kÿ co bân: Phân bô, hâp phu, Trao doi ion, Sàc

kÿ trên gel Bàng duôi dây trinh bày so dô chon kÿ thuât HPLC, nhûng thông tin trong bâng két hop vôi câc nguôn thông tin khâc së giüp lua chon duoc kÿ thuât sâc kÿ cô khâ nâng tâch tôt nhât Dô là nhûng thông tin vê: Phân tü luong, Tmh tan, Tmh phân eue

Bàng 2: Chon kÿ thuât HPLC

b Nguyên tàc lua chon pha tïnh và pha dông:

Nguyên tâc lua chon: Pha tïnh thuông duoc chon cô tmh phân eue giô'ng chât càn tâch và khâc vôi pha dông Van dê duoc xem xét và chon pha dông cho phù hop: bân chât cüa dung môi dë pha che pha dông; thành phân câc chât tao ra pha dông; toc dô dông, pH cüa pha dông

Trong HPLC, pha tinh thuông duoc gân hoâ hoc vôi chât mang tao nên hop chât co- siloxan

nhom silanol Dân chât Dân chât

cüa silicagel clorosilan siloxan

Néu gơc R- trong dân chât siloxan tao thành là mot nhom ft phân eue nhu octyl (C8), octadeyl (C18) hay phenyl và dung mơi phân eue nhu methanol, acetonitril, nuơc (ngồi câc dung mơi chfnh cơn cơ câc dung dich dêm PH nhu dung dich dêm phosphat dé on dinh cho quâ trinh sac kÿ) thi ta cơ sàc kÿ pha dâo Hiên nay, nguơi ta thuơng su dung loai cơt alkyl hô C8, C18 vơi câc tên thuơng phâm khâc nhau dë dinh luçmg trong truơng hop này

Néu R- là nhom khâ phân eue nhu alkylamin -(CH2)n-NH2 hay alkylnitril (CH2)-CN và dung mơi ft phân eue nhu hexan thi ta cơ sàc kÿ pha thuân Cơt hay su dung trong truơng hop này là cơt Si

Trong hai loai sac kÿ trên thi sâc kÿ pha dâo duoc sü dung nhiêu

h on vi cho két quâ tâch tơt vơi nhiêu doi tuang phân tfch

2.7 Câch dânh giâ pic:

- Dânh giâ diên tfch pic:

Diên tfch pic cüa mot chât là tuang ütig vơi tong luang chât dơ

Dë tmh diên tfch pic, hiên nay nguơi ta thuơng dùng mây tfch phân

diên tu gân vơi mây vi tmh ( sai sơ khồng 0,5% ) hồc mây tfch phân ca

hoc ( sai sơ không 1,3% ) Phuang phâp này cơ thë dùng cho câc pic khơng bi trơi duơng nën và câ pic cơ duơng nên bi trơi Phuang phâp này chỵ cân diëm dàu và cuợ cûa pic duac nhân ra chfnh xâc và cho két quâ tơt dợ vơi nơng dơ trung bỵnh vùa và cao

- Dânh giâ chiêu cao pic:

Khi pic cơ dang khơng doi thi chiêu cao pic ( không câch giùa

cô thë duac dùng dë dânh giâ sâc phô Mot diêu kiên dë âp dung cho viêc dânh giâ bàng chiêu cao pic là câc chî sô k’ hàng dinh.

Vôi pic cô duông nên bi nhiêu hoâc pic hep, doi xürng thi viêc xâc dinh chiêu cao pic së dê dàng h on và chfnh xâc hon viêc xâc dinh diên tfch pic

2.8 Câch tinh két quâ:

- Phuang phâp ngoai chuân: Dua trên ca sô so sânh mâu chuân và mâu thu trong cùng diêu kiên sàc Két quâ mâu thü duac tfnh toân so vôi mâu chuân dâ biét truôc nông dô hoâc suy ra tù duông chuân

- Phuong phâp chuân nôi: Là phuang phâp cho thêm vào mâu chuân và mâu thu mot luong chât không doi mà trong cùng diêu kiên sàc

kÿ, chât chuân nôi phâi duac tâch hoàn toàn và cô thôi gian luu gân vôi thôi gian luu cüa chât cân phân tfch trong mâu thu

- Phuang phâp thêm chuân: Thêm vào mâu thu nhûng luang dâ biét cüa chât tuang ûng câc thành phân càn phân tfch trong mâu thü Tién hành sâc kÿ câ hai dung dich mâu thü và mâu thü thêm chât chuân trong cùng mot diêu kiên sàc kÿ Két quâ duoc tfnh toân dua vào su tàng diên tfch hoâc chiêu cao pic

- Phuang phâp tfnh theo phân tràm diên tfch pic: Hàm luang phân tràm cüa câc chât càn phân tfch trong mâu thü duac tfnh bàng phân tràm diên tfch pic cüa nô so vôi tông diên tfch tât câ câc pic thành phân trên sac

dô Phuang phâp này chî dung khi dâp ûng hai yêu câu:

+ Tât câ câc chât trong mâu dêu duac rüa giâi và cho pic trên sàc

dô ( trù thuôc thü và câc chât duôi giôi han phât hiên)

+ Dâp ûng cüa detector nhu nhau doi vôi câc chât

PHAN 2: THÜC NGHIÊM VÀ KÉT QUÂ

1 Nguyên liêu và phuang phâp nghiên cuu

1.1 Hoâ chat và dung eu:

1.1.1 Hoâ chât:

- Chât chuân Cyclopentolate hydroclorid ( hàm luong 104,65% )

- Methanol, Acetonitril tinh khiét sâc kÿ

- Natri dihydrophosphat (PA), acid phosphoric (PA)

- Nuôc cât hai làn

1.1.2 Dung eu:

- Mây sac kÿ long hiêu nâng cao Shimadzu vôi Detector UV- VIS

- Cân phân tich Sartorius vôi dô chfnh xâc 0,1 mg

- Bô dung eu loc nuôc Elga

- Mây làc siêu âm Brasonic

- Bam chân không Laybord

- Giây loc 0,45p,m, màng loc 0,45 fim

- Mây do pH Metrohm

- Câc dung eu chfnh xâc nhu bînh dinh mue, pipet

1.2 Doi tuang - Nôi dung- Phuang phâp nghiên citu.

1.2.1 Doi tuang nghiên cûu:

- Mâu thuôc nhô mat Cyclopentolate hydroclorid 1% do viên mât trung uong sân xuât

Công thifc 1 lo 10ml:

+ Cyclopentolate hydroclorid 0,1g

+ Benzalkonium hydroclorid 50% 0,002ml

+ Natri carbonate và acid Boric vira dû pH 6,5- 7,5

+ Kali chloride diêu chmh dang truang hoâ

+ Nuôc cât vùra du 10ml

Mâu M,: NSX: 220506., Mâu M2: NSX: 220806

- Mâu thuoc nhô mât Cyclopentolate hydroclorid 0,5% do viên mât trung uong sân xuât.

Công thûc 1 lo 10ml:

+ Cyclopentolate hydroclorid 0,05g

+ Benzalkonium hydroclorid 50% 0,002ml

+ Natri carbonate và acid Boric vùa dû pH 6,5- 7,5

+ Kali chloride diéu chînh dâng truong hoâ.+ Nirôc cât vùra du 10ml

Mâu M3: NSX: 220806, Mâu M4: NSX: 230806

- Câc mâu thudc phâi dam bâo câc tiêu chuân TCCS vê hàm lirçmg tir 90%- 110% so vôi nhân

1.2.2 Nôi dung và phuctng phâp nghiên cûu:

1.2.2.1 Nôi dung nghiên cûu :

a Xây dung chirong trinh sac kÿ:

- Côt sàc kÿ

- Lua chon thành phàn và tÿ lê câc thành phàn pha dông

- Toc dô dông

- Birôc song thich hop

b Thâm dinh chuong trinh sàc kÿ dâ xây dung:

- Tfnh thîch hop cüa hê thong

- Dô tuyén tfnh giüa nong dô và diên tich pic

- Dô chînh xâc cüa phuong phâp

- Dô dung cüa phuong phâp

- Dô dàc hiêu cüa phuong phâp

- Dô on dinh cüa ché phâm trong dung môi pha dông

c Üng dung phuong phâp dâ xây dung dé dinh luçmg ché phâmthudc nhô mat Cyclopentolate hydroclorid 0,5% và 1% do Viên mât trung

' ICi4b¥t

1.2.2.2 Phuang phâp nghiên cûu:

- Su dung phuang phâp HPLC de dinh luçmg hoat chat

- Câc két quâ thuc nghiêm duac xûr lÿ thong kê de dânh giâ Mot so công thùc trnh thong kê xüf lÿ két quâ:

_ ] n

- Giâ tri trung binh: x = — -T] X n T?i

Dô lêch chuân: s - ' ' ' 1

2 «2 _ /=1

« - 1

ÊtaPhuang sai s : 5

- Sai so tuang doi: 8 % ~ — =— 100x

Dô lêch chuân tuong doi: RSD (% )= = 100x

s/r

/ VH

2 Két quâ thuc nghiêm:

2.1 Khâo sât dieu kiên sac kÿ:

2.1.1 Lua chon côt sâc kÿ:

Qua tham khâo tài liêu dâ công bô và diêu kiên thuc té cüa trung tâm kiêm nghiêm duoc phâm- mÿ phâm Hà Nôi, chüng tôi chon sü dung côt RP8 dë nghiên cûu

2.1.2 Lua chon dung môi pha dông:

Thành phân pha dông: Acetonitril, dd dêm Natri dihydrophosphat

pH 3( Cân chînh xâc khoâng 27,58 g, hoà tan trong 800ml nuôc, khuâ'y dêu Diêu chînh pH dén 3 bàng acid phosphoric, thêm nuôc vira dû 1000ml Loc qua màng loc 0,45 |um, làc siêu âm 30 phüt)

Dung dich chuân chay sac kÿ: Cân chmh xâc khoâng lOOmg Cyclopentolate hydroclorid chuân, pha loâng vôi nuôc dü 100ml Hut chmh xâc 10ml dd trên, pha loâng vôi nuôc dü 100ml

Thay doi tÿ le hôn hop Acetonitril và dd dêm Natri dihydrophosphat

PH 3 ta cô câc pha dông khâc nhau, Môi pha dông cho ta môt phô dô tuong üng nhu sau:

Hinh 3 : Sac kÿ do dung dich chudn lân 1.