Nghiên cứu môi trường nuôi chủng nấm sò của trại nấm An Hải Đông

trên nhiều nguồn nguyên liệu khác nhau... được nhiều nhà dinh dưỡnghọc quan tâm nghiên cứu, nhằm đánh giá vai trò của nấm như nguồn thực phẩm cho conngười... Hàm lượ

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN 1

MỞ ĐẦU 2

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN VỀ NẤM 4

1.1 Tổng quan về nấm sò 4

1.1.1 Đặc điểm sinh học, hình thái của nấm sò 4

1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm sò 8

1.1.3 Giá trị dinh dưỡng của nấm sò 9

1.2 Tiềm năng phát triển nấm sò ở Việt Nam 11

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Thời gian, địa điểm thí nghiệm 13

2.1.1 Thời gian 13

2.1.2 Địa điểm 13

2.2 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 13

2.2.1 Đối tượng 13

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 14

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 21

3.1 Mẫu pha loãng: 21

3.2 Mẫu hạt 24

3.3 Mẫu sợi tơ trắng 27

3.4 Kết quả nghiên cứu 28

3.5 Cấy và giữ giống trong ống thạch nghiêng 32

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34

TÀI LIỆU THAM KHẢO 36

DANH MỤC HÌNH 37

LỜI CẢM ƠN

Trên thực tế không có sự thành công nào mà không gắn liền với những sự hỗ trợ,giúp đỡ dù ít hay nhiều, dù trực tiếp hay gián tiếp của người khác Trong suốt khoảngthời gian học tập tại trường Cao Đẳng Công Nghệ, em đã nhận được rất nhiều sự quantâm giúp đỡ của Quý thầy cô, gia đình và bạn bè

Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến Quý thầy cô trường Cao Đẳng Côngnghệ- Đà Nẵng, những người đã tận tình truyền đạt cho em những kiến thức bổ ích vềchuyên ngành cũng như những bài học về đạo đức làm người để em có thể vững bướctrên con đường sự nghiệp sau này

Em xin chân thành cảm ơn các Thầy, Cô trong khoa Công Nghệ Hóa Học đã truyềnđạt cho em những kiến thức cần thiết về ngành Công nghệ sinh học Đặc biệt, em xincảm ơn cô hướng dẫn T.S Nguyễn Thị Đông Phương đã tận tâm hướng dẫn em thựchiện đề tài của mình qua từng buổi gặp mặt Nếu không có sự hướng dẫn, dạy bảo nhiệttình của Cô thì em nghĩ rằng Đồ Án Tốt Nghiệp này khó có thể hoàn thiện được tốt.Một lần nữa em xin chân thành cảm ơn Cô

Cuối cùng, em xin cảm ơn đến các anh chị tại HTX sản xuất giống và dịch vụ nuôitrồng nấm An Hải Đông Đà Nẵng đã tạo mọi điều kiện tốt nhất cho em

Sinh viên thực hiện

Trần Hoàng Vi Khuê Đà Nẵng, ngày 5 tháng 6 năm 2015

MỞ ĐẦU

Có thể nói, trong 10 năm trở lại đây, ngành trồng nấm đã phát triển rất mạnhmẽ, do nhu cầu của con người ngày càng tăng, nhiều người biết đến tác dụng của nấmhơn, còn có nhiều người chọn nó là thực phẩm không thể thiếu trong bữa ăn hàng ngàycủa họ Chính vì vậy, sản lượng thu hoạch nấm mỗi năm tăng một cách đáng kể Nhờnuôi trồng nấm mà nhiều người dân dã thoát khỏi cảnh nghèo, thậm chí còn có nhiềungười giàu lên từ ngành nghề đơn giản này Không những vậy, ngành nuôi trồng nấmnày tận dụng tất cả các phế thải trong nông nghiệp cũng như công nghiệp như rơm rạ,bã mía, mạc cưa hay bông vải,…Ngày nay, nấm còn là nguồn dược liệu quý mà conngười dần biết đến

Trong tất cả các loại nấm, thì nấm bào ngư hay còn gọi là nấm sò ngày nay đãtrở thành nguồn thức ăn hay món ăn dinh dưỡng không thể thiếu trong bữa cơm củamọi gia đình Với thời tiết thuận lợi khí hậu ẩm nhiệt đới gió mùa ở nước ta đã tạo điềukiện cho nấm phát triển rất tốt cho sản lượng cao, mang lại lợi nhuận lớn cho ngườidân để từ đó, người ta nghiên cứu cho ra nhiều cách trồng với nhiều môi trường khácnhau, giúp cho nghề nấm càng ngày càng phát triển

Lý do chọn đề tài:

- Ngành trồng nấm ở nước ta đang rất là phát triển Với việc nuôi trồng nhiều loạinấm như nấm sò, nấm rơm, nấm mộc nhĩ…đã giúp nhiều người thoát khỏi cảnhnghèo

- Nước ta có điều kiện khí hậu thuận lợi, nguồn nguyên liệu đơn giản, dễ kiếm,nguồn nhân lực dồi dào, giá lao động thấp, vốn đầu tư không cao, kỹ thuật trồngđơn giản nhưng nhu cầu tiêu thụ nấm trong và ngoài nước đang càng ngày càng

- Nấm ngoài là nguồn nguyên liệu giàu chất dinh dưỡng, nó còn có rất nhiều côngdụng, sử dụng trong rất nhiều ngành nghề, lĩnh vực khác.

Mục tiêu nghiên cứu:

- Ngày nay, vấn đề sức khỏe đã được mọi người đặt lên hàng đầu

- Ngoài việc tìm hiểu những đặc tính sinh trưởng và phát triển của nấm bào ngư,thì việc nghiên cứu cho ra môi trường nhân giống, giữ giống thích hợp nhất choloại nấm này vừa mang lại hiệu suất nuôi trồng cao, mà vốn đầu tư bỏ ra bớt tốnkém

- Nghiên cứu quy trình trồng và sản xuất nấm bào ngư

Nội dung nghiên cứu:

- Nắm vững đặc điểm, đặc tính, quy trình trồng nấm bào ngư

- Quan sát tốc độ lan tơ trên cả 2 môi trường

- Nhận xét và đưa ra kết quả tốt nhất

Phương pháp nghiên cứu:

- Thu nhập tài liệu, tìm hiểu từng thành phần của môi trường

- Sử dụng các phương pháp hóa lý, phương pháp vi sinh, phương pháp cấy bềmặt, phương pháp quan sát đặc điểm khuẩn lạc, phương pháp pha loãng mẫu

- Khảo sát và đánh giá chất lượng

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN VỀ NẤM 1.1 Tổng quan về nấm sò

1.1.1 Đặc điểm sinh học, hình thái của nấm sò.

Nấm bào ngư hay còn gọi là nấm sò xám, nấm dai, nấm trắng, nấm hương chân ngắn,

…, có tên khoa học là Pleurotus sp Gồm nhiều loài thuộc:

- Ngành phụ Basidiomycotina

- Ngành nấm thật- Eumycota

- Giới nấm Mycota hay Fungi

Nấm sò có tới 50 loài khác nhau Tuy nhiên cho đến nay chỉ có 10 loại nấm sò đượctrồng phổ biến Nó thường mọc hoang trên thân gỗ, mọc đơn độc hay mọc chồng lênnhau, gồm nhiều loại khác nhau về màu sắc và hình dạng, ít bị bệnh, dễ trồng

Nấm sò được chia làm hai nhóm lớn:

- Nhóm chịu lạnh: hình thành quả thể ở nhiệt độ 10-20oC

- Nhóm ưa nhiệt: hình thành quả thể ở nhiệt độ 25-30oC

Ở Việt Nam chủ yếu trồng các loại nấm sò ưa nhiệt như: nấm sò trắng, nấm sò xám Vìvậy, nước ta có thể trồng nấm sò quanh năm nhưng thuận lợi nhất từ tháng 9 đến tháng

4 (dương lịch) năm sau Việc nuôi trồng loại nấm này bắt đầu từ 20 năm trở lại đây,

trên nhiều nguồn nguyên liệu khác nhau Nó có thể được trồng trên rơm rạ, bã mía, mạtcưa…đều đạt được hiệu suất sinh học cao.

Hình 1.1 Nấm sò trắng Hình 1.2 Nấm sò tím

Hình 1.3 Nấm sò hồng Hình 1.4 Nấm sò đùi gà

Nấm sò có đặc điểm chung là tai nấm dạng phễu lệch, mọc thành cụm tập trung, mỗicánh nấm bao gồm 3 phần: mũ, phiến và cuống (hình 1.5)

Hình 1.5 Đặc điểm hình thái của nấm sò

1 Mũ nấm 2 Phiến nấm 3 Cuống nấm 4 Hệ sợi nấm

Theo Lê Duy Thắng (2001), nấm sò có đặc điểm chung là tai nấm có dạng phễu lệch,phiến nấm mang bào tử kéo dài xuống đến chân, cuống nấm gần gốc có lớp lông nhungnhỏ mịn Tai nấm sò khi còn non có màu sậm hoặc tối nhưng khi trưởng thành có màusáng hơn

Hình 1.6 Chu kỳ sinh trưởng của nấm bào ngư

Chu kỳ sống của nấm bắt đầu từ đảm bào tử hữu tính nảy mầm cho sợi tơ dinh dưỡng

sơ cấp và thứ cấp, “kết thúc” bằng việc hình thành cơ quan sinh sản là tai nấm Tai nấmlại sinh đảm bào tử và chu kỳ sống lại tiếp tục

Hệ sợi sơ cấp phát triển đầy đủ tạo nên hệ sợi thứ cấp, sau đó xảy ra sự kết hợp của hệsợi nấm thứ cấp và hình thành quả thể nấm hoàn chỉnh

Quả thể nấm sò phát triển qua các giai đoạn như sau:

- Dạng dùi trống: mũ xuất hiện dưới dạng khối tròn, còn cuống phát triển cả vềchiều ngang và chiều dài nên đường kính cuống và mũ không sai khác nhaunhiều.

- Dạng phễu: mũ mở rộng và cuống nằm ở giữa

- Dạng bán cầu lệch: cuống lớn nhanh một bên và bắt đầu lệch so với vị trí trungtâm của mũ

- Dạng lá lục bình: cuống ngừng tăng trưởng, trong khi mũ vẫn tiếp tục phát triển,bìa mép thẳng đến dợn sóng

Hình 1.7 Các giai đoạn phát triển của quả thể nấm sò

a Dạng san hô, b Dạng dùi trống, c Dạng phễu,

d Dạng bán cầu lệch, e Dạng lá lục bìnhTừ giai đoạn phễu sang phễu lệch sang bán cầu lệch có sự thay đổi về chất (giá trị dinhdưỡng tăng), còn từ giai đoạn phễu lệch sang dạng lá có sự nhảy vọt về khối lượng(trọng lượng tăng), sau đó giảm dần Vì vậy thu hái nấm bào ngư nên chọn lựa tai nấmvừa chuyển sang dạng lá [Lê Duy Thắng, 1999]

Ở gỗ mà nấm thường mọc, hầu như rất nghèo đạm Vì vậy, để mọc nấm tốt cần cóthêm nguồn đạm thích hợp Bột đậu nành cũng là nguồn bổ sung rất tốt cho nấm sò.Ngoài ra, mỗi tác giả cũng tìm thấy một loại đạm thích hợp cho nấm [Lê Duy Thắng,1999]

1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm sò

Các yếu tố ảnh hưởng đến nấm sò là:

- Nhiệt độ: cần phải ủ tơ trong khoảng 20-30oC và để nấm tạo quả thể trong nhiệt độ15-25oC

- Độ ẩm: nấm sò yêu cầu độ ẩm cơ chất khoảng 60-70%, nếu độ ẩm vượt quá 70%hay dưới 30% thì sẽ không có lợi cho sự sinh trưởng hệ sợi và hình thành quả thểnấm Ngoài ra, khi tới thời kỳ tưới đón nấm, độ ẩm không khí không được dưới70% Nếu thấp hơn 70%, quả thể sẽ bị vàng và khô mép Còn ở độ ẩm 50%, nấm sẽngừng phát triển và có thể bị chết Khi mà độ ẩm lên tới 95%, tai nấm dễ bị nhũn vàrũ xuống

- Độ pH: pH thích hợp đối với hầu hết các loài nấm sò trong khoảng 6-7 Nếu pHthấp thì quả thể nấm không hình thành được và ngược lại, pH quá kiềm thì quả thểnấm bị dị hình

- Ánh sáng: tùy vào từng giai đoạn khác nhau trong chu kỳ sống mà nấm sò cũng yêucầu ánh sáng khác nhau Nấm sò không cần nhiều ánh sáng, tốt nhất là 200-300 lux(ánh sáng phòng, ánh sáng khuyếch tán) Nếu cường độ ánh sáng quá mạnh sẽ ngăncản việc hình thành nụ nấm, và ngược lại, nếu ánh sáng quá yếu sẽ làm chân nấmdài ra, mũ hẹp

- Nồng độ CO2: quá trình nảy mầm của bào tử và tăng trưởng của tơ nấm bào ngưcần nồng độ CO2 cao (22%), nhưng khi cần ra nấm thì nồng độ CO2 phải giảm vàtăng lượng oxy lên

- Độ thông thoáng: cần phải thoáng mát, vừa phải, và tránh gió lùa trực tiếp

- Dinh dưỡng: cần phải bổ sung đầy đủ các chất cần thiết trong quá trình nuôi trồngnấm, để sợi nấm phát triển nhanh hơn, cho sản lượng nấm cao hơn

Hình 1.8 Nhà nuôi ủ

1.1.3 Giá trị dinh dưỡng của nấm sò

Giá trị về mặt y học:

- Nấm sò được xem là loại nấm dược liệu do nó có chứa các statin như lovastatin

- Trong nấm sò tươi chứa protit 4%, gluxit 3,4%, vitamin C, vitamin PP, các acid béokhông no…

- Khi nấm sò ở dạng sinh khối khô thì hàm lượng protein chiếm tới 33 đến 43%,ngoài ra các nhà nghiên cứu còn tìm thấy các acid amin như glutamic, valin,ixoluxin…

- Đặc biệt, các nhà khoa học còn chỉ ra rằng, trong nấm sò có chất plutorin có côngdụng kháng khuẩn gram dương và các tế bào ung thư Một số nghiên cứu khác đãchứng minh nấm sò có tác dụng giảm cholesterol và đường máu

Nấm sò có tác dụng rất tốt đối với các bệnh sau:

- Có tác dụng phòng ngừa và điều trị các bệnh liên quan đến huyết áp.

- Chống béo phì, chữa bệnh đường ruột

- Làm giảm cholesterol trong máu

- Hỗ trợ điều trị bệnh gout

- Phòng ngừa bệnh ung thư

Giá trị về mặt dinh dưỡng:

Nấm sò có rất nhiều giá trị dinh dưỡng, nó chứa nhiều protein, vitamin và các axitamin có nguồn gốc thực vật, dễ hấp thụ bởi cơ thể con người Đặc biệt với hàm lượngprotein chiếm tới 33- 43%, nấm sò hoàn toàn có thể thay thế lượng đạm từ thịt, cá,… cónguồn gốc từ động vật Nấm bào ngư không chỉ ăn ngon mà còn có giá trị dinh dưỡng cao.Thành phần các chất dinh dưỡng chính của một số loài nấm bào ngư bao gồm:carbonhydrate, protein, amino acid, chất béo, khoáng chất, được nhiều nhà dinh dưỡnghọc quan tâm nghiên cứu, nhằm đánh giá vai trò của nấm như nguồn thực phẩm cho conngười Carbonhydrate và protein là thành phần chính, nó chiếm từ 70 đến 90% trọng lượngkhô quả thể Chất béo có hàm lượng thấp trong hầu hết các loài, dao động trong khoảng 1-

2%, ngoại trừ P.limpidus(9,4%).

Các chất dinh dưỡng và vi chất trong nấm có lợi cho sức khỏe con người, dễ dàngchuyển hóa thành năng lượng cho cơ thể, đây là giải pháp rất tốt dành cho các bệnh nhân bịtiểu đường, bệnh gút, mỡ máu cao và những người thích ăn chay

Món ăn ngon từ nấm sò:

Đối với người bị suy nhược cơ thể, các món ăn chế biến từ nấm sò giúp phục hồisinh lực nhanh chóng Việc chế biến các món ăn từ nấm sò cũng không mất nhiều thời gianmà vẫn rất ngon miệng, vừa bổ dưỡng, vừa có tác dụng trị bệnh

Bảng 1.1 Tỉ lệ % so với chất khô

Tên nấm Độ ẩm(W) Protein Lipid

Bảng 1.2 Hàm lượng vitamin và chất khoáng Đơn vị tính: mg/100g chất khô

Tên nấm Acid

1.2 Tiềm năng phát triển nấm sò ở Việt Nam

Nấm sò đã được trồng tại Việt Nam khoảng 20 năm nay, với trên nhiều nguồn nguyên liệu khác nhau Hiện tại thì trên thị trường có rất nhiều loại nấm sò hay còn gọi là nấm bào ngư, nhưng được ưa chuộng nhất có lẽ là hai loại nấm bào như màu xám, và màu trắng

Kỹ thuật trồng, chăm sóc nấm sò đơn giản, không khó, nhưng hiệu quả kinh tế mà nó mang lại khá cao

Có thể nói, nhờ trồng nấm sò mà nhiều hộ nông dân Việt Nam đã thoát nghèo

Mô hình trồng nấm sò đã được nhân rộng ra nhiều nơi như: Đồng Nai, Bến Tre, Củ

Chi, Vĩnh Long, Bình Dương,…Việc trồng nấm bào ngư đúng quy cách và theo quy

mô lớn còn có thể giúp một số doanh nhân biết cách đầu tư làm giàu nhanh chóng

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian, địa điểm thí nghiệm

2.1.1 Thời gian

Thí nghiệm được bắt đầu tiến hành từ tháng 3/2015 đến tháng 5/2015

Meo giống nấm sò (Pleurotus sp.) của trại nấm An Hải Đông- lô 47, 48 đường

Thích Thiện Chiểu, khu tái định cư Suối Đá, phường Thọ Quang, quận Sơn Trà,Đà Nẵng

- Môi trường: PDA (Potato Dextro Agar) và Czapek dox

Bảng 2.1 Thành phần môi trường

-200g Khoai tây

-20g Glucose

-20g Agar

-20g Agar-30g Saccaroza-2g NaNO3

-1000ml nước cất -1g K2HPO4

-0,5g MgSO4.7H2O-0,5 KCl

-1000ml nước cất

- Dụng cụ cấy meo giống: que cấy, đèn cồn, bình xịt cồn, bông không thấm nước,đĩa petri, ống nghiệm, bình tam giác, micropipette, pipet,…

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu

- Tất cả các thao tác chuẩn bị môi trường, đổ đĩa petri, đổ ống thạch nghiêng, cấy,tách sợi tơ trắng ra khỏi hạt, kiểm tra đều được thực hiện trong tủ cấy, sátkhuẩn bằng cồn, quanh ngọn lửa đèn cồn

Bước 1: Chuẩn bị 2 môi trường nuôi cấy nấm điển hình

* Môi trường PDA :

Khoai tây gọt vỏ, thái hạt lựu, ninh sôi 30 phút gạn lấy nước Cân 20g glucosevà 20g agar cho vào bình tam giác, cho 1 ít nước cất vào khuấy cho tan hết rồi cho dịchchiết khoai tây vào, bổ sung thêm nước cất đủ 1 lít Ta tiếp tục lắc đều cho các thànhphần hòa tan vào nhau, đậy nút bông và đem đi hấp tiệt trùng ở 121oC

* Môi trường Czapek dox:

Cân 20g agar, 30g saccaroza, 2g NaNO3, 1g K2HPO4, 0,5g MgSO4.7H2O, 0,5gKCl cho vào bình tam giác, bổ sung 1 lít nước cất, lắc đều cho tan hết, đậy nút bông vàđem đi hấp tiệt trùng ở 121oC

Hình 2.1 Môi trường PDA và Czapek dox Bước 2: Chuẩn bị các mẫu để tiến hành cấy vào đĩa petri

- Mẫu 1: Mẫu pha loãng

Chuẩn bị 6 ống nghiệm sạch

Ống nghiệm đầu tiên, kí hiệu là A : dùng pipet hút 10ml nước muối sinh lí chovào ống nghiệm, ta tiếp tục bỏ 1 mẫu meo giống gốc vào, đậy nút bông lại, lắc đều chosợi tơ nấm tách khỏi lúa và tan đều trong nước

5 ống nghiệm còn lại, mỗi ống nghiệm ta dùng pipet hút 9ml nước cất cho vào các ốngnghiệm đó, đánh số thứ tự từ 1 đến 5

Dùng micropipette hút 1ml từ ống nghiệm A chứa mẫu meo giống gốc đã hòatan trong nước muối sinh lí, cho vào ống nghiệm số 1, hút lên hút xuống vài lần đểchúng hòa tan vào nhau

Tiếp tục, ta hút 1ml từ ống nghiệm số 1 cho vào ống nghiệm số 2, rồi hút 1ml từống nghiệm số 2 cho vào ống nghiệm số 3, hút 1ml từ ống nghiệm số 3 cho vào ốngnghiệm số 4, và hút 1 ml từ ống nghiệm số 4 cho vào ống nghiệm số 5, cuối cùng hút1ml từ ống nghiệm số 5 cho ra ngoài

Như vậy, ta đã có 5 ống nghiệm với nồng độ pha loãng từ ống nghiệm A chứameo giống gốc lần lượt là: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5.

Hình 2.2 Pha loãng mẫu

Hình 2.3 Chuẩn bị pha loãng mẫu

- Mẫu 2: hạt lúa có dính sợi tơ trắng trong bịch meo giống gốc.

- Mẫu 3: sợi tơ trắng được tách từ hạt lúa trong bịch meo giống gốc.

Bước 3: Đổ môi trường lên đĩa petri

- Ta tiến hành đổ môi trường PDA lên 21 đĩa petri, môi trường Czapek dox lên 21đĩa petri còn lại.

- Để nguội các đĩa petri chứa môi trường PDA và Czapek dox khoảng 5 phút

Bước 4: Cấy mẫu vào các đĩa thạch

- Chuẩn bị mẫu, đĩa thạch môi trường, đèn cồn, que cấy, bình xịt cồn,micropipette, nhíp

- Làm sạch tủ cấy và tất cả dụng cụ cần thiết, bên trong và ngoài tủ cấy bằng cồn.Đặt tất cả dụng cụ và đồ dùng cần thiết vào tủ Bật đèn tia cực tím, sau khi đèn

UV đã tắt, ta bật quạt thông gió suốt thời gian sử dụng Sát khuẩn tay bằng bìnhxịt cồn, đốt đèn cồn

- Dùng micropipette hút 1 ít mẫu pha loãng 10-1 trong ống nghiệm số 1, nhỏ 4 giọtlên đĩa petri chứa môi trường PDA, sau dùng que cấy dàn đều 4 giọt đó ra theohình ziczac Ta làm giống như vậy với 2 đĩa petri tiếp theo chứa môi trườngPDA, và cũng cấy từ mẫu pha loãng 10-1 Khi cấy xong 3 đĩa, ta gói giấy báocẩn thận, ghi mẫu, môi trường, ngày cấy và để nuôi trong tủ cấy Tương tự, tacũng nhỏ 4 giọt, rồi dàn đều ra theo hình ziczac lên đĩa thạch chứa môi trườngCzapek dox, làm 3 đĩa thạch như vậy, cũng gói giấy báo, ghi mẫu, môi trườngngày cấy và cũng để nuôi chúng trong tủ cấy

- Ta tiếp tục làm như vậy với mẫu pha loãng 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 từ ống nghiệm số

2, số 3, số 4, số 5 lên các đĩa thạch, mỗi mẫu pha loãng, ta làm 6 đĩa thạch trongđó 3 đĩa petri chứa môi trường PDA, 3 đĩa chứa môi trường Czapek dox, góigiấy báo, ghi mẫu, môi trường, ngày cấy và cũng nuôi trong tủ cấy Khi cấy cácmẫu khác nhau, ta phải thay đầu côn của micropipette để tránh các mẫu lẫn vớinhau, rửa sạch que cấy

- Khi đã cấy xong các mẫu pha loãng, ta dùng nhíp lấy 6 hạt có dính sợi tơ trắngtừ bịch meo giống gốc, bỏ vào 6 đĩa thạch petri(3 đĩa môi trường PDA, 3 đĩa

môi trường Czapek dox), gói giấy báo cẩn thận, ghi mẫu, môi trường, ngày cấyvà để trong tủ ấm.

Hình 2.4 Đĩa petri chứa hạt giống

- Tiếp tục, ta dùng nhíp đã rửa sạch để tách sợi tơ trắng ra khỏi hạt lúa được lấy ratừ bịch meo giống gốc, bỏ các mẫu sợi tơ trắng đó vào 6 đĩa thạch petri(3 đĩamôi trường PDA, 3 đĩa môi trường Czapek dox), gói giấy báo cẩn thận, ghimẫu, môi trường, ngày cấy và để trong tủ ấm

Hình 2.5 Đĩa petri chứa sợi tơ trắng

- Các thao tác thực hiện cấy, tách, gói giấy báo, đều phải thực hiện quanh ngọnlửa đèn cồn để tránh nhiễm khuẩn

- Nuôi khoảng cứ cách 2 ngày, ta mở các đĩa petri đó ra kiểm tra, quan sát sự pháttriển của các mẫu đó trong 2 môi trường PDA và Czapek dox, loại bỏ những

mẫu bị nhiễm mốc, nhiễm khuẩn hay bị hỏng Sau khi kiểm tra xong, ta cũnggói giấy báo lại và để lại trong tủ cấy.

Bước 5: Giữ giống trong ống thạch nghiêng

- Sau khi nuôi khoảng 20 ngày, ta chọn mẫu phát triển tốt nhất trong môi trườngtối ưu nhất, để cấy nó qua ống thạch nghiêng để giữ giống

- Giữa 2 môi trường là PDA và Czapek dox sau khi nuôi thử nghiệm, ta sẽ biếtđược môi trường nào thích hợp nhất để nuôi cấy chủng nấm sò, từ đó ta sẽ phalại môi trường đó và đổ nó vào ống nghiệm, khoảng 2/3 ống nghiệm là được,đậy nút bông, để nghiêng ống nghiệm 15o trong 5 phút để nguội và để tạo thạchnghiêng Tất cả ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng cũng như môitrường đều phải được hấp tiệt trùng ở 121oC

Hình 2.6 Môi trường thạch nghiêng

- Chuẩn bị đĩa petri chứa mẫu phát triển tốt nhất trong môi trường tối ưu nhất, cácống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng, que cấy, đèn cồn

- Làm sạch tủ cấy và tất cả dụng cụ cần thiết, bên trong và ngoài tủ cấy bằng cồn.Đặt tất cả dụng cụ và đồ dùng cần thiết vào tủ Bật đèn tia cực tím, sau khi đèn