ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)

ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN )ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)

Đ NH LƯ NG T NG COLIFORMS B NG PHƯƠNG PHÁP TÍNH Ị Ợ Ổ Ằ

N I Ộ DUNG

I Đ I TƯ NG PHÂN TÍCH: COLIFORMS Ố Ợ

II PHƯƠNG PHÁP Đ NH LƯ NG : MPN Ị Ợ

III QUY TRÌNH PHÂN TÍCH

IV VÍ D PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VSV Ụ

I COLIFORMS

 Coliforms là nh ng tr c khu n gram (-) ữ ự ẩ

 Không sinh bào tử

 Hi u khí ho c k khí tùy ý ế ặ ị

 Có kh năng lên men lactose sinh acid và ả

sinh hơi 37 0c trong 24- 48h ở

 Coliforms đư c xem là nhóm vsv ch th ợ ỉ ị

Echerichia Coli Citrobacter Freundii Bacteria

Klebsiella Pneumoniae

Carbapenemase Enterobacter aerobacter

Coliforms

phân + IMViC

Là coliforms ch u ịnhi t có kh năng ệ ảsinh indole khi ủ ở44.5 0c /24h

trong tryptone

II PHƯƠNG PHÁP MPN (MOST

PROBABLE NUMBER

 Phương pháp MPN d a trên nguyên t c xác su t ự ắ ấ

th ng kê s phân b vsv trong các đ pha loãng ố ự ố ộ

 S l n dương tính đư c ghi nh n và so sánh v i ố ầ ợ ậ ớ

b ng th ng kê => giá tr ư c đoán s lư ng vsv ả ố ị ớ ố ợ trong m u ẫ

H TH NG MPN /g (ml) Ệ Ố

III QUY TRÌNH PHÂN TÍCH

- Cho vào các ng nghi m có ch a môi ố ệ ứ

trư ng thích h p cho s tăng trư ng c a đ i ờ ợ ự ở ủ ố

tư ng VSV c n đ nh lư ng m t th tích chính ợ ầ ị ợ ộ ể xác dung d ch m u 3 n ng đ b c 10 ở ị ẫ ở ồ ộ ậ

liên ti p, m i m c 3 ho c 5 ng nghi m ; ế ỗ ứ ặ ố ệ ủ nhi t đ và th i gian thích h p

- K t qu nhìn th y ch ng minh s tăng ế ả ấ ứ ự

trư ng c a vi sinh v t c n ki m đ nh ( sinh ở ủ ậ ầ ể ị

hơi, đ i màu, đ c, …) ổ ụ

- Ghi nh n s lư ng ng nghi m ậ ố ợ ố ệ

MÔI TRƯ NG Ờ

HÓA CH T Ấ

C N 90 Đ VÀ 70 Đ Ồ Ộ Ộ

HCL 10%

NAOH 10%

QUY TRÌNH TH C HI N Ự Ệ

m u trong 1 phút ẫ

Bư c 2 ớ : Chuy n ể1ml dung d ch ị

m u pha loãng ẫ ở

m i n ng đ 10-1 ỗ ồ ộ, 10-2, 10-3 vào

ng nghi m có

ố ệ

ch a 10ml canh ứLSB, m i n ng đ ỗ ồ ộ

có 3 ng l p l i, ố ặ ạ

m i ng nghi m ỗ ố ệcho 1 ng ố

Durham

Bư c 3ớ :

+ Sau 48 gi - các ng ờ ốnghi m đư c 37o C ệ ợ ủ ở

- Ghi nh n các ng LSB ậ ốsinh hơi và canh trư ng ờ

đ c ụ

+ K t lu n các ng LSB ế ậ ốdương tính (+)

10 ML BGLB

Bư c 5ớ :

+ Ghi nh n s ng ậ ố ốsinh hơi và canh trư ng đ c m i ờ ụ ở ỗ

đ pha loãng ộ

+ K t lu n các ng ế ậ ốBGLB ( + )

IV.Phân tích coliforms trong m u nư c ẫ ớ

 gi i thi u v vsv trong m u nư c ớ ệ ề ẫ ớ

 Nư c, dung môi ph bi n, là đi u c n thi t cho cu c ớ ổ ế ề ầ ế ộ

s ng: nư c s ch đ t m, u ng và n u ăn Th t không ố ớ ạ ể ắ ố ấ ậ

may, nhi u tác nhân gây b nh lây truy n qua ngu n ề ệ ề ồ

nư c M t s các loài gây b nh như b i li t, thương hàn, ớ ộ ố ệ ạ ệ

t , viêm gan, B nh vi khu n Shigella, Salmonella ả ệ ẩ

 Coliforms có đ y đ các tiêu chu n và là nh ng sinh ầ ủ ẩ ữ

v t ch th chu n đư c s d ng đ ki m tra tình tr ng ô ậ ỉ ị ẩ ợ ử ụ ể ể ạ nhi m sinh h c c a nư c ễ ọ ủ ớ

 Theo tiêu chu n c a EPA thì nư c u ng và nư c ẩ ủ ớ ố ớ

trong h bơi ph i có đ tinh khi t cao nh t Không th có ồ ả ộ ế ấ ể nhi u hơn m t m u dương tính (> 1 coliform/100 ml) ề ộ ẫ

trong 40 m u đư c ki m tra trong m t tháng và n ng đ ẫ ợ ể ộ ồ ộ coliform phân ph i b ng không ả ằ

 TH T C PHÂN TÍCH NƯ C Ủ Ụ Ớ

Giai đo n 1: ạ

Chu n b : ẩ ị

• 1 m u nư c ẫ ớ

• 8 đĩa petri vô trùng

• 2 chai th ch Agar tan ch y (PCA, 100 ml / chai) - ạ ả trong nư c t m 50 ° C ớ ắ

• 15 ng Lactose Lauryl Tryptose Broth(LLTB, v i ố ớ

ng Durham)

ố

• Pipett vô trùng

T ng ổ

s vi ố

khu n ẩ

hi u khí ế

Giai đo n 2: ạ

• 15 ng nghi m cho m i ố ệ ỗmôi trư ng Brilliant Green ờLactose Bile (BGLB) Broth và

EC Broth (v i ng Durham ớ ốcho m i ngỗ ố

Nươc t m 44,5 ° Cắ

• K t qu tăng trư ng tiêu ế ả ở

bi u trong lactose lauryl ểtryptose broth

• Quan sát và ghi nh n các ậ

ng dương tính Các ng

dương tính là các ng sinh ốhơi và canh trư ng b đ c.ờ ị ụ

d ng ụ

b ng MPNả

K t qu trong ế ả

BGLB

K t qu tăng ế ả trư ng đi n ở ể hình quan sát cho canh EC

 Ghi l i s lư ng tích c c (tăng trư ng và ạ ố ợ ự ở

khí) như trong giai đo n trư c ạ ớ

 T m t ng canh BGLB pha loãng cho th y ừ ộ ố ấ

s tăng trư ng và sinh khí, các đư ng s c ự ở ờ ọ trên đĩa th ch EMB cho th y s phân l p ạ ấ ự ậ

c a các khu n l c Làm tương t cho các ủ ẩ ạ ự canh EC các đĩa 37 ° C trong 1-2 Ủ ở

ngày.

 Đ i v i m i coliform cô l p, th c hi n các ố ớ ỗ ậ ự ệ

xét nghi m c n thi t ho c quan sát trên ệ ầ ế ặ

m i thi t b như trong thí nghi m trư c ỗ ế ị ệ ớ

đây M i cô l p ph i lên men lactose ỗ ậ ả

thành acid và khí đ t có th nhìn th y đ ố ể ấ ể

đư c coi là m t coliform ợ ộ

The end