tiểu luận môn học xác định hàm lượng của astragalin và isoquercitrin trong lá trinh nữ hoàng cung bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao và điện năng di mao quản

Trường Đại học Nông Lâm TP.HCMKhoa Chăn Nuôi – Thú Y Môn: Dược Phân Tích Xác định hàm lượng của astragalin và isoquercitrin trong lá trinh nữ hoàng cung bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao và

Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM

Khoa Chăn Nuôi – Thú Y Môn: Dược Phân Tích

Xác định hàm lượng của astragalin và isoquercitrin trong lá trinh nữ hoàng cung bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao và điện

năng di mao quản

Sv thực hiện:

Ngô Thị Uyên Phương Trần Thị Thu Thảo Nguyễn Thị Cẩm Tiên Triệu Thu Nghiêm

Huỳnh Phú Quý Huỳnh Thị Kim Thu

GVHD: PHÙNG VÕ CẨM HỒNG

I ĐẶT VẤN ĐỀ

 Trinh nữ hoàng cung hay Náng lá rộng, Tỏi

lơi lá rộng, Tây nam văn châu lan, Tỏi Thái

Lan, tên hán văn là Vạn châu lan hay Thập

bát học sỹ

 Danh pháp khoa học:Crinum latifolium- là một

loài thực vật có hoa trong họ Amaryllidaceae

 Được miêu tả khoa học đầu tiên năm 1753.

 Cây Trinh nữ hoàng cung có nguồn gốc từ Ấn

Độ

 Các nước vùng Đông Nam Á như Thái Lan,

Lào, Malaysia, Việt Nam và phía Nam Trung

Quốc…

Phân loại khoa học Giới (regnum) Plantae

(không phân hạng) Angiospermae(không phân

hạng) Monocot

Bộ (ordo) Asparagales

Họ (familia) Amaryllidaceae Chi (genus) Crinum

Loài (species) C latifolium

Điều trị u phì đại lành tính tuyến tiền liệt

Hỗ trợ điều trị u

xơ tử cung

 Nhóm hợp chất flavonoid cũng được phân lập và chứng minh có công dụng chống oxy hóa:

Chất đối chiếu:

được phân lập và xác định cấu trúc Xác định độ tinh khiết bằng phương pháp HPLC

quercetrin (91,34%) do viện kiểm nghiệm

thuốc tp.Hồ Chí Minh cung cấp

II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Đối tượng nghiên cứu:

Astragalin, isoquercitrin trong cao flavonoid chiết từ

lá TNHC Lá TNHC được thu hái tại huyện Tây Sơn tỉnh Bình Định vào tháng 4 năm 2012 và định danh bởi PGS Võ Thị Bạch Huệ - khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh

Trang thiết bị

Dung môi, hóa chất

 Acid hydrocloric, ethyl acetat

dinatri tetraborat

Phương pháp nghiên cứu

cho vào cốc có mỏ 250 ml

 Ở 50 0C siêu âm 3 lần, mỗi lần 30 phút với

50ml cồn 70%

 Chiết xuất cao Flavonoid từ lá TNHC:

môi đến 1/3 thể tích Acid hóa dịch chiết bằng

HCl 1% đến pH 3-4

lớp ethyl acetat để bay hơi đến rắn thu được cao Flavonoid

Chuẩn bị mẫu phân tích HPLC

 Pha dung dịch đối chiếu

Pha dung dịch chất đối chiếu trong pha động với nồng độ : Astragalin 250 (µg/ml)

Chuẩn bị mẫu phân tích CE

thêm 5 ml methanol, điều chỉnh pH đến 9,0 bằng acid boric, thêm nước để được 50 ml

Dung dịch đối chiếu

Pha dung dịch đối chiếu trong methanol

Nồng độ của : astragalin 250 (µg/ml)

isoquercitrin 100 (µg/ml)

Thêm vào dung dịch đối chiếu một lượng

chuẩn nội quercetin đạt nồng độ 100 (µg/ml)

Dung dịch thử

 Toàn bộ cao Flavonoid được hòa tan và điền đầy bằng

methanol trong bình định mức 10 ml.

 Lọc qua màng lọc 0,22 µm, siêu âm 10 phút trước khi

tiêm vào hệ thống CE.

Điều kiện điện di

 Cột mao quản silica nung chảy :

Khảo sát tính phù

hợp của hệ thống.

 Đảm bảo tính lặp lại của thiết bị.

 Thực hiện trên mẫu đối chiếu và mẫu thử.

 Tiêm 6 phần liên tiếp.

Thông số Isoquercitrin Astragalin Isoquercitrin Astragalin

Bảng 1: Kết quả khảo sát tính phù hợp của hệ thống trên mẫu đối chiếu xác định hàm

lượng astragalin và isoquercitrin trong cao flavonoid chiết từ lá TNHC bằng HPLC.

III Kết quả và thảo luận

Bảng 2: Kết quả khảo sát tính phù hợp của hệ thống trên mẫu định lượng

astragalin và isoquecitrin trong cao flavonoid chiết từ TNHC bằng CE.

Mẫu đối chiếu Mẫu thử

Thông số Astragalin Isoquercitrin Astragalin Isoquercitrin

Sắc ký đồ HPLC và điện di đồ CE của mẫu thử của các pic có

thời gian lưu tương đương với các pic của mẫu đối chiếu

Khi thêm vào mẫu thử một lượng chất đối chiếu thì có sự tăng lên về diện tích (hoặc tỷ số diện tích) trong mẫu thử Phổ UV tại thời gian lưu của các pic trong mẫu thử giống mẫu đối chiếu.

Thực hiện 6 lần định lượng trên 6 mẫu thử cùng nồng độ

trong 6 ngày liên tiếp

Độ đúng:

Dùng phương pháp trên chuẩn

Tiến hành sắc ký và điện di theo điều kiện đã chọn

Bảng 4: Kết quả thẩm định qui trình định lượng isoquercitrin, astragalin bằng CE

Các hệ số R 2 đều lớn hơn 0,99; vì vậy Astragalin và Isoquercitrin có sự tuyến tính giữa nồng độ Astragalin, isoquercitrin và diện tích pic ( hoặc tỉ số diện tích pic) trong

Astragalin Hàm lượng(ppm)-định lượng bằng

HPLC

Hàm lượng(ppm) -định lượng bằng CE 279,99 282,85 276,06 274,65 278,75 292,75 274,86 288,00 268,40 271,01 286,91 273,11 TB: 277,49 TB: 280,40 RSD: 2,21% RSD: 3,15%

Isoquercitrin Hàm lượng(ppm)-định lượng bằng

HPLC

Hàm lượng(ppm) -định lượng bằng CE 125,8 130,95 124,7 132,06 130,0 129,45 124,7 131,86 125,9 124,30 130,1 127,48 TB: 126,87 TB: 129,35 RSD: 1,99% RSD: 2,32%

Bảng 5: Kết quả định lượng astragalin và isoquercitrin trong lá

TNHC bằng phương pháp HPLC và CE(n=6)

Kết quả phân tích Anova không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa kết quả định lượng Astragalin và isoquercitrin bằng phương pháp HPLC và CE.

methanol, 25 o C, 25 kV.

Đầy đủ yêu cầu về:

Lựa chọn astragalin và isoquercitrin làm chất đối

chiếu là phù hợp vì chiếm hàm lượng cao trên sắc ký đồ

và điện di đồ của mẫu thử ( 264; 346 nm của astragalin

và 256; 353 nm của isoquercitrin)

ký pha đảo

chế hoạt động của phương pháp CE)

BÀN LUẬN

KẾT LUẬN

đồng thời astragalin và isoquercitrin

trong cao flavonoid của lá Trinh nữ

hoàng cung bằng HPLC và CE.

định đầy đủ về: Độ đặc hiệu, tính

tuyến tính, độ chính xác, độ đúng.

phương pháp khi xử lý kết quả bằng

thống kê ANOVA.

 Quy trình được ứng dụng để đánh giá

chất lượng nguồn nguyên liệu và các

sản phẩm từ Trinh nữ hoàng cung.

Tài liệu tham khảo:

1 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC – 03/2013 ( SỐ 443 NĂM 53) trang 53-58.

2. Đặng Văn Hòa, Vĩnh Định (2011), Thẩm định qui trình phân tích, Kiểm nghiệm thuốc, NXB Giáo dục VN, trang 135-140.

3. Huber, Ludwig (2007), Validation and qualification in analytical

laboratorios, pp140,142-144, 146-148.

4. I.C.H.Harmonised tripartite guidelines (2005), Validation of analytical procedure: text and methodology, pp.1-13

5 Nguyen Huu Lac Thuy, Vo Thi Bich Hue, Nguyen Thi Phuong Trang

(2011), “Isolation and identification of isoquercitrine from the leaves of Crinum latifolium L Amaryllidaceae”,Proceeding of the 7 th Indochina conference on pharmaceutical sciences, pp.604-606

6 Nguyen Huu Lac Thuy, Vo Thi Bich Hue, Le Quang Hanh Thu (2011)

“Antioxidant activity of extracts from Crinum latifolium L

Amaryllidaceae”, Proceeding of the 7 th Indochina Conference on

Pharmaceutical Sciences, pp 607-611