NGHIÊN cứu bán TỔNG hợp và xác ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HOÁ của DIOSMIN và dẫn XUẤT

TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI... TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI... TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI... TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU Ở VIỆT NAM... Xác định khả năng kháng oxy hóa X

BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

CỦA DIOSMIN VÀ DẪN XUẤT BÁO CÁO LUẬN VĂN THẠC SĨ

TỔNG QUAN

3

Tên thường gọi: diosmin.

Tên khoa học: diosmetin-7-rhamnoglucoside hoặc

2''

OH HO

OH HO

HO

H 3 C

6'''

Scrophularia nodosa

Hyssopus officinalis

Citrus Fabaceae

1 DIOSMIN

OH HO

O HO

O

O O

O

i Acetate hóa

ii Tác nhân khử iii Thủy phân

O OH

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

O

OH HO

O O

O

O OH

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

O

OH HO

o Sử dụng tác nhân NBS, benzoyl peroxide 1

(1) N B Lorette et al, The use of N‑Bromosuccinimide and pyridinium bromide

perbromide in the conversion of flavanones into flavones, 1951, The journal of organic

chemistry, 16, pp 930-933.

2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU

TRÊN THẾ GIỚI

O O

O

O OH

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

O

OH HO

HO

H 3 C

Diosmin

ii SeO 2 iii NaOH H=66.12%

o Sử dụng tác nhân selen dioxide 2

(2) Redaeill, Claudlo et al, Process for producing flavone derivatives with medicinal

activity, European Patent Application, 1982.

2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU

TRÊN THẾ GIỚI

O O

O

O OH

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

O

OH HO

HO

H 3 C

Diosmin

ii Bromo lỏng iii NaOH H=37%

O O

O

O OH

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

O

OH HO

Br

-2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU

TRÊN THẾ GIỚI

O OH

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

O

OH HO

O

O

OH OCH 3 O

OH HO

O HO

OH HO

O

HO

O

OH HO

OH HO

O HO

Năm 2011, Nguyễn Thị Mỹ Duyên (đại học Y dược TP.HCM) nghiên cứu theo quy trình dùng tác nhân NBS (45.8%) và sử dụng oxone®/sodium bromide.

14

2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU

Ở VIỆT NAM

Xác định khả năng kháng oxy hóa

Xác định khả năng gây độc tế bào

Hesperidin Diosmin Dẫn xuất

diosmin

MỤC TIÊU

THỰC NGHIỆM

16

- Hesperidin được tách chiết từ vỏ quýt, được làm sạch tại Phòng Công nghệ Hữu cơ, Viện Công nghệ Hóa học

- Iodine, (CH3)2SO4, (CH3CO)2O, allyl bromua được nhập từ Châu Âu và các hoá chất khác đủ tiêu chuẩn, tinh khiết

1 NGUYÊN LIỆU

17

- Kết tinh, sử dụng sắc ký cột silica gel pha thường, kỹ thuật sắc ký lớp mỏng.

-Sử dụng các phương pháp phổ: IR, HRMS, NMR

HPLC-18

2 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH

CẤU TRÚC

OH HO

O HO

O

OH HO

OH HO

O HO

4 QUY TRÌNH TỔNG HỢP

21

H = 76%

4 QUY TRÌNH TỔNG HỢP

Diosmin

22

OH HO

H = 83%

24

O OH

HO

O

OH OCH 3

O

O (CH 3 CO) 2 O

t 0

3,4,5,7tetramethoxyflavone (DTM)

H = 85%

O OH

HO

O

OH OCH 3

K 2 CO 3 Acetone + (CH 3 O) 2 SO 2

O

H 3 CO

O

OCH 3 OCH 3

OCH 3

+ 3H 2 SO 4 3

K 2 CO 3 Acetone +

2

2

t 0

KẾT QUẢ

&

THẢO LUẬN

27

7 6

5 10

9 8 4 3

4' 2'

OH OCH 3 1''

O

5'' 4'' 3'' 2'' OH HO

OH HO HO

H 3 C

6'''

Phổ HRMS của diosmin

30

7 6

5 10

9 8 4 3

4' 2'

OH OCH 3 1''

O

5'' 4'' 3'' 2''

OH HO

OH HO HO

H 3 C

6'''

[M-H]

-C 28 H 32 O 15 m/z [M-H] -

607.165747

Phổ 1H-NMR của diosmin

31

7 6

5 10

9 8 4 3

4' 2'

OH OCH 3 1''

O

5'' 4'' 3'' 2''

OH HO

OH HO HO

H 3 C

6'''

3H của đường rhamnose

Các proton kề oxy của đường -OC H 3

3' 2'

OH

OCH 3

Hesperidin

Gl Rh

Phổ 1H-NMR của diosmin

2H vòng benzene 3H vòng benzene

4'

3' 2'

OH

OCH 3

Gl

Rh

Phổ 13C-NMR của diosmin

34

7 6

5 10

9 8 4 3

4' 2'

OH OCH 3 1''

O

5'' 4'' 3'' 2'' OH HO

OH HO HO

H 3 C

6'''

28 mũi tín hiệu = 28C

4 3

4' 3' 2'

OH OCH 3

1''

O

5'' 4'' 3'' 2'' OH HO

OH HO HO

H 3 C

6'''

Hesperidin

Phổ DEPT của diosmin

36

7 6

5 10

9 8 4 3

4' 2'

OH OCH 3 1''

O

5'' 4'' 3'' 2'' OH HO

OH HO HO

6

5 10

9 8

4 3

4' 3' 2'

OH OCH 3

4 3

4' 3' 2'

OH OCH 3

Cấu trúc của diosmin

3''

2''

OH HO

4'''

5''' O

OH HO

HO

H 3 C

6'''

4' 3' 2'

OH OCH 3

4' 3' 2'

OH OCH 3

[M+Na] +

C 16 H 12 O 6 m/z [M+Na] +

323.052609

4' 3' 2'

OH OCH 3

H-3

H-8 H-6

4' 3' 2'

OH OCH 3

C-6 C-3 C-10 C-1ꞌ

C-6ꞌ C-2ꞌ

C-5ꞌ

Cấu trúc của diosmetin

OH

OCH 3

4 3

4' 3' 2'

OCCH 3 OCH 3 O

O O

4 3

4' 3' 2'

OCCH 3 OCH 3 O

O O

C=O este

4 3

4' 3' 2'

OCCH 3 OCH 3 O

O O

[M+Na] +

C 22 H 18 O 9 m/z [M+Na] +

449.084303

4 3

4' 3' 2'

OCCH 3 OCH 3 O

O O

-C H 3 x 3 δH=2.31-2.34H=2.31-2.34

-OCH 3 H-3

H-6 H-5ꞌ

H-8 H-2ꞌ

H-6ꞌ

4 3

4' 3' 2'

OCCH 3 OCH 3 O

O O

- C H 3 x 3 δH=2.31-2.34C=20.30-20.80

C =O (ester) x

3

δH=2.31-2.34C=168.35-168.72

C-4

Cấu trúc của DTA

4 3

O

O O

3 ,5,7-triacetoxy-4 -methoxyflavone ꞌ ꞌ

4' 3' 2'

OCH 3 OCH 3

OCH 3

Phổ IR của DTM

53

2842-2947 -CH 3

4' 3' 2'

4' 3' 2'

OCH 3 OCH 3

OCH 3

4' 3' 2'

OCH 3 OCH 3

OCH 3

[M+H] +

C 19 H 18 O 6 m/z [M+H] +

343.117615

4' 3' 2'

OCH 3 OCH 3

OCH 3

H-3

H-6 H-5ꞌ

H-8 H-2ꞌ

H-6ꞌ

-OC H 3 x 4 δH=2.31-2.34H=3.83- 3.90

4' 3' 2'

OCH 3 OCH 3

OCH 3

-O C H 3 x 4 δH=2.31-2.34C=55.65- 56.00

4'

3' 2'

OCH 3

OCH 3

OCH 3

3,4,5,7tetramethoxyflavone

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

CH CH 2

CH CH 2 HC

H 2 C

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

CH CH 2

CH CH 2 HC

H 2 C

Phổ HRMS của DTAl

[M+H] +

C 19 H 18 O 6 m/z [M+H] +

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

CH CH 2

CH CH 2 HC

H 2 C

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

H-2ꞌ

H-6ꞌ

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

=C H 2 x 3 δH=2.31-2.34H=4.63- 4.72 -OC H 2 - x 3

δH=2.31-2.34H=5.27-5.69

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

-O C H 2 - x 3 δH=2.31-2.34C=68.87- 69.24

= C H- x 3

δH=2.31-2.34C=132.84-133.66

Phổ DEPT của DTAl

4 3

4' 3' 2'

OCH 2 OCH 3

Cấu trúc của DTAl

2 Kết quả thử nghiệm khả năng

kháng oxy hóa

66

2 Kết quả thử nghiệm khả năng

4'

3' 2'

OH OCH 3

Hesperidin

Gl Rh

4'

3' 2'

OH OCH 3 Gl

4'

3' 2'

OH OCH 3

4'

3' 2'

OH OCH 3

Diosmetin

3 Kết quả thử nghiệm khả năng

DT 3.48 ± 0.64 1.80 ± 3.35 11.24 ± 2.37

DTA 55.55 ± 3.70 44.17 ± 4.79 62.60 ± 1.91

DTAl 44.20 ± 5.76 29.79 ± 1.68 31.91 ± 1.83

3 Kết quả thử nghiệm khả năng

KẾT LUẬN

&

KIẾN NGHỊ

70

3' 2'

3''

2''

OH HO

4'

3' 2'

4'

3' 2'

4 3

4'

3' 2'

OCCH 3

OCH 3 O

O O

4'

3' 2'

Kết quả thử hoạt tính kháng oxy hoá:

Các hợp chất diosmin, diosmetin, DTA, DTM, DTAl

có hoạt tính kháng oxy hóa thấp

KẾT LUẬN

72

Kết quả gây độc tế bào:

Hợp chất DTA có khả năng gây độc tế bào cao nhất trong các hợp chất thử nghiệm trên dòng

tế bào MCF-7 và Hep G2 (IC50 = 85.34 µg/mL và

73.89 µg/mL)

KIẾN NGHỊ

- Tiếp tục tổng hợp thêm các dẫn xuất mới

- Khảo sát các hoạt tính kháng ung thư, kháng viêm trên nhiều dòng tế bào

- Khảo sát tác dụng tương hỗ với các thuốc khác trong điều trị ung thư

- Hoàn thiện việc tổng hợp và tinh chế để khi cần có thể sản xuất được chế phẩm, nhất là diosmin.73

BÀI BÁO

74

75