Hướng dẫn sử dụng Pipetman và chuẩn bị các dãy pha loãng

thực hiện các thao tác dứt khoát, chính xác ở tốc độ đều đặn vừa phải, thỉnh thoảng cho ngón tay nghỉ; thỉnh thoảng đổi vị trí ngồi thả lỏng vai và cánh tay; thực hiện các thao tác dứt khoát, chính xác ở tốc độ đều đặn vừa phải, thỉnh thoảng cho ngón tay nghỉ; thỉnh thoảng đổi vị trí ngồi thả lỏng vai và cánh tay

HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG PIPETMAN

VÀ CHUẨN BỊ CÁC DÃY PHA LOÃNG

Bố trí tư thế thoải mái

 Thực hiện các thao tác dứt khoát, chính xác ở tốc độ đều đặn vừa

phải, thỉnh thoảng cho ngón tay nghỉ

 Thỉnh thoảng đổi vị trí ngồi, thả lỏng vai và cánh tay

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

1) Chọn đúng loại pipetman (vd P2 – P10ml)

trong vùng dung tích cần đo Thể tích đo tối

thiểu ~10 – 20% thể tích đo tối đa của pipet

Không đặt thể tích quá thể tích tối đa

2) Đặt pipetman đúng dung tích cần đo

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

3) Thao tác gắn đầu

tip pipet phải đúng

 Chọn đúng loại đầu

típ pipet phù hợp.

 Ấn pipet vào đầu típ

kết hợp xoay nhẹ;

nếu không xoay, có

thể có khe hở giữa

pipet và đầu típ, dẫn

đến thể tích hút thực

sai và pipet nhỏ giọt.

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

4) Kiểm tra pipet phân phối đúng thể tích

 Có thể dùng nước cất và cân phân tích (10 -4 g) để kiểm tra

1 mg = 1 ul = 1 mm 3

Sai số không nên vượt quá 1% dung tích thực cần đo.

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

5) Hút dịch đúng quy cách

 Giữ pipet thẳng  Đẩy nút

pittông đến vị trí dừng 1  Đưa

đầu típ vào dung dịch  Từ từ

nhả nút pittông (không có bọt

khí)  Chờ 1 - 2 giây (để đảm

bảo dịch đã được hút lên hoàn

toàn)

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

5) Hút dịch đúng quy cách

Loại Pipetman Độ sâu dưới bề mặt Thời gian chờ

dung dịch (mm) (giây)

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

6) Quan sát nhanh để kiểm tra lượng dung dịch có trong

trong đầu típ pipet

 Ví dụ: 100 ul chiếm khoảng 1/2 dung tích đầu típ P200

 Dung dịch được giữ nguyên trong đầu tip, không có hiện

tượng nhỏ giọt

7) Phân phối (nhả) dung dịch đúng quy cách

 Đặt đầu típ chạm nhẹ vào thành ống hứng, nghiêng một góc

~10 – 15 o  Đẩy nút pittông từ từ tới vị trí dừng 1  Chờ

1 – 2 giây để đảm bảo dung dịch chảy ra  Đẩy dứt khoát nút pittông tới vị trí dừng cuối để nhả toàn bộ dung dịch vào ống đựng  Nhấc pipet cùng đầu típ khỏi ống hứng.

Hướng dẫn sử dụng pipetman (8 quy tắc)

8) Nhả đầu típ; thay đầu típ

cho lần thao tác tiếp theo

 Nhả đầu típ vào ống đựng

vật liệu thải bằng ấn vào nút

nhả đầu típ Thay đầu típ

mới cho lần pipet tiếp theo.

Pipetman cần được duy tu,

bảo dưỡng theo hướng dẫn

của nhà sản xuất.

Cách chuẩn bị dãy pha loãng

Dãy pha loãng được dùng trong nhiều qui trình chuẩn độ; với 2 thiết bị phổ biến: máy khuấy từ và lắc rung vortex.

Có 4 kiểu dãy pha loãng thông dụng:

1)Dãy pha loãng tuyến tính:

- Nồng độ được pha loãng theo khoảng cách đều (kiểu cấp số cộng); vd: 0 – 0,2 – 0,4 – 0,6 – 0,8 và 1,0 ug/ml Dùng phổ biến để dựng đường chuẩn chuẩn độ protein.

- Dùng công thức C1V1 = C2V2 để xác định lượng dung dịch gốc và lượng dung môi hòa tan (thường là H 2 O

hoặc đệm) để pha loãng đến nồng độ cuối).

Cách chuẩn bị dãy pha loãng

2)Dãy pha loãng logarit:

Dùng phổ biến để xác định hoạt độ của nhiều hợp chất

sinh học (vd xác định hoạt độ enzym, tương tác thuốc – thụ thể), đếm tế bào vi khuẩn, các phép thử sinh học liên quan đến biến thiên nồng độ theo hàm logarit.

2.1 Dãy pha loãng 2 lần: vd 1, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 …

Hãy chuẩn bị dung dịch có nồng độ cao nhất với dung tích gấp đôi lượng cần thiết  bổ sung 1/2 lượng vừa pha với thể tích tương đương của H 2 O hoặc đệm  trộn đều rồi lặp lại tương tự cho bước pha loãng tiếp theo.

Cách chuẩn bị dãy pha loãng

2.2 Dãy pha loãng 10 lần: vd 1, 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 …

Hãy chuẩn bị dung dịch nồng độ cao nhất với dung tích ít nhất nhiều hơn 10% so với lượng cần thiết  thực hiện tương tự như pha loãng 2 lần, nhưng NHỚ ở đây lượng

H 2 O hoặc đệm gấp 9 lần dung dịch gốc ở bước nồng độ trước.

Cách chuẩn bị dãy pha loãng

Khi pha loãng dãy logarit, NHỚ bổ sung trước dung môi (H 2 O hoặc đệm) với thể tích phù hợp và giống nhau vào các ống ở bước nồng độ sau  dùng pipet hút dịch ở nồng

độ bước trước  trộn đều rồi bổ sung vào nồng độ bước sau  lặp lại đều đặn cho đến khi hết dãy.

3)Dãy pha loãng điều hòa: vd 1, 1/2, 1/3, 1/4, 1/5 …

Hãy tăng thể tích dung môi (H 2 O hoặc đệm) theo cấp số nhân tương ứng (0,1, 2, 3, 4 ….) với lượng dung dịch gốc được bổ sung giống như nhau vào mỗi ống.