giáo án điện tử môn sinh vật học:Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrom) pps

• Mô bệnh học của tế bào phổi bị bệnh • Mô bệnh học của tế bào phổi bình thường... Kỹ thuật IFA indirect immunofluorescence assay có độ nhạy cao, chuẩn độ kháng thể có thể phát hiện ở

HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ

HẤP SINH SẢN (PRRS: Porcine Reproductive and Respiratory Syndrom)

Virus PRRS

• M protein: protein

màng

• E protein:glycoprotein

vỏ envelope

• GP: glycoprotein

màng

• AAA: đuôi

polyadenine

• RNA: hệ gen của virus

• Lipid bilayer: màng

LÂM SÀNG

• Mô bệnh học của tế bào phổi bị bệnh

• Mô bệnh học của tế

bào phổi bình thường

CHẨN ĐOÁN

Lâm sàng: Triệu chứng và bệnh tích

Trong vòng 14 ngày, nếu gặp 2 trong 3 chỉ tiêu sau thì việc chẩn đoán xác định bệnh PRRS được coi như là đúng:

- Sẩy thai, đẻ non vượt quá 8%

- Chết thai vượt qua 20%

- Lợn con chết trong tuần đầu tiên vượt quá 25%

Chủng virus: Châu Aâu và chủng Châu Mỹ???

CHẨN ĐOÁN: Phòng thí nghiệm

1 Phân lập virus

2 Kỹ thuật IPMA ( immunoperoxidase monolayer

assay)

3 Kỹ thuật IFA ( indirect immunofluorescence assay) có độ nhạy cao, chuẩn độ kháng thể có thể phát hiện

ở lợn 8 ngày sau khi bệnh

4 Kỹ thuật ELISA ( enzyme-linked immunosorbent

assay) đơn giản, không đắt tiền và có hiệu quả.

5 Phát hiện kháng thể trung hòa (Seroneutralisant)

6 RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR)

KỸ THUẬT IPMA

Gây nhiễm PRRS virus vào tế bào (mẫu bệnh phẩm)

Gắn đại thực bào vào các microtitre plate

Cố định tế bào Chuẩn bị kháng thể (huyết thanh) pha loãng

Ủ kháng thể (huyết thanh) với đại thực bào đã cố định

Ủ và nhuộm Đọc và phân tích kết quả: theo màu

Kết quả

• * Dương tính: tế bào chất của 30 -50% số tế bào

trong giếng có màu đỏ đậm.

• * Aâm tính: tế bào chất không nhuộm màu

• * Phản ứng không chuyên biệt: tất cả các tế bào

đều nhuộm màu  Dương tính và âm tính giả

Tế bào có màu nâu đỏ là bị nhiễm virus

KỸ THUẬT IFA

Gắn và gây nhiễm tế bào MARC-145 trong microtitre plate

Chuẩn bị huyết thanh pha loãng

Ủ huyết thanh với các tế bào MARC-145 đã được cố định

Ủ với IgG gắn huýnh quang

Kết quả

• Dương tính: tế bào bị nhiễm phát huỳnh quang

màu xanh và tế bào không bị nhiễm không có màu xanh (đối chứng âm).

• Aâm tính: không có phát huỳnh quang màu xanh

trong cả tế bào nhiễm và không nhiễm.

Kỹ thuật ELISA

KỸ THUẬT ELISA (tt)

Kết quả: xác định bằng cách tính tỉ lệ S/P (mẫu / mẫu đối chứng dương), ví dụ bộ kit của IDEXX:

* S/P < 0.4  âm tính

* S/P  0.4  dương tính

IFA, IPMA

Hàm lượng

kháng thể

Biến đổi hàm lượng kháng thể

Gi i trình t chu i nucleotide ải trình tự chuỗi nucleotide ự chuỗi nucleotide ỗi nucleotide

• Chủng virus Châu Mỹ: VR-2332

• Chủng virus Châu Âu: Lelystad

• Tương đồng chuỗi axit amin:

– 63% ORF2

– 58% ORF3

– 68% ORF4