Thực nghiệm về thành phần hóa học của cây củ cải đồng

Thực nghiệm về thành phần hóa học của cây củ cải đồng

THỰC NGHIỆM

THE PEEVE DONT CU,

- ĐỀ xác định cấu trúc hóa học của những hợp chất thu được, chúng tôi đã sử dụng một số phương pháp hóa lý như sau :

+ Do nhiét độ nóng chảy trên khối maquenne

+ Pho IR duge ghi trên máy quang phổ hồng ngoại Bruker IFS 48

+ Phổ cộng hưởng từ hạch nhân 'H-RMN ghi trên máy cộng hưởng

từ hạt nhân Bruker AC 200, tần số cộng hưởng 200MHz

+ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân C-RMN kết hợp với kỹ thuật DEPT-

RMN ghi trên máy cộng hưởng từ hạch nhân Bruker AC 200, tần số cộng hưởng 50 MH¿

+ Phổ MS, EI ghi trên máy HP-5989D-MS của Viện Hóa Học Hà Nội

+ Phổ LC-MS, APCI ghi trên máy sắc ký lồng ghép khối phổ LCQ

-FINIGANT

Cột nhồi : ADSORBPHERE UHS C18

Các phổ được đo tại Trung Tâm Dịch Vụ Phân Tích và Thí Nghiệm

thành phố Hồ Chí Minh

1 TRÍCH LY, CÔ LẬP CÁC CẤU TỬ HỮU CƠ TRONG CÂY CẢI ĐỒNG

* Thu hái và xử lý mẫu

Cây Cải Đồng Grangea maderaspatana được thu hái tại Sóc Trăng

và được định danh tại Khoa Sinh-Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên

Mẫu tươi sau khi thu hái về được rửa sạch, loại bỏ những phần sâu bệnh

rồi phân loại thành từng bộ phận : hoa, lá, thân, rễ Để khô tự nhiên, sau

đó sấy ở 80°C đến trọng lượng không đổi, xay nhuyễn từng bộ phận riêng

rẽ thành bột

* Điều chế cao eter dầu hỏa phần không xà phòng hóa trích nóng từ

hoa và cao cloroform; cao acetat etil trích nguội từ lá

e Điều chế cao eter dầu hỏa phần không xà phòng hóa trích nóng từ hoa

Hoa tươi phơi héo ở nhiệt độ phòng, sấy ở 80C Tận trích 0,87kg_

hoa khô với 10lít eter đâu hỏa (60 - 90”C) Cô cạn dung môi ở áp suất thấp

đặt lên bếp cách thủy, làm khô cao trong bình hút ẩm chân không, thu

được 60g cao eter dầu hỏa

38

++‡1U NHẢ1 SAC Kỹ lỚp móng trên cao eter đầu hỏa với hệ cloroform :

metanol (95 : 5), hiện hình bằng thuốc thử HaSO; đậm đặc, sấy bản ở

110°C, cho vét không rõ, vết kéo dài cho thấy trong cao có nhiều chất béo

Vì vậy chúng tôi quyết định xà phòng hóa cao trên Cho hỗn hợp gồm 34u KOH rắn va 360ml etanol 95% vào 60g cao eter dầu hỏa Đun hoàn lưu trên bếp cách thủy trong vòng 3giờ, để nguội, thêm 180ml nước cất vào hỗn hợp Trích hỗn hợp với cao eter etil bằng bình lóng, rtfa dich eter ctil bằng nước cất đến pH = 7 Làm khan bằng NazSO¿ rồi lọc, cô quay để đuối

dung môi, thu được 12g cao eter dầu hỏa phần không xà phòng hóa

e Điều chế cao cloroform, cao acetat etil trích nguội từ lá

Lá tươi phơi héo ở nhiệt độ phòng sấy ở 80°C đến khô Bột lá khô (1kg) ngâm với alcol 959 ở nhiệt độ thường, trong vòng 24giờ Lọc, đuổi

dung môi, thu được cặn alcol Sau 4 lần tẩm trích, chúng tôi thu được 50g

cao alcol nguội Chuyển cao alcol thành dịch alcol Dịch này được tận trích - với cloroform bằng bình lóng thu được dịch chiết cloroform Đuổi dung môi thu được 10g cao cloroform Dịch alcol còn lại tiếp tục được đem trích với etil acetat bằng bình lóng, được dịch etil acetat, cô quay để đuổi dung môi thu được cao etil acetat (3g)

2 THU NGHIEM BRINE SHRIMP TREN MOT SO CAO TRÍCH

* Nguyên liệu, dung cụ hóa chất

se Nguyên liệu

Trifng brine shrimp

e Dung cu

- Becher các loại 250ml (2 chiếc), 500ml (2 chiếc) dùng để chứa trứng và ấp trứng

- Đĩa thủy tỉnh (1 chiếc) dùng để cân trứng

- Khay thử với các ống nghiệm có vạch định mức 5ml dùng để tiến

hành thử nghiệm

- Pipette Pasteur (10 chiếc) dùng để bắt ấu trùng

- Pipetteman (Transferpette) sử dung cone 10 - LOOHI, 100 - 100041

- Pipette có chia vạch 5ml, 10ml, ống bóp cao su

- Phếu thủy tỉnh và giấy lọc silica gel

39

7 r9 Muy tinh ml (10 chiếc) có nắp đậy kín dùng để pha mẫu thứ

- Thau nhựa dùng để giữ nhiệt độ cho becher ấp trứng

e Hóa chất

- Dung môi DMSO (loại tinh khiết phân tích, hãng Prolabo)

- Nước biển (loại dùng để nuôi cá cảnh)

- Dung môi đã trích cây,

- Nước cất

* Cách tiến hành

e Ấp trứng thành ấu trùng

- Cân 0,1g trứng cho mỗi lần thử (khoảng 150 ống nghiệm), cho vào

becher, ngâm với 150ml nước cất khoảng 30 phút, lọc trứng trên giấy lọc

va phéu thủy tinh Dùng pipette pasteur bơm nước biển rửa trứng trên giấy

lọc cho chảy vào một becher (500ml) chứa sẵn 100ml nước biển Sau đó

thêm nước biển cho đủ 250ml

- Ngâm becher vào một thau nước nhỏ để giữ nhiệt độ khoảng 28 - 34°C

(trên 35°C ấu trùng sẽ chết không cần đậy kín và để yên becher sau 48 giờ

- Dùng đèn pin soi cho ấu trùng tập trung vào vùng có ánh sáng, rồi

dùng pipette pasteur hút chúng thả riêng vào một becher (250ml) chứa sẵn

150ml nước biển sạch (nếu trước 48 giờ mà ấu trùng nở nhiều và bơi khỏc thì nên hút chúng để riêng dần theo cách như trên nhằm tạo điều kiện cho

ấu trùng hô hấp tốt)

- Chỉ sử dụng ấu trùng nở trong khoảng thời gian từ 48 - 72 giờ Sau

72 giờ ấu trùng không còn phù hợp với thí nghiệm

e Chuẩn bị mẫu thử

Pha mẫu cái

-Đối với cao nên pha ở nổng độ lớn, tùy vào kết quả độc tính mà có

sự tăng hay giảm nồng độ cho lần thử tiếp theo Cân 30mg ao cho vào lọ nhỏ vào một ít dung môi DMSO hoặc dung môi trích cao để hòa tan (tống

thể tích DMSO và dung môi trích cao < 1504), có thể đun cách thủy nhẹ

để cao tan tốt Thêm 3m] nước biển vào lọ, đậy nắp lắc đều

_40

Pha mẫu chứng

x 4 > At 4

- Mau chứng là dung môi trích cây : cân 30mg dung môi trích cây

trong lọ, nhỏ vài giọt DMSO để giúp dung môi dễ phân tán trong nước (thể

ch DMSO < 150u)), thêm 3ml nước biển, đậy nắp lắc đều

- Mẫu chứng DMSO : hòa tan 150ml] DMSO bằng 3ml nước biển ở

trong lọ, đậy nắp lắc đều,

Tính nồng độ

- Mẫu cái : 30mg/3ml tương đương 5mg/500ul Từ dung dịch này hút

lấy500H] cho vào 1 ống nghiệm nhỏ, thêm nước biển cho đủ 5ml Vậy,

nồng độ mẫu trong ống sẽ là1000ug/ml Tính tương tự cho các nồng độ

khác

- Mẫu chứng dung môi trích cây : nếu pha mẫu cái ở nổng độ nào thì mẫu chứng dung môi trích cây cũng được pha ở nồng độ đó `

- Mẫu chứng DMSO : có thể không cần tính nổng độ nhưng với

150uHl DMSO/3ml nước biển (sử dụng lượng bằng với lượng đã hòa tan

cao), cũng hút 500ul, 250Hl, 501 cho vào ống thử

Tính liều LC:o

- Liễu LCao là lểu mà mẫu thử được pha ở nổng độ xác định có thể giết chết 50% ấu trùng brine shrimp trong vòng 24 giờ Nếu số lượng ấu trùng chết ít hơn 50% ở nổng độ x nào đó và chết 100% ở nồng độ dam đặc hơn 10x, thì phải thử nghiệm lại ở nồng độ loãng hơn trong khoảng x

đến 10x để xác định chính xác liều LCso

e Cách thử

Từ becher chứa ấu trùng, dùng pipette pasteur hút 10 con cho vào

mỗi ống nghiệm, sao cho thể tích nước biển trong ống đạt khoảng 4ml

Bơm mẫu chất vào ống thử rôi thêm nước biển cho đủ 5ml/ống |

nghiệm

Khay thử được che đậy (không cần kín), để yên sau 24 giờ Dùng kính lúp đếm số lượng ấu trùng chết ở mỗi ống nghiệm, suy ra tỷ lệ

nauplius chết do dung dịch thử nghiệm ở mỗi nồng độ

Mỗi nồng độ được thử trên 3 ống nghiệm

4]