Thực nghiệm thành phần hóa học của cây rau tàu bay

Thực nghiệm thành phần hóa học của cây rau tàu bay

1 Vay Ral 18U DAY -46- Phân thực nghiệm

3.1 HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ SỬ DỰNG TRONG NGHIÊN CỨU

3.1.1 Hóa chất

® Dung môi dùng trong sắc ký cột và sắc ký điều chế, sắc ký bản

mỏng gồm: cter dầu hỏa (60°C- 90°C), benzen, cloroform, acetat etyl, aceton, metanol và etanol đều là hóa chất Trung Quốc và được làm khan bằng Na¿SO¿ nếu sử dụng lại

e Thuốc thứ: để hiện hình các vết hữu cơ trên bản mồng, phun xịt bằng

acid sulfuric dam đặc, soi đèn UV hoặc dùng hơi iod

3.1.2 Thiết bị

e Các thiết bị dùng để ly trích (lọ thủy tính, becher)

® Máy cô quay chân không Buchi-l 11

e Cột sắc ký: cột khô, cột cổ điển

+ Sắc ký bản móng 25DC — Alufolien 20 x 20 cm Kieselgel Fosq

e Thiết bị đo nhiệt độ nóng chẩy khối Maquenne

e Các thiết bị ghi phổ:

- Phổ IR: Ghi trên máy quang phổ hồng ngoai IR-470 SHIMADU,

BRUKER- EQUINOX 55

- Phổ MS: Ghi trên máy 5989B-HP-MS-Engine

- Phể !H_NMR, ?C_NMR, kết hợp với phố DEPT- NMR 135 và 20,

phổ HSQC và HMBC: Ghi trên máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker ở tần số

500 MH¿ cho 'H-NMR và 125 MHz cho phổ !?C.NMR

Tất cá phổ được ghi tại phòng Phân Tích Cấu Trúc, Viện Hóa Học -

Khoa học Công nghệ, số 18 Hoàng Quốc Việt, Quận Cầu Giấy, Hà Nội

1 bay Kau tau bay -47- Phân thực nghiệm

3.2 PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT VÀ CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT TỪ

LA RAU TAU BAY

3.2.1 Điều chế cao etanol

Bội lá khô được ngâm dâm trong bình thủy tỉnh bằng dụng môi etanol

trong khoảng 24 giờ Sau đó lọc phân dịch trích, cô cạn dung môi (bằng máy

cô quay) ở 50°C, thu dude cao etanol Lap lại quá trình trên nhiều lần đến khi

trích kiệt

3.2.2 Điều chế các loại cao

Cao etanol được trích pha rắn trên silica gel, giải ly lần lượi bằng các đơn dung môi tăng dẫn tính phân cực là eter dầu hỏa, benzen, cloroform,

acetat cty] và metanol, theo đối quá trình bằng sắc ký bản mồng rỗi cô quay thu hồi dung môi sẽ thu được các loại cao tương ứng Kết quả thu được cao E,

cao B, cao C, cao AE va cao M

3.2.3 Cô lập các hợp chất có trong các loại cao

Tiến hành sắc ký cột (nhanh cột khô, cổ điển) các loại cao, sau đó sắc

ký cột và sắc ký điểu chế nhiều lần trên những phân đoạn được chọn để cô

lập các hợp chất Toàn bộ quá trình trên được theo đối bằng sắc ký bản mỏng với thuốc thử hiện hình là acid sulfuric đâm đặc

3.3, THU HOAT TINH CUA CAC LOAI CAO TREN 1 SỐ CHONG VI

KHUAN

Các thử nghiệm hoạt tính sinh học được tiến hành tại phòng thí nghiệm Sinh lý Động vật, khoa Sinh, trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp Hồ Chí

Minh

Dung cu: - Đĩa petri vô trùng, ống nghiệm, kẹp vô khuẩn

2 Gay Rau tau bay -48- Phân thực nghiệm

- Đĩa giấy đường kính 6nam

- Nỗi hấp vô trùng autoclave

Hóa chất: Thạch MHA (Mueller Hinton Agar), thạch đình dưỡng

Nutrient agar

Nguyên liệu: 4 ching vi khugn gém 2 chiing Bacillus subtilis (gram (+)) va Escherichia coli (gram(-)) gây bệnh tiêu chây; chúng Staphylococeus

aureus (gram(+})) gây bệnh da liễu, đường ruột và chúng Salmonelia (gram(-))

gây bệnh dịch tả,

Cách tiến hành:

- Cấy các chủng vị khuẩn lên mặt thạch dinh dưỡng Nutrient agar rồi ủ

các hộp thạch ở 37C qua đêm

- Khi các khuẩn lạc (vi khuẩn sinh sẵn mọc thành khóm) xuất hiện,

chọn 3 ~ 5 khuẩn lạc riêng lẻ, giống nhau để làm huyền dịch vi khuẩn trong ống nghiệm chứa 5 mi nước muối sinh li

- Cho 38 g môi trường MHA vào 1 lit nước cất, đun cách thủy đến tan

hoàn toàn Khử trùng bằng nổi hấp autoclave ở 121°C trong 30 phúi, Để thạch

nguội đến 5OC thì cho ra đĩa Petri, độ dày thạch 4 mm, Ủ qua đêm ở 37°C để kiểm tra độ vô trùng Loại bổ hộp nhiễm

- Dùng bông vô trùng nhúng vào huyền dịch vi khuẩn rồi trải trên mặt

thạch

- Đùng kẹp vô khuẩn kẹp địa giấy đã tẩm cao cần thử hoạt tính đặt lên

mặt thạch Làm tương tự với đĩa giấy tẩm nước cất để làm mẫu chứng Lật ngược hộp thạch ủ ở 37°C Sau 18 giờ đọc đường kính vòng vô khuẩn