XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS, LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS. THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC (Slideshow)

Xác định được môi trường tối ưu của vi khuẩn Bacillus subtilis và Lactobacillus acidophilus để sản xuất chế phẩm sinh học sử dụng trong chăn nuôi thú y và nuôi trồng thủy sản.

BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

“XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH

KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN

Bacillus subtilis, Lactobacillus acidophilus

THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC”

GVHD: CN TÔ MINH CHÂU

TS LÂM THỊ THU HƯƠNG SVTH: NGUYỄN ĐỨC DUY ANH

NỘI DUNG BÁO CÁO

1 Đặt vấn đề

2 Vật liệu và phương pháp thí nghiệm

3 Kết quả và thảo luận

4 Kết luận và đề nghị

vi sinh vật đường ruột

MỤC ĐÍCH

của vi khuẩn Bacillus subtilis và

Lactobacillus acidophilus để sản

YÊU CẦU

Đối với Bacillus subtilis

 Nuôi cấy Bacillus subtilis trên nhiều loại môi

trường khác nhau  tìm môi trường tối ưu để

vi khuẩn sản sinh enzyme amylase và protease.

 Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis

 Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản

xuất và sau thời gian bảo quản.

Đối với Lactobacillus acidophilus

 Phân lập từ chế phẩm Antibio

 Tìm môi trường nhân giống thích hợp cho sinh khối và độ chua cao nhất.

 Sản xuất chế phẩm chứa vi khuẩn L.acidophilus.

 Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản xuất

và sau thời gian bảo quản.

YÊU CẦU

Giống vi khuẩn

Antibio do Hàn Quốc sản xuất.

Số lượng vi khuẩn có trong 1ml Hoạt tính protease

Chọn môi trường tối ưu nhất

PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM

Môi trường

A

Môi trường

B Môi trường C Môi trườngD Môi trườngE

Chọn môi trường tối ưu nhất

Sản xuất chế phẩm chứa

Bacillus subtilis

Bảo quản, kiểm tra

PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM

Nước 60 – 65 % so

với nguyên liệu

Môi trường nhân giống

Nuôi 72 giờ ở nhiệt độ phòng

Giống Bacillus subtilis 10%

Xác định Lactobacillus acidophilus

Chọn ra môi trường thích hợp

Sản xuất chế phẩm chứa L acidophilus

Số lượng vi khuẩn có trong 1ml Độ chua Therne

Môi trường sữa đặc có đường Môi trường sữa đậu nành

24 giờ, t phòng

Kiểm tra

Kiểm tra, đóng gói và bảo quản

PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả về khả năng tăng sinh khối và enzyme của B subtilis

trên môi trường nhân giống cấp 1

Môi Trường Edward Fragie Nomura

pepton-gelatin

rỉ đường + 2% tinh bột

0,21455 13,69

3 1,3600b

0,391 28,78

3 1,4267b

0,411 28,83

3 0,4537c

0,0773 17,05

3 1,9200d

0,2455 12,78

Môi trường

Enzyme

Edward Fragie Nomura

pepton-gelatin 2% tinh bột rỉ đường +

Amylase

Lặp lại (n)

X (W0/ml) SD

Cv%

3

8a

0 0

3

16b

0 0

3 26,67c

9,2376 34,63

3 10,67a

4,6188 43,28

3

256d

0 0

Protease

Lặp lại (n)

X (Hđp/ml) SD

Cv%

3

8a

0 0

3 13,33b

4,6188 34,64

3

16b

0 0

3

32c

0 0

3

128d

0 0

Khả năng sinh enzyme amylase và protease của B.subtilis trên

môi trường cấp 1 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

265 d

128 d

Xác định hoạt độ amylase theo phương pháp Wolhgemuth

Đối chứng (+) có enzyme: dung dịch không có màu

xanhĐối chứng (-) không có enzyme: dung dịch có màu xanh

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

1256

1512

11024 1

Đối chứng (+) có enzyme: dung dịch trong

Đối chứng (-) không có enzyme: dung dịch đục có kết tủa trắng

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Xác định hoạt độ protease theo phương pháp Gross + Fuld

Kết quả về khả năng tăng sinh khối và enzyme của B subtilis

trên môi trường nhân giống cấp 2

126,595 36,62

3 155,33b

55,229 35,55

3 11,368c

1,362 11,98

3 13,26c

1,623 12,24

3 12,74c

2,619 20,56

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Khả năng sinh enzyme amylase và protease của B subtilis

trên môi trường nhân giống cấp 2

Cv %

3

160a

0 0

3

160a

0 0

3

80b

0 0

3

80b

0 0

3

80b

0 0

Protease

Lặp lại (n)

X (Hđp/ml) SD

Cv %

3

80a

0 0

3

80a

0 0

3

80a

0 0

3

80a

0 0

3

40b

0 0

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

A B

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Vi khuẩn Bacillus subtilis trên môi trường A và B

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kiểm tra số lượng vi khuẩn B subtilis trên môi trường A

Kết quả số lượng B subtilis, hoạt độ enzyme sau khi sản xuất chế phẩm

 Số lượng : 58,9 × 1010 cfu/g

 Hoạt độ amylase: 160 Wo/ml

 Hoạt độ protease: 80 Hđp/ml

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả kiểm tra chế phẩm chứa Bacillus subtilis sau thời gian bảo quản

118 88,9 68,9

160 160 160

80 80 80

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Vi khuẩn L acidophilus trên môi trường MRSA

Phản ứng Kết quả Lên men

-Lactose Sucrose Glucose Manitol Rabinose

+ + + - -

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Các phản ứng sinh hóa của L acidophilus

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Khả năng lên men đường của Lactobacillus acidophilus

Kết quả kiểm tra số lượng L acidophilus trên môi trường sữa đặc có đường

X

Nồng độ sữa 15 % 20 % 25 % Lặp lại (n)

X (g/100ml) SD

CV %

3 0,8233a

0,045 5,477

3 0,9420b

0,059 6,361

3 1,169c

0,046 4,009

X

Nồng độ sữa 15 % 20 % 25 % Lặp lại (n)

X ( ×109 cfu/ml) SD

CV %

3 8,83a

0,317 3,59

3 11,017b

1,086 9,86

3 21,967c

3,350 15,25

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả kiểm tra hàm lượng acid lactic trên môi trường sữa đặc có đường

Kết quả kiểm tra số lượng L acidophilus trên môi trường sữa đậu nành

3 1,27 0,045 3,54

3 1,32 0,047 3,57

3 1,41 0,035 2,47

3 1,0 0,017 1.61

3 1,27 0,066 5,25

3 1,6 0,017 1,08

3 1,70 0,024 1,42

3 1,13 0,055 4,08

3 1,41 0,047 3.35

3 1,61 0,034 2,15

3 1,8 0,025 1,39

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả kiểm tra hàm lượng acid lactic trên môi trường sữa đậu nành

3 1,126 0,267 23,75

3 1,37 0,157 11,47

3 1,45 0,088 6,12

3 3,60 0,156 4,33

3 5,68 0,682 12

3 7,316 0,301 4,11

3 7,993 0,507 6,35

3 3,61 0,19 5,26

3 6,04 0,359 5,94

3 7,596 0,175 2,31

3 8,093 0,102 1,26

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Số lượng vi khuẩn L acidophilus sau thời gian bảo quản

KẾT LUẬN

 Môi trường nhân giống cấp 1: rỉ đường có bổ sung 2 % tinh bột

 Môi trường nhân giống cấp 2: môi trường A

 Chế phẩm chứa Bacillus subtilis có số lượng tế bào là 589 × 109

cfu/g Hoạt độ amylase là 160 (Wo/ml) và protease là 80 (Hđp/ml).

 Sau thời gian bảo quản ở nhiệt độ thường chúng tôi nhận thấy số lượng tế bào giảm nhưng hoạt độ enzyme amylase và protease

không thay đổi.

Đối với Bacillus subtilis

 Sữa đặc có đường cao nhất ở nồng độ 25% sữa

 Sữa đậu nành: môi trường NB15

 Chế phẩm chứa L acidophilus có số lượng tế bào: 38 × 106 cfu/g.

 Sau thời gian bảo quản số lượng tế bào giảm nhanh vào 10 ngày đầu sau đó giảm dần sau thời gian bảo quản.

KẾT LUẬN

Đối với Lactobacillus acidophilus

ĐỀ NGHỊ

 Chiết xuất ra enzyme tinh khiết.

 Cần khảo sát thêm khi nuôi cấy B subtilis ở từng thời

điểm khác nhau: 24, 36 giờ.

 Khảo sát khả năng sinh enzyme lipase của B subtilis.

 Cần phân lập thêm nhiều chủng L.acidophilus

 Sản xuất trên dây chuyền khép kín  hạ giá thành.

Chế phẩm chứa B subtilis và L acidophilus

Cảm ơn quý Thầy, Cô

và các bạn !!!