Bài giảng : TIẾP CẬN VẤN ĐỀ PHÁT HIỆN TỒN DƯ KHÁNG SINH TRONG CÁC THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐỘNG VẬT PART 5 pps

Ý tưởng khắc phục nhược điểmKhông dùng dịch thận, mẩu thận mà dùng mẫu tách chiết Tách chiết thế nào?. Lượng mẫu bao nhiêu?. Làm thế nào để kiểm tra được chất lượng test??... Yêu cầu qui

Nguyên lý “Test thận Bỉ”

Ưu nhược điểm ????

Ý tưởng khắc phục nhược điểm

Không dùng dịch thận, mẩu thận mà

dùng mẫu tách chiết

Tách chiết thế nào?

Lượng mẫu bao nhiêu?

Làm thế nào để kiểm tra được chất lượng test??

Yêu cầu qui trình tách chiết thế nào?

đến chất cần tìm và kết quả đọc

gây dương tính giả

Thích ứng Premi-Test

Lượng mẫu bao nhiêu?

Xác định Độ mẫn cảm của

VSV với kháng sinh

Kiểm soát Chất lượng môi

trường, Đĩa cấy vsv

Xác định lượng KS ít nhất

có thể tạo vòng vô khuẩn

(A)

Kiểm tra lại qui trình tách

chiết = ks chuẩn

Xây dựng công thức tính

lượng mẫu bé nhất cần

lấy (M)

M (g) = A * MRL -1

Làm thế nào để kiểm tra được chất

lượng test??

Đánh giá các tham số độ mạnh

(LOD, Độ nhạy, Độ đặc hiệu, độ chính xác)

Phạm Kim Đăng , Marie-Louise SCIPPO; Guy DEGAND;

Caroline DOUNY; Guy MAGHUIN-ROGISTER (2007):

Chuẩn hóa phương pháp sàng lọc định tính kiểm soát tồn dư kháng sinh trong thực phẩm có nguồn gốc động vật theo qui

định số 2002/657/EC (bài tổng hợp) Tạp chí KHKT Nông

nghiệp, ĐHNN I, Tập V, Số 1/2007; Trang 24-30.

http://www.hua.edu.vn/tc_khktnn/default.asp?i d=11&ID_S=20

Chuẩn bị thực hiện

Nguyên liệu và hoá chât

- Dung dịch chuẩn (dung môi, chất chuẩn)

- Giống vi sinh vật: Bacillus subtilis BGA

- Môi trường nuôi cấy

Standard II Nutrient Agar for microbiology

- Mẫu “trắng”

- Dextrose, methanol, NH 4OH 2M, NaOH 1M, HCl 1 và 2M.

- Trimethoprime (TMP) 1 mg/ml

- Đĩa giấy đường kính 12 mm

- Đĩa Petri

- Acetonitrile, Acetone

Dụng cụ

p Micropipet

p Cân phân tích (gam, mg, µg)

p Nồi hấp tiệt trùng

p Nồi hấp cách thuỷ à45-47°C

p Vortex

p Máy lắc đảo đầu

p Ly tâm (2000-6000 vòng/phút)

p Hệ thống bay hơi (ly tâm chân không or thổi Nitơ)

p Tủ ấm 30°C

Chuẩn bị môi trường (1 l ít)

liên tục, cẩn thận khi sắp sôi)

trữà90°C trong 3h, làm nguộià47°C khoảng 30 phút)

Chuẩn bị môi trường (1 l ít)

pH=7,2±0,1 ở 25°C bằng HCl hoặc NaOH 1M

µl dung dịch huyền phù B.subtilis được pha loãng theo hướng dẫn à lắc đều

được bảo quản ở 4°C tối đa 1 tuần (úp nắp xuống)